本文選題：益氣提升法 + 內(nèi)痔��； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：人類于痔的最早記錄出現(xiàn)在公元前770年,但是直到今天,痔的本質(zhì)是什么?在學(xué)界內(nèi)部仍處在無(wú)休無(wú)止的爭(zhēng)論中,我們不得不面對(duì)的是：我們對(duì)于痔的主要發(fā)病機(jī)理尚未完全確定。隨著科學(xué)的與時(shí)俱進(jìn),不斷有學(xué)者致力于痔的討論和研究,通過努力工作、有效的研究和探討,直到上個(gè)世紀(jì)70年代,我們方才提出具有劃時(shí)代意義的“肛墊下移學(xué)說”,并在之后的研究中進(jìn)一步豐富和發(fā)展了這一學(xué)說。 盡管痔“肛墊理論”是目前多數(shù)學(xué)者所承認(rèn)的,但依據(jù)目前的研究基礎(chǔ),仍無(wú)法解釋痔的確切本質(zhì),導(dǎo)致病變的肛墊是什么?到目前為止的研究理論尚不能對(duì)這一問題作出有針對(duì)性的回答。因此,目前關(guān)于“肛墊下移學(xué)說”的研究只是處于最初的理論探討階段,痔組織病變的分子生物學(xué)研究更是缺乏有力的臨床及實(shí)驗(yàn)的證明,對(duì)肛墊特征的認(rèn)識(shí)還不能真正地指導(dǎo)臨床應(yīng)用。 本論文在益氣提升法治療脫垂性內(nèi)痔取得良好臨床療效的基礎(chǔ)上,應(yīng)用分子生物學(xué)研究的手段,測(cè)定不同脫垂程度的內(nèi)痔標(biāo)本中的Fibulin家族(Fibulin-3、 Fibulin-5) mRNA及蛋白的表達(dá)量,通過研究不同程度脫垂性內(nèi)痔組織中Fibulin家族mRNA及蛋白的表達(dá)水平的差異,探討Fibulin蛋白家族與脫垂性內(nèi)痔發(fā)生、發(fā)展的內(nèi)在關(guān)聯(lián)性。 同時(shí),本研究應(yīng)用臨床分析研究和分子生物學(xué)研究的手段,在補(bǔ)中益氣顆粒干預(yù)后,分析研究?jī)?nèi)痔組織中Fibulin蛋白家族mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)表化,研究益氣提升法治療脫垂眭內(nèi)痔的作用機(jī)理,揭示益氣提升法通過延緩Fibulin蛋白家族衰老、治療脫垂性痔病的作用通路。 本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)出發(fā)點(diǎn)在于為肛墊下移學(xué)說尋求分子生物學(xué)的證據(jù)；為中醫(yī)藥理論診斷、治療脫垂性內(nèi)痔提供現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。 目的： 本研究旨在通過以下兩個(gè)途徑： (1)途徑一、探討不同程度脫垂性內(nèi)痔組織中抗衰老蛋白Fibulin家族(注：Fibulin-3及Fibulin-5) mRNA及蛋白的表達(dá)水平； (2)途徑二、在益氣提升法干預(yù)后,研究病例的Ⅱ度內(nèi)痔組織中Fibulin蛋白家族mRNA表達(dá)的變化。 本研究期望達(dá)到兩研究個(gè)目的： (1)目的一、探討Fibulin蛋白家族與脫垂性內(nèi)痔發(fā)生、發(fā)展是否存在關(guān)聯(lián)性?如果存在關(guān)聯(lián)性,那么存在怎樣的關(guān)聯(lián)性? (2)目的二、深入研究益氣提升法治療脫垂性內(nèi)痔的作用機(jī)理：益氣提升法是否通過延緩Fibulin蛋白家族衰老、起到治療脫垂性內(nèi)痔的作用?從而為進(jìn)一步闡明脫垂性內(nèi)痔的發(fā)病機(jī)制尋找突破口,同時(shí)為治療和預(yù)防該病明確機(jī)制。 方法： 實(shí)驗(yàn)(一) 1.分組方案 研究對(duì)象來源于2010年1月～2013年12月廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院肛腸科住院部及門診患者,共計(jì)64例。其中Ⅱ度內(nèi)痔患者21例、Ⅲ度內(nèi)痔患者22例、Ⅳ度內(nèi)痔患者21例。與此同時(shí),選擇低位單純性肛瘺病的22例患者,作為對(duì)照組。 2.標(biāo)本的采集與提取 在Ⅱ度、Ⅲ度、Ⅳ度內(nèi)痔患者接受“內(nèi)痔切除術(shù)”后,留取切除的內(nèi)痔組織作為標(biāo)本；低位單純性肛瘺患者在行“低位肛瘺切除術(shù)”過程中,提取患者未發(fā)生病變的“肛墊”的正常組織作為對(duì)比標(biāo)本。上述實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組標(biāo)本取材長(zhǎng)度均為0.5cm,離體30min內(nèi)無(wú)菌條件下立即至于-80℃冰箱或液氮中保存?zhèn)溆谩?3.實(shí)驗(yàn)方法 ①總RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄 ②實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Fibulin-3mRNA水平 ③免疫蛋白印跡法檢測(cè)Fibulin-3蛋白表達(dá) 4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。