本文選題：氯沙 + 火藥　； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：目的：探討氯沙坦的治療作用及其機(jī)制。方法：1.將70只大鼠隨機(jī)分為兩組：正常組(Con組,10只)及吸入性肺損傷組(ALI組,60只)。Con組大鼠暴露于空氣中8min。AL1組在煙霧吸入后,以每10只大鼠為一組,分別在不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)(1h,2h,6h,24h,48h及96h)經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉處死,暴露分離腹主動(dòng)脈后取動(dòng)脈血,然后處死并取材。測定動(dòng)脈血?dú)?支氣管肺泡灌洗液(BALF)相關(guān)指標(biāo)，肺濕重/干重比(Wet to dry weight ratio, W/D),肺組織髓過氧化酶(myeloperoxidase, MPO)活性,BALF中白細(xì)胞介素-6(IL-6)、IL-1p以及腫瘤壞死因子-a (TNF-a),并觀察肺組織的病理學(xué)變化。2.40只大鼠隨機(jī)分為四組：正常組(Con組,10只)、氯沙坦空白組(1os組,10只)、吸入性肺損傷組(ALI組,10只)、氯沙坦治療組(ALI+los組,10只)。Con組、1os組大鼠暴露于空氣中8min。ALI組、ALI+los組暴露于火藥煙霧。對于ALI+los組,煙霧吸入30 min后行腹腔注射氯沙坦鉀溶液(15mg/kg)。同時(shí)，對Con組和ALI組行腹腔注射生理鹽水，對los組行腹腔注射氯沙坦鉀溶液(15mg/kg)。煙霧吸入24h后對大鼠行腹腔注射麻醉、取材。測定動(dòng)脈血?dú)?肺W/D, BALF總蛋白濃度及IL-6、IL-1β、TNF-α水平,BALF細(xì)胞計(jì)數(shù),肺組織的MPO活性,并觀察肺組織的病理學(xué)變化。3.30只大鼠隨機(jī)分為三組：正常組(Con組,10只)、吸入性肺損傷組(ALI組,10只)、氯沙坦治療組(ALI+los組,10只)。暴露處理同前。對于ALI+los組，煙霧吸入30 min后行腹腔注射氯沙坦鉀溶液(15 mg/kg)。同時(shí),對Con組和ALI組行腹腔注射生理鹽水。用流式細(xì)胞術(shù)分析各組大鼠外周血和肺組織中CD4+T淋巴細(xì)胞(輔助T細(xì)胞,T-helper cell, Th細(xì)胞)亞群Th1/Th2/Th17細(xì)胞的比例,以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell, Treg)的比例。分析大鼠血清和BALF中Thl細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子γ-干擾素(Interferon-γ, IFN-γ),Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-4(Interleukin-4, IL-4), Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A、IL-23、IL-6、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β),Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IL-35,大鼠肺組織和血清中血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)。用免疫組織化學(xué)的方法分析肺組織中血管緊張素Ⅱ 1型受體(AT1 receptor, AT1受體)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)、ACE2。Western blot分析AT1受體、ACE、ACE2、核因子-κB (Nuclear factor-Kappa B, NF-κB)p65、磷酸化的NF-κB p65 (phospho-NF-KB p65, p-NF-κB p65)、核因子KB抑制蛋白α亞基(NF-kappa-B inhibitor alpha, IκB-α)的在肺組織中的表達(dá)水平。結(jié)果：1.火藥煙霧中的氣體成分主要為氧氣(oxygen, O2)、一氧化碳(carbon monoxide, CO)、硫化氬(hydrogen sulfide, H2S),顆粒物質(zhì)(particle matter, PM)成分主要為PM2.5(指環(huán)境中空氣動(dòng)力學(xué)當(dāng)量直徑小于或等于2.5μm的顆粒物質(zhì))�；鹚師熿F導(dǎo)致BALF中白細(xì)胞滲出呈進(jìn)行性增多,并于24h達(dá)到高峰�；鹚師熿F引起B(yǎng)ALF總蛋白含量、肺組織W/D比值顯著增高,提示肺微血管通透性顯著升高。氧分壓(Partial pressure of oxygen, PaO2)在煙霧吸入后1h達(dá)到最低值,后逐漸恢復(fù)。二氧化碳分壓(Partial pressure of carbon dioxide, PaCO2)在煙霧吸入后1h開始升高,呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢,在煙霧吸入后24h達(dá)到峰值。