本文選題：顱內(nèi)動(dòng)脈瘤 + 血流動(dòng)力學(xué)��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:顱內(nèi)動(dòng)脈瘤(intracranial aneurysm,IA)是由于顱內(nèi)血管結(jié)構(gòu)異常改變而產(chǎn)生的管壁瘤樣凸起,IA發(fā)病率較高(9%~15%[1]),且具有較高的破裂概率。據(jù)統(tǒng)計(jì),每年每10萬(wàn)人中有15人會(huì)發(fā)生蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)[2],而75%的SAH是由于IA破裂導(dǎo)致的[3]。IA破裂SAH可引發(fā)遲發(fā)性腦血管痙攣(delayed cerebral vasospasm,DCVS)等嚴(yán)重并發(fā)癥,部分未破裂IA可產(chǎn)生占位效應(yīng)、血栓形成等并發(fā)癥。由于IA在破裂前無(wú)明顯臨床癥狀,具有隱匿發(fā)病及破裂后高致死致殘率的特點(diǎn),故成為危害人類健康的重大疾病。但由于種種原因限制,IA形成具體病理生理機(jī)制尚不完善,臨床上治療顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的方法受到很大限制,所以對(duì)IA形成病理機(jī)制的進(jìn)一步探索及干預(yù)成為了目前研究的重點(diǎn)。目前研究觀點(diǎn)認(rèn)為血管內(nèi)流體力學(xué)的改變是動(dòng)脈瘤形成的重要因素之一。血管壁面剪切應(yīng)力(Wall Shall Stress,WSS)改變可導(dǎo)致血管壁局部炎癥反應(yīng)及管壁結(jié)構(gòu)重塑,WSS變化刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞(Vascular endothelial cells)產(chǎn)生多種炎性介質(zhì)參與降低血管壁承受張力的能力,從而引起動(dòng)脈瘤的形成。其中Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR-4)相關(guān)的炎性通路在顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要的作用[4]。研究表明,甘草酸二銨(Diammonium glycyrrhizinate,DG)具有抗炎、抗氧化及凋亡等效果,但DG是否能干預(yù)動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展尚未見報(bào)道。本研究運(yùn)用雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎法制作兔基底動(dòng)脈瘤模型,并對(duì)動(dòng)物給予口服甘草酸二銨,采用計(jì)算機(jī)流體力學(xué)(Computer fluid dynamics,CFD)觀察動(dòng)脈瘤發(fā)生發(fā)展的過程中WSS的變化、探索流體力學(xué)與IA形成分子機(jī)制的相關(guān)性及甘草酸二銨干預(yù)IA形成的機(jī)制,為預(yù)防動(dòng)脈瘤的發(fā)生鋪墊理論基礎(chǔ)。方法:130只新西蘭大白兔隨機(jī)分為4組,具體為正常對(duì)照組(A組)、手術(shù)組(B組)、手術(shù)+生理鹽水對(duì)照組(C組)及手術(shù)+甘草酸二銨干預(yù)組(D組)。每組根據(jù)觀察時(shí)間點(diǎn)分為4個(gè)亞組(2w、4w、8w、16w)。其中正常對(duì)照組不做任何處理,其余組別通過雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎法制作動(dòng)物基底動(dòng)脈尖部動(dòng)脈瘤模型,非干預(yù)組術(shù)后正常喂養(yǎng),甘草酸二銨干預(yù)組從造模后每個(gè)月第一個(gè)星期內(nèi)每天采用耳緣靜脈給藥的方式給予甘草酸二銨20mg,生理鹽水對(duì)照組每天僅給予同等劑量生理鹽水。依據(jù)分組時(shí)間結(jié)點(diǎn)對(duì)各組行顱內(nèi)血管多普勒(TCD)及磁共振血管成像(MRA)檢查,對(duì)比各組基底動(dòng)脈速度及管徑變化,行計(jì)算機(jī)流體力學(xué)分析(CFD),觀察各組壁面剪切應(yīng)力(WSS)變化。采用過量麻醉法處死動(dòng)物,取出基底動(dòng)脈標(biāo)本,采用蘇木素—伊紅(HE)染色觀察每組基底動(dòng)脈血管形態(tài),馬松(Masson)染色觀察基底動(dòng)脈中彈力層變化,EVG染色觀察每組基底動(dòng)脈壁內(nèi)彈力層變化,免疫組化檢測(cè)各組Toll樣受體4(TLR-4)、核轉(zhuǎn)因子κβ(NF-κB)、血管粘附因子1(VCAM-1)、B淋巴細(xì)胞瘤-2(BCL-2)的表達(dá)情況。免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)各組上述蛋白的定量表達(dá)情況。計(jì)量資料均數(shù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(sx±)表示,多組樣本均數(shù)間的比較,血流速度、血管口徑、壁面剪切應(yīng)力、免疫組化、western blot結(jié)果均采用單因素方差分析,方差齊性檢驗(yàn)采用Levene法,若方差齊采用LSD-t法檢驗(yàn),如果方差不齊則采用Kruskal-Wallis法檢驗(yàn),以P0.05為顯著差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.