各組Fibulin-3表達(dá)結(jié)果之間進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及單因素方差分析。PO.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PO.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)(二) 1.分組方案 研究對(duì)象來源于2010年1月～2013年12月廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院肛腸科住院部及門診患者,共計(jì)62例。其中Ⅱ度內(nèi)痔患者納入20例、Ⅲ度內(nèi)痔患者納入20例、Ⅳ度內(nèi)痔患者納入22例。同時(shí)期,選擇低位單純性肛瘺病的17例患者,作為對(duì)照組。 2.標(biāo)本的采集與提取 在Ⅱ度、Ⅲ度、Ⅳ度內(nèi)痔患者接受“內(nèi)痔切除術(shù)”后,留取切除的內(nèi)痔組織作為標(biāo)本；低位單純性肛瘺患者在行“低位肛瘺切除術(shù)”過程中,提取患者未發(fā)生病變的“肛墊”的正常組織作為對(duì)比標(biāo)本。上述實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組標(biāo)本取材長(zhǎng)度均為0.5cm,離體30min內(nèi)無(wú)菌條件下立即至于-80℃冰箱或液氮中保存?zhèn)溆谩?3.實(shí)驗(yàn)方法 ①總RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄 ②實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Fibulin-5mRNA水平 ③免疫蛋白印跡法檢測(cè)Fibulin-5蛋白表達(dá) 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。各組Fibulin-5表達(dá)結(jié)果之間進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及單因素方差分析。PO.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PO.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)(三) 1.分組方案 研究對(duì)象來源于2010年-2013年廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院肛腸科住院部及門診患者,共計(jì)49例。全部患者均診斷為Ⅱ度內(nèi)痔。將患者隨機(jī)分為四組(治療組3組；對(duì)照組1組)。其中,Ⅱ度內(nèi)痔治療1組(簡(jiǎn)稱“A組”)：n=11例；Ⅱ度內(nèi)痔治療2組(簡(jiǎn)稱“B組”),n=12例；Ⅱ度內(nèi)痔治療3組(簡(jiǎn)稱“C組”),n=9例。對(duì)照組1組(簡(jiǎn)稱“D”)：n=7例。 2.標(biāo)本的采集與提取 各組干預(yù)方法如下。A組：服用補(bǔ)中益氣顆粒；B組：口服草木犀流浸液片；C組：服用補(bǔ)中益氣顆粒+草木犀流浸液片。D組僅作空白對(duì)照。以2W為一療程,全部病例治療于2個(gè)療程后結(jié)束。療程停止后第2天,各組患者進(jìn)行臨床觀察及數(shù)據(jù)分析。安排患者在局部浸潤(rùn)麻醉下行“內(nèi)痔切除術(shù)”,并對(duì)各病例術(shù)后留取的內(nèi)痔標(biāo)本進(jìn)行Fibulin-3mRNA、Fibulin-5mRNA表達(dá)的測(cè)試。 3.實(shí)驗(yàn)方法 ①檢測(cè)安全性指標(biāo)：一般體檢項(xiàng)目,血、尿、大便常規(guī),肝、腎功能檢查,心電事件記錄檢查； ②檢測(cè)療效性指標(biāo)1：臨床表現(xiàn)的變化,計(jì)算治療組(“A+B+C”組)和“D組”的有效率； ③檢測(cè)療效性指標(biāo)2：檢測(cè)各組樣本組織中Fibulin-3mRNA表達(dá)水平；檢測(cè)各組樣本組織中Fibulin-5mRNA表達(dá)水平。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)數(shù)資料用X2檢驗(yàn),等級(jí)資料及百分率的比較用Ridit分析,計(jì)量資料用方差分析、t檢驗(yàn)。應(yīng)用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果： 結(jié)果(一) 1、將各組樣本對(duì)象Fibulin-3mRNA最終的表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比,包含Ⅱ度內(nèi)痔、Ⅲ度內(nèi)痔及Ⅳ度內(nèi)痔在內(nèi)的“內(nèi)痔組”和“對(duì)照組”手術(shù)標(biāo)本中都可以檢測(cè)到Fibulin-3mRNA的表達(dá)(Fibulin-3mRNA表達(dá)≠0)�！