本文選題：壬基酚 + 高脂高糖飲食��； 參考：《遵義醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：非酒精性脂肪肝(NAFLD)在全球范圍內廣泛流行,發(fā)病率呈不斷上升趨勢,且病因不明。為探討環(huán)境因素(壬基酚)和不良生活方式(高脂高糖飲食)在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中的作用,本課題分為兩部分開展實驗研究。第一部分,針對常規(guī)飼料喂養(yǎng)的SD大鼠,采用灌胃暴露壬基酚(NP)連續(xù)90天,研究NP在環(huán)境暴露濃度下是否可導致大鼠NAFLD發(fā)生;第二部分,針對高脂高糖飼料喂養(yǎng)的SD大鼠,采用NP連續(xù)90天灌胃,觀察SD大鼠在高脂高糖飲食與NP共同作用下大鼠NAFLD發(fā)生情況,以及探討NP亞慢性暴露是否加重或促進高脂高糖飲食所致NAFLD的發(fā)生。并檢測與肝臟脂質合成相關基因、蛋白的表達,初步闡明NP致NAFLD的機制。第一部分NP亞慢性暴露對肝臟及功能的影響目的:探討NP亞慢性暴露是否誘發(fā)大鼠非酒精性脂肪肝形成。方法:40只清潔級SD大鼠(200±20)g,雌雄各半,購于第三軍醫(yī)大學大坪實驗動物中心(合格證號:(SCXK(渝)2012-0005))適應性喂養(yǎng)7天后隨機分成4組,即對照組(玉米油),低劑量組(0.02μg/kg NP),中劑量組(0.2μg/kg NP),高劑量組(2μg/kg NP)。連續(xù)灌胃染毒90 d,灌胃期間每周稱量體重1次,記錄飲食量和飲水量。于第10周末每組大鼠隨機選取4只進行肝臟超聲檢測,90 d后10%的水合氯醛麻醉后剖殺大鼠,腹主動脈取血分離血清用于肝功和血脂檢測,稱量肝臟質量并計算肝體指數(shù),每只大鼠取肝臟最大葉邊緣內側1 mm處組織3等份,1份固定于10%甲醛用于HE染色、其余2份組織凍存-80度用于實時熒光定量PCR檢測脂質代謝相關基因Fas,Srebp1,Ucp2的表達量,Western blot檢測c/EBPα、PPARγ表達。結果:各NP暴露組體重,攝食和飲水無明顯差異(P0.05)。超聲結果顯示,各組未見均未見明顯脂肪肝改變。HE染色發(fā)現(xiàn),僅高劑量NP組可見少量肝細胞脂肪變。肝功和血生化結果顯示,血清ALT,AST,TC,LDL-C沒有增加(P0.05)。RT-PCR結果顯示,中,高劑量NP暴露組脂質合成相關基因Fas,Ucp2,Srebp1 m RNA與對照組表達均上調(P0.05)。Western blot結果顯示,中、高劑量組脂質合成相關蛋白c/EBPα、PPARγ相對表達量明顯上調(P0.05)。結論:低劑量NP亞慢性暴露未致大鼠非酒精性脂肪肝形成,但可上調部分肝臟脂質合成代謝相關基因Fas,Ucp2,Srebp1和蛋白c/EBPα、PPARγ的表達。第二部分NP聯(lián)合高脂高糖飲食致大鼠非酒精性脂肪肝及機制研究目的:探討NP亞慢性暴露是否加重高脂高糖飲食所致NAFLD的發(fā)生。方法:40只清潔級SD大鼠(200±20)g,雌雄各半,購于第三軍醫(yī)大學大坪實驗動物中心(合格證號:(SCXK(渝)2012-0005))適應性喂養(yǎng)(100%基礎飼料)7天后隨機分成4組,即高脂高糖飲食對照組(玉米油),高脂高糖飲食+NP低劑量組(0.02μg/kg),高脂高糖飲食+NP中劑量組(0.2μg/kg),高脂高糖飲食+NP高劑量組(2μg/kg)。實驗期間每周稱重1次,記錄飲水、攝食量。第10周末每組隨機抽取4只大鼠進行肝臟彩色超聲檢查,出現(xiàn)強回聲區(qū)可判斷NAFLD模型建立成功。于第12周末對動物進行剖殺取材,10%的水合氯醛麻醉后,腹主動脈取血分離血清用于肝功和血脂檢測。稱量肝臟質量并計算肝體指數(shù),每只大鼠取肝臟最大葉邊緣內側1 mm處組織3等份,1份固定于10%甲醛用于HE染色、其余2份組織凍存-80度用于實時熒光定量PCR檢測脂質代謝相關基因Fas,Srebp1,Ucp2的表達量,Western blot檢測c/EBPα、PPARγ表達。結果:高脂高糖飲食對照及NP暴露全部發(fā)生脂肪肝,第12周高劑量組體重增加(P0.05),低、中劑量NP暴露組飲水量,中、高劑量飲食量顯著高于對照組(P0.05)。超聲結果顯示,各組均發(fā)現(xiàn)強回聲區(qū)域,提示有脂肪肝形成,且中,高劑量組回聲區(qū)強于對照組,高劑量組強于低劑量組。HE染色發(fā)現(xiàn),NP暴露組隨劑量增加大泡性脂肪變肝細胞逐漸增多。肝功和血生化結果顯示,高劑量組ALT,AST,TC,LDL-C血清含量均增加,中劑量組TG,TC,LDL-C含量血清含量增加(P0.05)。RT-PCR結果顯示,各NP暴露組Fas,Ucp2 m RNA表達量上調,中劑量Srebp1表達上調(P0.05)。Western blot結果顯示,除低劑量NP暴露組PPARγ外,其余各組c/EBPα、PPARγ蛋白相對表達量均升高(P0.05)。結論:NP可加重高脂高糖飲食致大鼠非酒精性脂肪肝效應,其機制主要可能與上調Srebp1,Fas,Ucp2 m RNA表達,增強c/EBPα、PPARγ表達,增加TG合成有關。
[Abstract]:Non-alcoholic fatty liver (NAFLD) is widely prevalent throughout the world. The incidence of nonalcoholic fatty liver disease is increasing and the cause is unknown. In order to explore the role of environmental factors (Ren Jifen) and bad lifestyle (high fat and high sugar diet) in the development of NAFLD, this subject is divided into two parts. SD rats were used for 90 days of gastric exposure to nonylphenol (NP) for 90 days. The second part, for SD rats fed with high fat and high sugar feed, was administered by NP for 90 days to observe the occurrence of NAFLD in rats with high fat and high sugar diet and NP, and to explore NP sub. Whether chronic exposure aggravates or promotes the occurrence of NAFLD caused by high fat and high sugar diet, and detects the genes related to liver lipid synthesis, protein expression, and preliminarily clarifies the mechanism of NAFLD induced by NP. The first part of the effect of subchronic NP exposure on liver and function: To explore whether or not NP subchronic exposure induces nonalcoholic fatty liver formation in rats. Method: 40 clean SD rats (200 + 20) g and half male and half female were bought at the center of experimental animal of Daping experiment in Third Military Medical University (certificate number: (SCXK (Yu) 2012-0005) for 7 days. The control group was randomly divided into 4 groups, namely the control group (corn oil), the low dose group (0.02 g/kg NP), the medium dose group (0.2 mu g/kg NP), and the high dose group (2 micron NP). Continuous intragastric intragastric poisoning 90 d, The weight of diet and drinking water were recorded 1 times a week. At the end of the tenth week, 4 rats in each group were randomly selected for liver ultrasound examination. After 90 d, 10% of chloral chloral anaesthesia was killed in rats. The blood serum of abdominal aorta was used for liver function and blood lipid test, the liver quality was weighed and the liver body index was calculated. Each rat was taken the most liver. 