模型顱內(nèi)血管多普勒結(jié)果:A組基底動(dòng)脈血流速度平均值為(29.560±1.598)cm/s,B組分別為(173.120±6.681、217.620±12.992、163.490±5.227、131.170±6.808)cm/s,C組分別為(176.590±7.271、211.330±11.407、164.420±4.392、127.970±3.247)cm/s,D組分別為(178.580±6.014、212.420±12.825、164.380±6.770、130.880±4.862)cm/s,D組與C組(P=0.826)、D組與B組(P=0.975)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A組與各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=67.517,P=0.000)。2.模型基底動(dòng)脈尖部MRA測(cè)量管徑結(jié)果:A組基底動(dòng)脈管徑平均值為(0.835±0.059)mm,B組分別為(0.893±0.100、2.034±0.185、2.723±0.192、3.126±0.473)mm,C組分別為(0.882±0.057、1.923±0.125、2.747±0.146、3.073±0.124)mm,D組分別為(0.879±0.089、1.930±0.100、2.790±0.100、3.136±0.526)mm。D組與C組(P=0.515)、D組與B組(P=0.245)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A組與各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=21.215,P=0.000)。3.模型計(jì)算機(jī)流體力學(xué)分析結(jié)果:A組基底動(dòng)脈尖部壁面剪切應(yīng)力平均值為(36.621±2.630)Pa,B組分別為(153.190±19.988、247.597±21.274、122.737±13.268、95.562±1.524)Pa,C組分別為(167.015±13.828、235.850±7.501、130.124±14.001、94.312±1.482)Pa,D組分別為(161.07±19.837、218.435±25.587、142.590±18.630、94.726±3.167)Pa。D組與C組(P=0.626)、D組與B組(P=0.751)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A組與各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=14.806,P=0.000)。4.基底動(dòng)脈管壁免疫組化表達(dá)結(jié)果:BCL-2:A組平均表達(dá)陽(yáng)性率為(33.638±2.688)%,B組分別為(43.812±3.319、31.285±1.152、17.350±1.345、8.588±1.077)%,C組分別為(44.712±3.264、32.690±1.682、17.541±1.016、8.686±1.197)%,D組分別為(35.206±3.406、39.620±3.437、32.838±1.531、32.538±2.516)%,D組與C組(P=0.000)、D組與B組(P=0.000)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,D組與A組(P=0.648)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;TLR-4:A組平均表達(dá)陽(yáng)性率為(10.159±1.306)%,B組分別為(21.571±1.783、30.566±2.096、47.084±2.056、64.442±2.456)%,C組分別為(22.043±1.234、30.692±1.507、47.187±1.862、64.564±2.269)%,D組分別為(14.282±2.259、15.302±1.061、22.351±3.315、22.411±3.475)%,D組與C組(P=0.000)、D組與B組(P=0.000)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,D組與A組(P=0.077)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;NF-κB:A組平均表達(dá)陽(yáng)性率為(13.749±1.679)%,B組分別為(27.318±1.340、39.356±1.960、46.140±2.469、60.443±2.711)%,C組分別為(27.369±1.659、40.130±1.535、46.139±2.315、60.570±1.925)%,D組分別為(21.215±1.611、25.240±2.514、27.240±3.214、32.815±2.379)%,D組與C組(P=0.000)、D組與B組(P=0.000)、A組(P=0.000)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,B組與C組(P=0.916)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;VCAM1:A組平均表達(dá)陽(yáng)性率為(11.840±2.240)%,B組分別為(28.467±1.864、38.191±1.888、52.696±2.968、71.224±2.128)%,C組分別為(28.561±1.636、38.726±2.036、52.966±2.467、71.813±2.524)%,D組分別為(19.298±3.523、24.859±2.875、24.748±1.755、26.789±3.123)%,D組與C組(P=0.000)、D組與B組(P=0.000)、A組(P=0.011)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,B組與C組(P=0.900)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.