本文選題：何首烏飲 + 精子質(zhì)量�。� 參考：《河北大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：何首烏飲由何首烏、肉蓯蓉、懷牛膝、淫羊霍、丹參、茯苓六味中藥配方而成。目的：研究何首烏飲對自然衰老大鼠精子質(zhì)量的影響。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動物與分組選用12月齡Wistar大鼠70只，將動物分為青年對照組，自然衰老組，何首烏丸 組，何首烏飲1組、2組。青年對照組在12月時取材；自然衰老組在飼養(yǎng)到16月時灌胃等量的生理鹽水；何首烏飲組1組大鼠在飼養(yǎng)到16月時灌胃何首烏飲60d，何首烏飲2組在飼養(yǎng)到17月時灌胃何首烏飲30d；何首烏丸組在飼養(yǎng)到16月時灌胃何首烏丸60d。 2.樣本的收集大鼠稱重后，水合氯醛麻醉，內(nèi)眥眶后靜脈叢取血2ml，離心后取上清液用于檢測血清睪酮的濃度。酒精消毒，取附睪尾部，用生理鹽水漂洗2次，剪3刀，置于盛有1ml37℃生理鹽水凍存管中，37℃水浴箱中孵育30min，檢測精子質(zhì)量。取睪丸，稱量,計算睪丸指數(shù)。 3.觀察指標(biāo) 3.1血清睪酮濃度測定：采用生物化學(xué)發(fā)光法檢測各組大鼠血清睪酮的濃度。 3.2大鼠睪丸指數(shù)的計算：睪丸指數(shù)=睪丸濕重/體重×100%。 3.3光鏡觀察:睪丸組織采用常規(guī)處理，HE染色，觀察睪丸組織形態(tài)學(xué)變化。 3.4精子質(zhì)膜完整性觀察：采用乙酰乙酸鹽+碘化丙啶染色法，從凍存管中取出新收集的精子懸液，離心后去上清， PBS洗滌2次，調(diào)整精子濃度至5×106/ml，加入乙酰乙酸鹽染液使其終濃度至20μg/mL，37℃避光染色3min，然后加入碘化丙啶染液使其終濃度至5μg/mL，染色3min，涂片后用熒光顯微鏡計數(shù)200個精子（頭部綠色熒光的為質(zhì)膜完整的精子，紅色熒光為質(zhì)膜破損的精子），計算頭部綠色熒光的精子的百分?jǐn)?shù)。 3.5精子線粒體功能檢測：從凍存管中取出新收集的精子懸液離心后去上清， PBS洗滌2次，離心去上清，加入100μl20μg/ml的羅丹明123，37℃避光染色30min，用0.1M PBS調(diào)至精子濃度至5×106/ml，熒光顯微鏡下觀察，發(fā)綠色熒光的精子線粒體功能正常，，而發(fā)弱熒光或熒光出現(xiàn)分節(jié)現(xiàn)象說明線粒體功能減弱。計數(shù)200個精子，計算發(fā)綠色熒光精子的百分?jǐn)?shù)。 3.6精子DNA完整性檢測：采用精子DNA吖啶橙熒光檢測試劑盒檢測精子DNA完整性。從凍存管中取出新收集的精子懸液放入EP管中，離心去上清，加入1ml清潔液A洗滌2次，離心去上清，調(diào)精子濃度至5×106/ml，涂片，晾干后加入200μl固定液B，室溫固定2h，滴加染色液C，室溫避光染色5min，然后用清潔液A沖洗2～3次，熒光顯微鏡觀察，頭部發(fā)綠色熒光的為DNA正常精子，發(fā)紅色或黃色熒光的DNA異常精子。計數(shù)200個精子中頭部發(fā)綠色熒光的精子百分?jǐn)?shù)。 結(jié)果： 1.自然衰老組血清睪酮含量明顯低于青年對照組(P 0.01)，何首烏飲1、2組和何首烏丸組均能不同程度提高睪酮的濃度，與自然衰老組比較，顯著升高(P 0.05)，且何首烏飲1組睪酮濃度升高最為顯著。 2.自然衰老組大鼠睪丸指數(shù)比青年對照組顯著下降（P 0.01）；何首烏飲1、2組和何首烏丸組睪丸指數(shù)比自然衰老組大鼠顯著增加，何首烏飲1組療效最佳。 3.青年對照組，睪丸生精小管邊界整齊，無萎縮及塌陷，界膜完整，無增厚及纖維化；管腔內(nèi)可見排列整齊的各級生精細(xì)胞和支持細(xì)胞，管腔內(nèi)可見精子。自然衰老組，睪丸生精小管基膜部分增厚，邊界不完整，有萎縮和塌陷，生精細(xì)胞層數(shù)明顯減少，細(xì)胞稀疏；何首烏飲和何首烏丸干預(yù)后大鼠睪丸生精小管的形態(tài)結(jié)構(gòu)明顯改善，基膜趨于完整，生精上皮細(xì)胞層數(shù)增多，何首烏飲1組明顯好于其他各組。 4.質(zhì)膜完整性檢測結(jié)果顯示：自然衰老組大鼠發(fā)綠色熒光的精子數(shù)量比青年對照組顯著下降（P 0.01）；而何首烏飲1、2組和何首烏丸組發(fā)綠色熒光的精子數(shù)比自然衰老組大鼠顯著增多，且何首烏飲1組療效好于其余各組。 5.精子線粒體功能檢測結(jié)果顯示：自然衰老組大鼠發(fā)綠色熒光精子數(shù)量比青年對照組顯著下降（P 0.01）；而何首烏飲1、2組和何首烏丸組發(fā)綠色熒光的精子比自然衰老組大鼠顯著增多，且何首烏飲1組療效最佳。 6.精子DNA完整性檢測結(jié)果顯示：自然衰老組大鼠頭部發(fā)綠色熒光精子數(shù)量明顯減少，發(fā)紅色或黃色熒光的DNA異常精子顯著增多，與青年對照組比較有顯著性差異（P 0.01）；而何首烏飲和何首烏丸組頭部發(fā)綠色熒光的精子比自然衰老組大鼠顯著增多，且何首烏飲1組頭部發(fā)綠色熒光的精子明顯多于其余各組。 結(jié)論：何首烏飲能夠提高衰老大鼠血清睪酮的濃度，改善睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高睪丸指數(shù)，具有明顯提高精子質(zhì)量的作用。
[Abstract]:The six flavors of Polygonum multiflorum, Cistanche, Achyranthes, Hodgson, Salvia miltiorrhiza and tuckahoe were formulated. Objective: To study the effect of Polygonum multiflorum on the sperm quality of natural aging rats.
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本文編號：1946930