3 equal parts were organized at the 1 mm of the medial margin of the large lobe, 1 parts were fixed to 10% formaldehyde for HE staining, and the other 2 tissues were frozen to be used for real-time fluorescence quantitative PCR to detect the expression of lipid metabolism related genes Fas, Srebp1, Ucp2, Western blot detection c/EBP a, PPAR gamma expression. The results showed that no significant fatty liver changes were found in each group, but only a small amount of hepatocyte fatty changes were found in the high dose NP group. The liver function and blood biochemical results showed that serum ALT, AST, TC, LDL-C did not increase (P0.05).RT-PCR results, in the high dose NP exposure group, the lipid synthesis related genes Fas, Ucp2, Srebp1 AST and control groups The P0.05.Western blot results showed that, in the high dose group, the lipid synthesis related protein c/EBP alpha and the relative expression of PPAR gamma increased significantly (P0.05). Conclusion: low dose NP subchronic exposure did not induce nonalcoholic fatty liver formation in rats, but could up regulate the liver lipid synthesis and metabolism related genes Fas, Ucp2, Srebp1 and protein c/EBP alpha, PPAR gamma Second part NP combined with high fat and high sugar diet induced nonalcoholic fatty liver and mechanism in rats. Objective: To explore whether NP subchronic exposure aggravates the occurrence of NAFLD caused by high fat and high sugar diet. Methods: 40 clean grade SD rats (200 + 20) g, and male and female, were purchased at the center of experimental animal in Daping of Third Military Medical University (certificate number: (SCXK) 2012-0005) after 7 days, adaptive feeding (100% base feed) was randomly divided into 4 groups, namely, high fat and high sugar diet control group (corn oil), high fat and high sugar diet +NP low dose group (0.02 mu g/kg), high fat and high sugar diet +NP dose group (0.2 mu g/kg), high fat and high sugar diet +NP high dose group (2 mu g/kg). During the experiment, weight 1 times a week, record drinking water intake, intake of food. At the end of the 10 week, 4 rats in each group were randomly selected for color ultrasonic examination of the liver, and the NAFLD model was established to determine the success of the hyperechoic region. At the end of the twelfth week, the animals were killed, and 10% of the hydrous chloral anaesthesia, the blood serum of the abdominal aorta was used to detect the liver function and blood lipid. 3 equal parts were organized at the 1 mm of the inner edge of the most lobe of the liver, 1 parts were fixed in 10% formaldehyde for HE staining, and the other 2 tissues were frozen to be used for real-time fluorescence quantitative PCR to detect the expression of lipid metabolism related genes Fas, Srebp1, Ucp2, Western blot detection c/EBP a, PPAR gamma expression. Fatty liver, Twelfth weeks high dose group weight increase (P0.05), low, medium dose NP exposure group drinking water volume, high dose diet was significantly higher than the control group (P0.05). Ultrasound results showed that all groups found the strong echo region, suggesting the formation of fatty liver, and the high dose group is stronger than the control group, the high dose group is stronger than the low dose group.HE staining found, NP The serum content of ALT, AST, TC and LDL-C increased in the high dose group, and the serum content of TG, TC and LDL-C in the middle dose group increased (P0.05).RT-PCR (P0.05).RT-PCR results in the middle dose group. The results of estern blot showed that the relative expression of c/EBP alpha and PPAR gamma in the other groups increased (P0.05) except the low dose NP exposure group PPAR gamma. Conclusion: NP can aggravate the nonalcoholic fatty liver effect in rats induced by high fat and high sugar diet. The mechanism is mainly related to the up regulation of Srebp1, Fas, Ucp2 m.
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

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本文編號：1980263