皟�(nèi)痔組”標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量為0.68±0.37,“對(duì)照組”標(biāo)本Fibulin-3mRNA表達(dá)量為0.954-0.43,對(duì)比發(fā)現(xiàn)：“內(nèi)痔組”標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量處于較低水平,’經(jīng)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、在“內(nèi)痔組”中：Ⅱ度內(nèi)痔組的Fibulin-3mRNA的表達(dá)量為0.69±0.17、Ⅲ度內(nèi)痔組的Fibulin-3mRNA的表達(dá)量為0.56±0.15、Ⅳ度內(nèi)痔組的Fibulin-3mRNA的表達(dá)量為0.42±0.22。各組比較,隨臨床脫垂程度增加Fibulin-3mRNA表達(dá)量有逐漸降低的趨勢(shì),而且各組間兩兩比較的結(jié)果顯示,每?jī)山M間(Ⅱ度內(nèi)痔組與Ⅲ度內(nèi)痔組之間；Ⅲ度內(nèi)痔組與Ⅳ度內(nèi)痔組之間；Ⅱ度內(nèi)痔組與Ⅳ度內(nèi)痔組之間)對(duì)比,各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、將各組中樣本對(duì)象Fibulin-3的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比,“內(nèi)痔組”和“對(duì)照組”手術(shù)標(biāo)本中都出現(xiàn)了Fibulin-3蛋白的表達(dá)�！皩�(duì)照組”標(biāo)本中Fibulin-3蛋白的表達(dá)量為1.15±0.53；“內(nèi)痔組”切除標(biāo)本Fibulin-3蛋白表達(dá)量為0.77±0.47�！皟�(nèi)痔組”的Fibulin-3的蛋白表達(dá)處于較低的水平,經(jīng)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、不同“內(nèi)痔組”的Fibulin-3蛋白的表達(dá)量是不同的：①Ⅱ度內(nèi)痔組中Fibulin-3的蛋白表達(dá)量為0.79±0.35；②Ⅲ度內(nèi)痔組中Fibulin-3的蛋白表達(dá)量為O.57±O.37；③Ⅳ度內(nèi)痔組中Fibulin-3RNA的蛋白表達(dá)量為0.36±0.29。各組間兩兩比較的結(jié)果提示,每?jī)山M間(Ⅱ度內(nèi)痔組與Ⅲ內(nèi)痔組；Ⅲ度內(nèi)痔組與Ⅳ度內(nèi)痔組；Ⅱ度內(nèi)痔組與Ⅳ度內(nèi)痔組)對(duì)比,各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。 結(jié)果(二) 1、將各研究組中樣本對(duì)象Fibulin-5mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比：發(fā)現(xiàn)包括Ⅱ度內(nèi)痔、Ⅲ度內(nèi)痔及Ⅳ度內(nèi)痔在內(nèi)的“內(nèi)痔組”和“對(duì)照組”手術(shù)標(biāo)本中均可以檢測(cè)到Fibulin-5mRNA的表達(dá)。其中,“內(nèi)痔組”標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量為0.32±0.22,“對(duì)照組”標(biāo)本Fibulin-5mRNA表達(dá)量為0.83±O.31,“內(nèi)痔組”標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量較低,經(jīng)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、對(duì)于“內(nèi)痔組”來講,不同組別的Fibulin-5mRNA的表達(dá)量也是區(qū)別明顯的：①Ⅱ度內(nèi)痔組中Fibulin-5mRNA的表達(dá)量為O.52±0.27；②Ⅲ度內(nèi)痔組中Fibulin-5mRNA的表達(dá)量為0.37±0.18；③Ⅳ度內(nèi)痔組中Fibulin-5mRNA的表達(dá)量為O.23±0.20。各組間兩兩比較的結(jié)果同樣顯示,每?jī)山M間(Ⅱ度內(nèi)痔組與Ⅲ度內(nèi)痔組；Ⅲ度內(nèi)痔組與Ⅳ度內(nèi)痔組；Ⅱ度內(nèi)痔組與Ⅳ度內(nèi)痔組)對(duì)比,各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、將各組中樣本對(duì)象Fibulin-5的蛋白表達(dá)進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：“內(nèi)痔組”和“對(duì)照組”手術(shù)標(biāo)本中都出現(xiàn)了Fibulin-5蛋白的表達(dá)。其中,“對(duì)照組”標(biāo)本中Fibulin-5蛋白的表達(dá)水平為1.10±0.47；“內(nèi)痔組”標(biāo)本Fibulin-5蛋白表達(dá)量為0.58±0.45,“內(nèi)痔組”的Fibulin-5蛋白表現(xiàn)為低表達(dá)水平,經(jīng)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、在不同的“內(nèi)痔組”,Fibulin-5蛋白的表達(dá)量也不同：①Ⅱ度內(nèi)痔組中Fibulin-5的蛋白表達(dá)量為0.79±0.33；②Ⅲ度內(nèi)痔組中Fibulin-5的蛋白表達(dá)量為O.61±O.21；③Ⅳ度內(nèi)痔組中Fibulin-5的蛋白表達(dá)量為0.44±0.26。