發(fā)布時間：2018-06-20 09:08

  本文選題：丙泊酚 + 后處理�。� 參考：《天津醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：臨床工作中神經(jīng)外科手術(shù)、腦動脈瘤切除術(shù)以及心跳驟停等可導致腦缺血再灌注損傷,患者的生存質(zhì)量受到嚴重影響。對于腦缺血高�；颊�,如何合理有效的選擇麻醉藥物是需要麻醉醫(yī)生慎重思考的問題。丙泊酚是臨床常用的靜脈麻醉藥。能夠降低腦氧代謝率、顱內(nèi)壓,且具有抗氧化和抑制細胞凋亡的作用,從而能夠減輕腦缺血再灌注損傷。課題組前期研究工作發(fā)現(xiàn),丙泊酚后處理對缺血再灌注損傷具有保護作用,其保護機制與興奮性谷氨酸受體(a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor, AMPAR)受體有關(guān)。近年來,越來越多的學者認同缺血再灌注損傷以及氧糖剝奪(Oxygen and Glucose Deprivation, OGD)引起的損傷為興奮性毒性損傷,是機體興奮-抑制平衡被打破造成。GABAa受體作為成熟哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的抑制性受體,鉀氯共轉(zhuǎn)運體(K+-Cl-cotransporter, KCC2)是保證GABAA受體介導抑制性突觸后傳遞的重要前提條件,但該通路是否參與了丙泊酚后處理的腦保護機制尚不清楚。本研究旨在探討在離體海馬腦片氧糖剝奪損傷中,丙泊酚后處理是否對具有保護作用,并進一步探討KCC2-GABAA受體通路調(diào)控機制,從而為臨床上圍手術(shù)期腦缺血人群麻醉藥物的合理選擇提供理論依據(jù)。 方法：本課題采用離體海馬腦片建立氧糖剝奪、復糖復氧模型,模擬在體缺血再灌注損傷。實驗主要分三部分進行,第一部分,探討丙泊酚后處理對氧糖剝奪海馬腦片的保護作用。首先建立氧糖剝奪模型,篩選合適的氧糖剝奪時間。選取7min,10min,12min,15min作為氧糖剝奪處理時間,分別記做O1-04組,處理相應(yīng)時間后復糖復氧孵育1h。采用全細胞膜片鉗技術(shù)誘發(fā)記錄動作電位(AP),以評價不同時程OGD對CA1區(qū)錐體神經(jīng)元興奮性的影響。然后取54張海馬腦片,采用隨機數(shù)字表法,將其分為3組(n=12)：對照組(C組)置于正常人工腦脊液中培養(yǎng)7min+1h; OGD組置于持續(xù)通以95%N2的無糖人工腦脊液中孵育7min,然后放入正常人工腦脊液中孵育1h；丙泊酚后處理組(P組)給予OGD7min后轉(zhuǎn)入含丙泊酚濃度為1.2μg/ml的人工腦脊液中孵育1h。采用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄白發(fā)興奮性突觸后電流(spontaneous ExcitatoryPostsynaptic Currents, sEPSC, sEPSC)和自發(fā)抑制性突觸后電流(spontaneous Inhibitory Postsynaptic Currents, sIPSC)的幅值和頻率,探討丙泊酚后處理對海馬OGD后CA1區(qū)神經(jīng)元突觸傳遞的影響。碘化丙啶染色比較各組之間腦片的損傷程度。第二部分,探討GABAA受體在丙泊酚后處理中的作用。72張腦片隨機分為四組(n=18)：對照組C組、OGD組、丙泊酚后處理組P組,GABAA受體抑制劑組P+Bic組。采用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元中GABAA受體介導的微小抑制性突觸后電流(mininature Inhibitory Postsynaptic Current, mIPSC)幅值及頻率的變化,碘化丙啶染色評價海馬CA1區(qū)細胞損傷情況,以及氯離子染色測定CA1區(qū)錐體神經(jīng)元內(nèi)氯離子濃度的改變。第三部分,加入KCC2激動劑NEM,主要分為六組：對照組C組、OGD組、丙泊酚后處理組P組,C+NEM組、OGD+NEM組P+NEM組(n=24),以研究KCC2-GABAA受體在丙泊酚后處理腦保護中的調(diào)控作用。采用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄mIPSC,離子染色測定CA1區(qū)錐體神經(jīng)元內(nèi)氯離子濃度的改變,Western Blots法測定KCC2在海馬細胞的表達情況,RT-PCR法測定KCC2在海馬細胞轉(zhuǎn)錄水平的改變。 結(jié)果：第一部分：在探索OGD模型適宜時間過程中,與C1組比較,僅01組誘發(fā)動作電位的頻率降低(P0.05),02和03組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；而與01組比較,02、03組頻率升高(P0.05),可能是由于OGD造成的膜電位改變更接近于鈉離子平衡電位,損傷較為嚴重。故選取7min作為OGD時間。與Con組相比,OGD組和Pro+OGD組sEPSC的幅值和頻率升高,sIPSC的幅值和頻率降低,熒光強度增加,細胞凋亡增多(P0.05)；與OGD組比較,Pro+OGD組sEPSC的幅值和頻率降低,sIPSC的幅值和頻率相對升高細胞凋亡減少(P0.05)。 第二部分：與C組比較,其余三組mIPSC幅值和頻率均降低,PI熒光強度增加,細胞凋亡增多,細胞內(nèi)氯離子濃度升高(P0.05)；與OGD組比較,P組mIPSC幅值和頻率均升高,PI熒光強度降低,細胞凋亡減少,細胞內(nèi)氯離子濃度降低(P0.05)；P+Bic組與OGD組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 第三部分：與C組相比,OGD組、P組mIPSC幅值和頻率均降低,細胞內(nèi)氯離子濃度升高,KCC2表達水平均降低(P0.05)；與OGD組相比,P組mIPSC幅值和頻率升高,細胞內(nèi)氯離子濃度降低,KCC2表達水平升高(P0.05)；各組分別加入KCC2激動劑NEM后仍保持上述趨勢。 結(jié)論：丙泊酚后處理對離體海馬腦片氧糖剝奪損傷具有保護作用,神經(jīng)元性鉀氯共轉(zhuǎn)運體KCC2的上調(diào)以維持GABAA受體的抑制性受體特性在丙泊酚后處理中發(fā)揮了重要作用。
[Abstract]:Objective : To study the protective effect of propofol on ischemia - reperfusion injury in patients with high risk of cerebral ischemia - reperfusion injury . It is found that the post - treatment of propofol has protective effect on ischemia - reperfusion injury .