免疫印跡western blot結(jié)果:BCL2蛋白表達(dá)灰度值為:A組(0.377±0.024),B組分別為(0.454±0.030、0.318±0.010、0.225±0.030、0.117±0.004),,C組分別為(0.478±0.027、0.317±0.003、0.266±0.026、0.118±0.014),D組分別為(0.387±0.045、0.429±0.008、0.447±0.034、0.430±0.006),其中D組與A組(P=0.508)、B組與C組(P=0.718)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,D組與B組(P=0.002)、D組與C組(P=0.006)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;TLR-4蛋白表達(dá)灰度值為:A組(0.137±0.016),B組分別為(0.561±0.016、0.748±0.015、1.474±0.161、1.727±0.109),C組分別為(0.566±0.011、0.737±0.024、1.507±0.065、1.777±0.065),D組分別為(0.160±0.007、0.335±0.012、0.362±0.015、0.470±0.014),其中D組與A組(P=0.477)、B組與C組(P=0.911)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,D組與B組(P=0.000)、D組與C組(P=0.000)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;NF-κB蛋白表達(dá)灰度值為:A組(0.037±0.016),B組分別為(0.419±0.022、0.750±0.005、0.963±0.076、1.277±0.049),C組分別為(0.453±0.028、0.738±0.017、0.943±0.010、1.311±0.140),D組分別為(0.091±0.005、0.262±0.023、0.363±0.015、0.376±0.010),其中D組與A組(P=0.185)、B組與C組(P=0.935)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,D組與B組(P=0.000)、D組與C組(P=0.000)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;VCAM1蛋白表達(dá)灰度值為:A組(0.150±0.003),B組分別為(0.616±0.045、1.514±0.050、2.305±0.046、2.837±0.120),C組分別為(0.616±0.045、1.547±0.005、2.251±0.104、2.771±0.064),D組分別為(0.228±0.004、0.333±0.017、0.777±0.058、0.705±0.043),其中D組與A組(P=0.428)、B組與C組(P=0.941)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,D組與B組(P=0.000)、D組與C組(P=0.000)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;結(jié)論:1.采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法制作兔顱內(nèi)動(dòng)脈瘤模型具有較高的成功率,結(jié)扎后兔基底動(dòng)脈血流速度上升、管徑增粗,動(dòng)脈瘤形成前基底動(dòng)脈分叉部壁面剪切應(yīng)力持續(xù)性增高,血管壁結(jié)構(gòu)破壞,內(nèi)膜完整性消失、中膜彈力層薄弱直至消失,動(dòng)脈瘤樣凸起形成后,瘤體內(nèi)壁面剪切應(yīng)力有所下降,瘤頸部仍受到高壁面剪切應(yīng)力沖擊,進(jìn)一步破壞周圍管壁完整性致使瘤體擴(kuò)大。2.在血流動(dòng)力學(xué)改變致使動(dòng)脈瘤形成的全過程中基底動(dòng)脈尖部TLR-4表達(dá)持續(xù)性上調(diào),且TLR-4相關(guān)炎性通路中NF-κB、VCAM-1表達(dá)均上調(diào),而BCL-2表達(dá)下調(diào)。3.在血流動(dòng)力學(xué)改變致使動(dòng)脈瘤發(fā)生發(fā)展的全過程中,甘草酸二銨可抑制TLR-4及其下游的NF-κB、VCAM-1的表達(dá),并且抑制BCL-2表達(dá)下調(diào),降低細(xì)胞的凋亡,從而減少動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)的破壞,起到干預(yù)動(dòng)脈瘤形成的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2038512