本文選題：西格列汀 + 動脈粥樣硬化��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2014年博士論文

【摘要】：[背景] 糖尿病(diabetes mellitus, DM)目前已在全球范圍內流行,成為發(fā)展中國家和發(fā)達國家嚴重危害人類健康和生命的疾病,其主要危害在于慢性并發(fā)癥的發(fā)生。隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,糖尿病的發(fā)病率日益增加,糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生率也在逐漸增加,給患者帶來了嚴重的經濟和社會負擔。糖尿病血管病變包括大血管病變和微血管病變。糖尿病大血管病變包括腦血管疾病、冠心病(coronary heart disease, CHD)和周圍血管疾��；糖尿病微血管病變包括糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN),糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)和糖尿病周圍神經病變(diabetic peripheral neuropathy, DPN)。糖尿病大血管并發(fā)癥是導致2型糖尿病患者死亡的主要原因,而動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)則是其最主要的病理特征,動脈粥樣硬化是一種常見的以慢性炎癥反應為主要特征的血管疾病,主要累及大中型血管動脈內膜,血管內皮受損為其起始環(huán)節(jié),繼而引起血脂沉積,單核細胞聚集,泡沫細胞形成,平滑肌細胞增生和血管內皮細胞功能紊亂,最終導致動脈粥樣硬化病變的形成。鑒于糖尿病大血管病變的發(fā)生率日益增加及其可能帶來的嚴重危害,如何預防糖尿病大血管病變已經成為全球共同關注的重要問題,然而糖尿病大血管病變的發(fā)病機制至今仍不十分清楚,因此也給治療方案的選擇帶來了一定的困難。 二肽基肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4, DPP-4)抑制劑是一種新型的口服降糖藥物,主要是通過選擇性抑制DPP-4的活性,阻止胰高血糖素樣肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)降解失活,增加血清中活性GLP-1的水平以及延長GLP-1的作用時間來增加其生理作用,從而發(fā)揮降低血糖的作用,DPP-4抑制劑除了可以降低糖基化血紅蛋白(glycoseylated hemoglobin, HbA1C),空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)和餐后血糖(postprandial blood glucose, PBG)的水平之外,還能促進胰島p細胞分泌胰島素并抑制胰島α細胞分泌胰高血糖素,從而改善胰島細胞功能紊亂,并且不增加體重和低血糖等不良反應的發(fā)生率。GLP-1是由人胰高血糖素基因編碼,小腸L細胞分泌的一種肽類激素,在食物中營養(yǎng)物質的刺激下分泌并釋放入血液,從而發(fā)揮其生理作用。GLP-1以葡萄糖依賴方式作用于胰島p細胞,促進胰島素基因的轉錄,增加胰島素的生物合成和分泌,同時刺激胰島p細胞的增殖和分化,抑制p細胞凋亡,增加p細胞數(shù)量,改善p細胞功能,并抑制α細胞分泌胰高血糖素,從而發(fā)揮降低糖化血紅蛋白、空腹血糖和餐后血糖的作用；此外GLP-1還可抑制食欲及攝食,延緩胃內容物排空以及降低體重。然而內源性GLP-1的半衰期很短,極易被體內的DPP-4降解而失活,DPP-4又稱T細胞表面抗原CD26,是一種細胞表面的絲氨酸蛋白酶,部分以可溶形式存在于循環(huán)血液中,其主要酶活性作用是優(yōu)先將氨基末端第2個氨基酸寡肽的氨基末端前兩個氨基酸剪切去除,而天然GLP-1的氨基末端第二個氨基酸可被DPP-4剪切成為截斷的GLP-1,失去促胰島素分泌活性,該失活作用快速且不可逆。