每?jī)山M間對(duì)比,各組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果(三) 1、應(yīng)用了不同藥物干預(yù)后的各“治療組”與空白“對(duì)照組”臨床療效比較,“A組”(補(bǔ)中益氣顆粒)有效率為81.8%,“B組”(草木溪浸液片)有效率為75.0%,“C組”(補(bǔ)中益氣顆粒+草木犀流浸液片)有效率為100.0%。將“A組”、“B組”、“C組”作為觀察對(duì)象,計(jì)算Ⅱ度內(nèi)痔治療組(總)有效率為84.4%,高于“D組”的有效率23.33%,兩組治療有效率對(duì)比,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2、各Ⅱ度內(nèi)痔治療組和對(duì)照組標(biāo)本組織中均可以獲得到Fibulin-3mRNA的穩(wěn)定的表達(dá)：“A組”標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量為0.74±0.18；“B組”標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量為0.68±0.24；“C組”標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量為0.82±0.14,“D組”內(nèi)痔標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量為0.53±0.17。 另外,“D組”分別與“A組”、“B組”、“C組”兩兩進(jìn)行比較,“D”組組織中Fibulin-3mRNA表達(dá)呈現(xiàn)低表達(dá)狀態(tài)：“D組”中樣本的Fibulin-3mRNA表達(dá)量與“A組”、“B組”、“C組”標(biāo)本中Fibulin-3mRNA表達(dá)量均具有差異(經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)),其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3、各Ⅱ度內(nèi)痔治療組和對(duì)照組標(biāo)本中均能夠檢測(cè)到Fibulin-5mRNA,其中：“A組”標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量為O.50±0.14,“B組”標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量為O.47±0.15；“C組”標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量為O.65±O.19,“D組”標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量為0.44±O.11。 此外,“D組”分別與“A組”、“B組”、“C組”兩兩進(jìn)行比較,結(jié)果顯示“D組”中Fibulin-5mRNA表達(dá)呈現(xiàn)“低表達(dá)狀態(tài)”：“D組”中樣本的Fibulin-5mRNA表達(dá)量與各個(gè)治療組標(biāo)本中Fibulin-5mRNA表達(dá)量均存在差異性(經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)),其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 結(jié)論(一一) Fibulin-3的缺失可能會(huì)導(dǎo)致MMPs活性增高,而MMPs的活性增高是加快彈性纖維崩解、局部組織彈性力下降,進(jìn)而促使脫垂性內(nèi)痔的發(fā)生的重要原因之一。 結(jié)論(二) Fibulin-5的缺失可能會(huì)導(dǎo)致彈性蛋白合成障礙,而彈性纖維合成障礙是最終導(dǎo)致彈性纖維病變、盆底起支撐作用的結(jié)構(gòu)松弛、局部組織彈性力下降,進(jìn)而促使脫垂性內(nèi)痔的發(fā)生的重要原因之一。 結(jié)論(三) 包括益氣提升法在內(nèi)的不同干預(yù)手段可能是通過提高Fibulin-3mRNA(及Fibulin-5mRNA)的表達(dá)最終發(fā)揮治療作用的。 結(jié)論(四) 提高Fibulin-3mRNA(及Fibulin-5mRNA)的表達(dá)可能是治療有脫垂表現(xiàn)的Ⅱ度內(nèi)痔的一種手段。 結(jié)論(五) 不同的治療方案對(duì)提高Fibulin-3mRNA (及Fibulin-5mRNA)的表達(dá)存在差異性。 結(jié)論(六) 以脫垂癥狀為主要表現(xiàn)的Ⅱ度內(nèi)痔有一定的自愈性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R266

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2012686