Methods : The oxygen - sugar deprivation and complex - sugar complex oxygen model was established in this study . The protective effects of propofol on brain slices in CA1 pyramidal neurons were studied .
The effect of propofol on synaptic transmission in CA1 region of hippocampal CA1 region was studied by using whole cell patch clamp technique .

Results : In the first part , in the course of exploring OGD model , only the frequency of action potential decreased ( P0.05 ) compared with C1 group , and there was no significant difference between the 02 and 03 groups ( P0.05 ) .
Compared with Con group , the amplitude and frequency of sEPSC increased , the amplitude and frequency of sIPSC decreased , the fluorescence intensity increased and the apoptosis increased ( P0.05 ) .
Compared with the OGD group , the amplitude and frequency of sEPSC in Pro + OGD group decreased , and the amplitude and frequency of sIPSC increased relative to that of OGD group ( P0.05 ) .

The second part : Compared with group C , the amplitude and frequency of the remaining three groups of mIPSC decreased , PI fluorescence intensity increased , cell apoptosis increased , and the intracellular chloride ion concentration increased ( P0.05 ) ;
Compared with OGD group , the amplitude and frequency of mIPSC increased , PI fluorescence intensity decreased , cell apoptosis was decreased , and the intracellular chloride ion concentration decreased ( P0.05 ) .
There was no significant difference between the P + Bic group and the OGD group ( P0.05 ) .

The third part : Compared with group C , the amplitude and frequency of mIPSC in the OGD group and P group decreased , and the concentration of chloride ion in the cells increased , and the expression level of KCC decreased ( P0.05 ) .
Compared with the OGD group , the amplitude and frequency of mIPSC increased in the P group , the concentration of chloride ion in the cells decreased , and the expression level of KCC increased ( P0.05 ) .
The trend was maintained after NEM was added to each group .

Conclusion : Post - treatment of propofol has protective effect on oxygen - glucose deprivation injury in isolated hippocampal slices , and the up - regulation of the neuronal potassium - chlorine co - transporter Kc2 plays an important role in the post - treatment of propofol .
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R614

【共引文獻】

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本文編號：2043749