目前大量研究證實GLP-1受體激動劑可以延緩動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,作用機制可能與GLP-1類似物作用于GLP-1受體(glucagon like peptide-1receptor, GLP-1R)之后,激活環(huán)磷酸腺苷/蛋白激酶A(cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A, cAMP/PKA)信號通路,與改善炎癥反應和血管內皮功能等作用相關。而西格列汀作為一種競爭性DPP-4抑制劑,可與DPP-4高保守的p螺旋區(qū)谷氨酸鹽殘基非共價結合,抑制DPP-4的活性,通過增加生理性GLP-1的活性和作用時間從而發(fā)揮降糖作用,有研究報道顯示它除了具有降低血糖的作用之外,還可能在心血管疾病方面存在保護作用。近年來有研究提示西格列汀可能延緩動脈粥樣硬化的發(fā)展,但具體作用機制很復雜且目前尚不清楚。有些研究推斷可能也是通過作用于GLP-1R后激活cAMP/PKA信號通路,發(fā)揮心血管保護作用有關；但也有些研究認為西格列汀可能通過增加一氧化氮等途徑來起到保護血管內皮的作用,并不依賴于cAMP/PKA或者是PI3K/Akt信號通路。研究證實AMP依賴的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)和絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信號通路都可能參與了動脈粥樣硬化形成的機制調節(jié)過程。AMPK作為生物代謝能量調節(jié)的重要分子,表達于各種代謝相關的器官中,研究發(fā)現(xiàn)它的活化具有抗動脈粥樣硬化的作用,主要通過上調Akt/eNOS信號通路,從而抑制p38介導的核因子κB (nuclear factor κB, NF-κB)活化過程,繼而減輕炎癥反應；而MAPK是細胞內的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,MAPK信號通路主要包括p38、細胞外信號調控的蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase mediates, Erk)以及c-Jun N端激酶(c-jun amino-terminal kinase, JNK)／應激激活蛋白激酶(stress-activated protein kinase, SAPK)等途徑,是細胞將信號從細胞外傳遞到細胞內的主要通路,研究證實其在抑制后可能通過抑制粘附分子的表達、抗炎癥作用以及增加粥樣斑塊的穩(wěn)定性,從而對動脈粥樣硬化疾病起到保護作用。 雖然目前關于糖尿病大血管并發(fā)癥的發(fā)病機制仍不清楚,但多認為與以下五個方面有關,即蛋白激酶C (protein kinse C, PKC)的活化、蛋白質非酶促糖基化、氧化應激、多元醇通路異常和己糖胺途徑異常,其中慢性高血糖所誘導的血管組織PKC活化被認為是最重要的機制之一。PKC作為一種重要的蛋白激酶,廣泛存在于人體各種組織和細胞中,屬于絲氨酸／蘇氨酸激酶家族成員,它不是單一分子的酶,而是一組相互之間密切相關、有多種亞型的蛋白質家族,可作用于多種信號轉導通路,使細胞內多種蛋白質磷酸化,從而調控細胞生長、增殖、衰老、凋亡等一系列生理生化過程。目前已經發(fā)現(xiàn)PKC包括經典型、新型和非典型三大類,共11種亞型。經典型又稱cPKC,包括PKCα、β (Ⅰ Ⅱ)和γ,可被鈣離子、二脂酰甘油和佛波酯激活；新型又稱nPKC,包括PKCδ、ε、η和θ,可被二脂酰甘油和佛波酯激活；非典型又稱aPKC,包括PKCζ和λ,一般是被磷脂類物質所激活,其激活不依賴于鈣離子、二脂酰甘油或佛波酯。PKC的分布具有亞型特異性,心血管組織中有多種PKC亞型表達如PKCα、PKCβ、PKCδ、PKCζ等,β亞型主要分布在心血管組織,故研究最多。多種因素可誘導PKC的活化,但高血糖是最重要的誘導因素,在糖尿病高血糖狀態(tài)下,中間代謝產物糖基化終末產物(advanced glycation end products,AGEs)、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、細胞因子和生長因子等均可使二脂酰甘油的從頭合成增加,進而激活PKC。既往研究提示PKCβ活化可能促進動脈粥樣硬化的發(fā)生,但機制仍不清楚,且目前關于西格列汀與PKCβ之間可能存在的關系國內外尚無相關報道。 針對本領域存在的上述問題,我們對本課題研究進行設計,首先以動脈粥樣硬化的經典模型載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout mice, ApoE-/-)小鼠作為研究對象,探討新型降糖藥物西格列汀是否具有獨立于降糖作用之外的心血管保護作用以及可能存在的作用機制；同時將血管內皮細胞特異性PKCβ過表達轉基因小鼠(vascular endothelial-specific PKCβ over-expression transgenic mice, VEPKCβ+/-)與ApoE-/-小鼠進行雜交后,制備出血糖正常的以ApoE-/-為背景的PKCβ轉基因動物模型(VEPKCβ+/-ApoE-/-)作為研究對象,觀察血管內皮特異性PKCβ過表達對動脈粥樣硬化病變的影響,并對該模型給予西格列汀干預,觀察西格列汀是否可延緩該動物模型動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,同時探討可能存在的作用機制,為西格列汀預防2型糖尿病大血管并發(fā)癥的臨床應用提供更多的理論依據(jù)。 第一部分DPP-4抑制劑西格列汀對ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化的影響及其機制研究 [目的] 1、觀察DPP-4抑制劑西格列汀對ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的影響。 2、探討西格列汀延緩動脈粥樣硬化形成的機制是否與激活AMPK和抑制MAPK信號通路有關。 [方法] 1、將24只8周齡的雄性ApoE-/-小鼠作為實驗對象,分為兩組,每組12只,分別給予高脂(含21.8%脂肪和1.25%膽固醇)飲食和高脂混合西格列汀(0.3%w/w)飲食,各喂養(yǎng)16周。 2、實驗分組： 第1組：對照組,8周齡雄性ApoE-/-小鼠共12只,喂養(yǎng)高脂飼料共16w；第2組：西格列汀組,8周齡雄性ApoE-/-小鼠共12只,喂養(yǎng)高脂混合西格列汀飼料(0.3%w/w)共16w； 3、每周記錄小鼠體重和進食量,14周時禁食16h后腹腔注射20%葡萄糖注射液(1g/kg)后分別測Omin,15min,30min,60min和120min時小鼠尾靜脈的血糖水平。 4、喂養(yǎng)16周后,禁食8h后腹腔注射1.5%戊巴比妥鈉(5ul/g),小鼠麻醉后摘眼球取血,室溫靜置30min后,離心3000rpm,10min,取血清,-80度凍存,分別用ELISA方法和全自動生化檢測儀檢測血清中血脂譜水平和可溶性粘附分子的表達水平。 5、取血后采用脊椎脫臼法處死小鼠,解剖并分離出小鼠主動脈至腹主動脈分叉處,往小鼠左心室內注入0.9%生理鹽水,沖洗主動脈,在解剖顯微鏡下由下而上剖開后再濾紙上鋪開,用4%福爾馬林固定液固定36h后,蘇丹Ⅳ染液染色10min后放入70%乙醇溶液中分化10min,再用清水漂洗20min,放入兩片載玻片中,在解剖顯微鏡下用相機拍照。 6、小鼠主動脈分離后用4%福爾馬林固定液固定24h,采用石蠟切片的方法將主動脈制成平片后分別用Masson特殊染色法和免疫組化的方法檢測主動脈斑塊中膠原纖維、巨噬細胞和平滑肌細胞的表達水平；小鼠主動脈分離后放入-80度凍存,部分組織提取蛋白后采用免疫印跡法方法檢測主動脈組織中AMPK (AMPK和Akt)和MAPK(p38和Erkl/2)信號通路磷酸化蛋白與總蛋白的表達情況；部分組織提取RNA后采用RT-PCR的方法檢測主動脈中DPP4和GLP-1R以及MCP-1和IL-1等炎癥因子的表達情況。 5、統(tǒng)計學處理：實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進行統(tǒng)計學分析,計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)表示,兩獨立樣本數(shù)據(jù)采用不配對的t檢驗進行比較,P0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。 [結果] 1.兩組間各代謝指標水平的比較： 小鼠體重和進食量水平在兩組間比較無顯著性差異；腹腔糖耐量實驗結果顯示兩組間的血糖水平在Omin、15min、30min、60min和120min五個時間點均無顯著性差異；與對照組相比,西格列汀可升高血清中高密度脂蛋白(HDL)的水平(52.78±5.25vs97.76±8.56,P0.001),但血清中甘油三酯(TG),總膽固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)的表達水平在兩組間比較無顯著性差異。 2.西格列汀對ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成的影響以及西格列汀干預后斑塊內各組成成分的改變： 與高脂對照組相比,西格列汀組動脈粥樣硬化斑塊面積顯著降低((7.64±1.98%vs12.91±1.15%,P0.001)；主動脈弓和腹主動脈部位的動脈粥樣硬化斑塊面積也較對照組顯著降低,與對照組相比,西格列汀組主動脈弓和腹主動脈的粥樣斑塊面積分別減少1.92和2.74倍(P=0.011和P=0.006)。西格列汀干預后,動脈粥樣斑塊內組織成分平滑肌細胞、巨噬細胞和膠原纖維的表達下降,與對照組相比,西格列汀組斑塊內膠原纖維表達減少(49.86±6.26um2vs59.83±5.82um2；P0.05)；西格列汀干預后斑塊內平滑肌細胞和巨噬細胞表達有減少的趨勢,但與對照組相比無統(tǒng)計學差異。 3、西格列汀對ApoE-/-小鼠血清可溶性粘附分子表達水平的影響： 西格列汀可抑制血清中可溶性粘附分子的表達。與對照組相比,小鼠血清中可溶性粘附分子VCAM-1和P-slectin的表達顯著下降,差異具有統(tǒng)計學意義(sVCAM-1:1163.16±159.62ng/ml vs1365.18±170.26ng/ml, P0.05; sP-selectin:232.71±64.29ng/ml vs288±44.46ng/ml, P0.05)。 4、西格列汀對ApoE-/-小鼠主動脈組織中DPP-4、GLP-1R、MCP-1和IL-6表達的影響： 兩組間主動脈組織DPP-4和GLP-1R mRNA表達水平均無顯著性差異(P0.05);而炎癥因子MCP-1和IL-6的表達情況在西格列汀組均出現(xiàn)顯著性減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.001and P=0.033)。 5、西格列汀對ApoE-/-小鼠主動脈組織中AMPK和MAPK磷酸化蛋白表達的影響： 與對照組相比,西格列汀組小鼠主動脈組織中AMPK及其下游信號通路Akt的磷酸化蛋白表達與總蛋白表達的比值增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05and P0.01)；而MAPK信號通路p38和Erk1/2磷酸化蛋白表達與總蛋白表達的比值下降,差異也具有統(tǒng)計學意義(P0.05and P0.01)。 [結論] 1、西格列汀可延緩ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,并減少斑塊中組成成分的表達,該作用獨立于降糖和降體重之外。 2、西格列汀可增加ApoE-/-小鼠血清中HDL的表達水平。 3、西格列汀延緩動脈粥樣硬化作用的機制可能與激活AMPK-Akt信號通路以及抑制p38和Erkl/2MAPK信號通路,從而導致炎癥因子(MCP-1和IL-6)和粘附分子(sVCAM-1和sP-selectin)表達減少相關。 第二部分DPP-4抑制劑西格列汀對血管內皮特異性PKCβ2過表達的ApoE基因敲除(VEPKCβ2+/-ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化的影響及機制初探 [目的] 1、觀察血管內皮特異性PKCβ2過表達對動脈粥樣硬化病變的影響并探討可能存在的作用機制。 2、觀察DPP-4抑制劑西格列汀對血管內皮特異性PKCβ2過表達的ApoE基因敲除(VEPKCp2+/-ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化病變的影響。 3、探討西格列汀影響血管內皮特異性PKCβ2過表達的ApoE基因敲除(VEPKCβ2+/-ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化形成潛在的作用機制。 [方法] 1、制備VEPKCβ2+/-/ApoE-/-雜交小鼠：將血管內皮細胞特異性PKCβ2過表達的轉基因(VEPKCβ2+/-)小鼠與載脂蛋白E基因敲除的C57BL6/J(ApoE-/-)小鼠進行多次雜交并做基因鑒定之后,制備出具有ApoE-/-背景的VEPKCβ2轉基因(VEPKCβ2+/-ApoE-/-)小鼠作為小鼠實驗模型。 2、取12只8周齡的雄性ApoE-/-小鼠作為陰性對照,給予高脂飲食(含21.8%脂肪和1.25%膽固醇)喂養(yǎng)16周：再取24只8周齡的雄性VEPKCβ2+/-ApoE-/-小鼠作為實驗對象,隨機分成兩組,每組12只,分別給予高脂飲食和高脂混合西格列汀(0.3%w/w)飲食,均喂養(yǎng)16周,動物分組及飼料喂養(yǎng)如下。 3、實驗分組： 第1組：12只8周齡雄性ApoE-/-小鼠,高脂飲食16w,簡稱高脂對照組； 第2組：12只8周齡雄性VEPKCβ2+/-ApoE-/-小鼠,高脂飲食16w,簡稱高脂模型組； 第3組：12只8周齡雄性VEPKCβ2+/-ApoE-/-小鼠,高脂混合西格列汀飲食16w,簡稱西格列汀模型組； 4、每周記錄小鼠體重和進食量,14周時行腹腔糖耐量實驗(IPGTT)測0min,15min,30min,60min和120min五個時間點的血糖水平。 5、喂養(yǎng)16周后,禁食8h后麻醉,摘眼球取血,離心取血清,-80度凍存,分別用全自動生化檢測儀和ELISA方法檢測血清中血脂譜水平和可溶性粘附分子的表達水平。 6、取血后采用脊椎脫臼法處死小鼠,解剖并分離出小鼠主動脈至腹主動脈分叉處,剖開動脈后,鋪開進行固定后用蘇丹Ⅳ染液染色,用高清攝像系統(tǒng)拍照后用軟件計算動脈粥樣硬化斑塊占血管面積的百分比。 7、小鼠主動脈分離固定后,石蠟切片將主動脈制成平片后分別用Masson特殊染色法和免疫組化的方法檢測主動脈斑塊中膠原纖維、巨噬細胞和平滑肌細胞的表達水平；采用RT-PCR的方法檢測主動脈組織中PKCβ、DPP4和GLP-1R基因nRNA的表達情況；采用免疫印跡法方法檢測主動脈組織中AMPK和β38MAPK信號通路蛋白磷酸化的表達情況。 8、統(tǒng)計學處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理,各指標數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(x±s)表示,各組均數(shù)比較采用單向方差分析(One-way ANOVA),多重比較采用LSD法(Least-significant difference test),方差不齊時,用Welch法校正,當P0.05時用Dunnett'sT3法作多重比較。P0.05被認為差異具有統(tǒng)計學意義。 [結果] 1、三組間各代謝指標的比較： 小鼠體重、進食量以及IPGTT在Omin、15min、30min、60min和120min五個時間點的血糖水平在三組間比較均無顯著性差異。血清TG、TC、HDL、LDL和VLDL的表達水平在高脂對照組和高脂模型組之間比較均沒有顯著性差異；但西格列汀模型組與高脂模型組相比,血清中HDL的表達水平顯著升高(86.69±14.61vs60.81±10.82,P0.0001),而血清中TG、TC、LDL和VLDL的表達水平在西格列汀模型組與高脂模型組中沒有差異。 2、血管內皮特異性PKCβ2過表達對ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊面積形成的影響,以及西格列汀干預后VEPKC+/β-ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊面積形成的改變： 與高脂對照組相比,高脂模型組動脈粥樣硬化斑塊面積比顯著增加(23.58±5.31%vs12.91±1.15%,P0.0001)；而西格列汀模型組與高脂模型組相比較,動脈粥樣硬化斑塊面積比減少,差異具有統(tǒng)計學意義(16.19±2.07%vs23.58±5.31%,P0.01)；高脂對照組與西格列汀模型組相比斑塊面積比沒有差異(P=0.112)。與高脂對照組相比,主動脈弓部和腹主動脈中斑塊面積比在高脂模型組均有增加的趨勢(30.64±14.9%vs21.31±7.45%；12.33±4.7%vs11.06±3.93%)；而與高脂模型組相比,西格列汀模型組主動脈弓部和腹主動脈中斑塊面積比均呈現(xiàn)減少的趨勢(20.23±4.38%vs30.64±14.9%；9.98±3.75%vs11.06±3.93%),但統(tǒng)計結果顯示主動脈弓部和腹主動脈中斑塊面積比在三組間的差異均沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3、三組間粥樣斑塊內各組成成分的改變： 與高脂對照組相比,高脂模型組動脈粥樣硬化斑塊內各組成成分的表達均呈現(xiàn)增加的趨勢(平滑肌細胞：28.28±6.56vs22.74±5.11um2巨噬細胞：4.45±1.32vs2.91±2.01um2；膠原纖維：66.60±16.16vs59.83±5.82%)；西格列汀模型組與高脂模型組相比,斑塊內各組成成分(平滑肌細胞、巨噬細胞和膠原纖維)的表達則呈現(xiàn)減少的趨勢(平滑肌細胞：23.28±3.03vs22.74±5.11；巨噬細胞：3.31±1.38vs2.91±2.01；膠原纖維：52.59±8.65vs59.83±5.82),但統(tǒng)計結果顯示斑塊內平滑肌細胞、巨噬細胞和膠原纖維在三組間的表達差異均沒有統(tǒng)計學意義。 4、三組間小鼠主動脈組織中PKCβ、 DPP4和GLP-1R mRNA表達水平的比較： 三組之間主動脈組織中DPP-4和GLP-1R mRNA的表達水平均無顯著性差異(P0.05)。高脂模型組和西格列汀模型組的PKCp基因的mRNA表達水平分別是高脂對照組的5.18倍(P=0.012)和5.21倍(P=0.035)；高脂模型組和西格列汀模型組之間的PKCβ基因mRNA的表達水平無顯著性差異(P0.05)。 5、三組間血清可溶性粘附分子(sVCAM-1和sP-selectin)表達水平的比較： 血管內皮特異性PKCβ2過表達后與高脂對照組相比較,小鼠血清中可溶性粘附分子VCAM-1和P-selectin表達水平顯著增加(2157.12±553.37vs1365.18±170.26,P0.001；429.01±102.89vs288.00±44.46,P0.001),給予西格列汀干預后血清中sVCAM-1的表達顯著下降(1838.20±374.86vs2157.12±553.37,P0.05),而血清中sP-selectin的表達水平出現(xiàn)下降的趨勢,但無統(tǒng)計學差異(383.30±63.60vs429.01±102.89,P=0.181)。 6、三組間小鼠主動脈組織中AMPK和p38MAPK磷酸化蛋白表達水平的變化： 與高脂對照相比,高脂模型組小鼠主動脈組織中AMPK的磷酸化蛋白與總蛋白(pAMPK/AMPK)表達比值下降4倍(P=0.023),而VEPKCβ+/-ApoE-/-小鼠在給予西格列汀干預后pAMPK/AMPK的比值增加5.56倍數(shù)(P=0.008),差別均具有統(tǒng)計學意義；三組間p38MAPK蛋白的磷酸化表達水平則與AMPK蛋白磷酸化表達的趨勢相反,高脂模型組中p38MAPK的磷酸化蛋白與總蛋白(pp38/p38)表達比值是高脂對照組的1.66倍(P=0.033),而VEPKCβ+/-ApoE-/-小鼠在給予西格列汀干預后pp38/p38的比值下降3.02倍(P=0.002),差別也具有統(tǒng)計學意義。 [結論] 1、血管內皮特異性PKC02過表達可促進ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,該作用獨立于降糖、降脂和降體重作用之外。 2、血管內皮特異性PKCβ2過表達促進ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化形成的機制可能與影響血清中可溶性粘附分子表達,從而增加白細胞和血管之間的相互作用有關。 3、西格列汀可延緩血管內皮特異性PKCβ2過表達的ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊面積的形成。 4、西格列汀延緩VEPKCβ+/-ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的作用機制與PKC途徑的活化無關,而可能與激活AMPK信號通路以及抑制MAPK信號通路,導致粘附分子表達減少相關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R587.1;R543.5

【共引文獻】

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10 呂婷婷;周理蘭;韓萍;;胰高血糖素樣肽-1及其類似物對血管內皮保護作用的研究進展[J];臨床誤診誤治;2011年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃碧清;徐佳駿;沈金芳;;治療2型糖尿病的新藥——Lingaliptin[A];醫(yī)藥導報(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魏麗萍;PKC-βII激活在糖尿病大鼠心肌微血管損傷中的作用及機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

2 郭南京;利拉魯肽對糖尿病前期OLETF大鼠糖脂代謝的作用及相關機制[D];南方醫(yī)科大學;2012年

3 馬鳴飛;芪衛(wèi)顆粒治療DN臨床觀察及調節(jié)PEDF/USF_2表達對DN腎纖維化的干預機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

4 范悅琳;降糖三黃片對糖尿病大鼠心肌保護作用及對BRADYKININ β1調控機制的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學;2013年

5 范佳琳;降糖三黃片對糖尿病心臟病變心肌保護作用及對GLP-1的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學;2013年

6 楊盛蘭;microRNA-30c通過調節(jié)自噬參與調控糖尿病心肌病機制的研究[D];華中科技大學;2013年

7 王喜梅;Sitagliptin對缺氧環(huán)境下骨髓間充質干細胞的保護作用及相關機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

8 劉劍鋒;Exendin-4聯(lián)合脂肪來源干細胞移植治療急性心梗的作用及機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2013年

9 趙靜雯;奶牛瘤胃微生物蛋白酶和二肽基肽酶Ⅳ基因的篩選與多樣性分析[D];中國農業(yè)科學院;2013年

10 劉浩宇;Exendin-4經eNOS通路促使內皮細胞一氧化氮釋放[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐莉;Exendin-4抑制t-BHP誘導的HUVECs凋亡與PI3k/Akt-Bcl-2通路有關[D];福建醫(yī)科大學;2011年

2 袁小燕;GLP-1（7-36）對高糖誘導人臍靜脈內皮細胞凋亡的影響及作用機制[D];中南大學;2011年

3 董振華;胰高血糖素樣肽-1通過一氧化氮依賴性機制改善骨骼肌微循環(huán)和葡萄糖攝取[D];山東大學;2011年

4 艾志敏;芪衛(wèi)顆粒干預糖尿病腎病臨床和部分作用機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

5 岑燁;二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-4）抑制劑對血脂的影響的系統(tǒng)評價[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

6 薛慧良;不同降糖方案對糖尿病腎病患者血管內皮功能的影響[D];遵義醫(yī)學院;2013年

7 陳穎;PKC beta抑制劑對大鼠腎移植后腎臟內細胞浸潤的影響[D];遵義醫(yī)學院;2013年

8 陳姍姍;Tacrolimus對糖尿病大鼠腎臟巨噬細胞Toll樣受體2與4表達的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

9 王鳳玲;小檗堿對高脂加鏈脲佐菌素誘導的糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及其對G蛋白偶聯(lián)受體激酶的調控[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

10 胡恒境;硫化氫對oxLDL誘導巨噬細胞Lp-PLA_2表達的影響[D];南華大學;2013年

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本文編號：1937459