火藥煙霧吸入后,大鼠肺組織呈現(xiàn)顯著的炎性變化,表現(xiàn)為肺泡間隔明顯增厚(間質(zhì)肺水腫)、廣泛的肺泡腔出血,以及廣泛的間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤。煙霧吸入后,BALF中IL-6、TNF-α、 TNF-α水平及肺組織中MPO活性明顯增高。2.ALI組BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于Con組：ALI+los組BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于ALI組；los組與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ALI組的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)均大于Con組；ALI+los組中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于ALI組，ALI+los組巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與ALI組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；los組各細(xì)胞計(jì)數(shù)與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ALI組大鼠的BALF中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分比顯著高于Con組，ALI組大鼠的BALF巨噬細(xì)胞百分比顯著低于Con組；ALI+los組BALF中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分比顯著低于ALI組,ALI+los組BALF巨噬細(xì)胞百分比顯著高于ALI組；1os組各細(xì)胞百分比與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ALI組肺組織W/D比值、BALF總蛋白含量顯著高于Con組；ALI+los組肺組織W/D比值、BALF總蛋白含量顯著低于ALI組；los組肺組織W/D比值、BALF-總蛋白含量與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ALI組Pa02顯著低于Con組；ALI+los組Pa02顯著高于ALI組。ALI組PaCO2顯著高于Con組：PaCO2在ALI+los組與ALI組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1os組PaO2、PaCO2與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ALI組大鼠肺組織呈現(xiàn)顯著的炎性變化，表現(xiàn)為肺泡間隔明顯增厚、炎性細(xì)胞浸潤和廣泛的肺泡腔出血：ALI+los組大鼠肺組織病理損傷顯著改善。ALI組肺組織MPO活性及BALF中IL-6、TNF-αIL-1β水平顯著高于Con組：ALI+los組肺組織MPO活性及BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β水平顯著低于ALI組：1os組大鼠肺組織MPO活性及BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β水平與Con組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.ALI組外周血和肺組織CD4+T細(xì)胞的比例顯著高于Con組：ALI+los組外周血和肺組織CD4+T細(xì)胞的比例顯著低于ALI組。ALI組外周血和肺組織Th1細(xì)胞的比例顯著低于Con組；ALI+los組外周血和肺組織Thl細(xì)胞的比例顯著高于ALI組。ALI組外周血和肺組織Th2細(xì)胞的比例顯著高于Con組；ALI+los組外周血和肺組織Th2細(xì)胞的比例顯著低于ALI組。ALI組外周血和肺組織Thl/Th2比值顯著低于Con組：ALI+los組外周血和肺組織Thl/Th2比值顯著高于ALI組。ALI組外周血和肺組織Th17細(xì)胞的比例顯著高于Con組; ALI+los組外周血和肺組織Th17細(xì)胞的比例顯著低于ALI組。ALI組外周血和肺組織Treg細(xì)胞的比例顯著低于Con組；ALI+los組外周血和肺組織Treg細(xì)胞的比例顯著高于ALI組。ALI組外周血和肺組織Th17/Treg t匕值顯著高于Con組；ALI+los組外周血和肺組織Th17/Treg比值顯著低于ALI組。血清和BALF中IFN-y含量在ALI組低于Con組，在ALI+los組高于ALI組。血清和BALF中IL-4含量在ALI組高于Con組，，在ALI+los組低于ALI組。血清和BALF中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子(IL-6, IL-17A, TGF-p, IL-23)在ALI組高于Con組，在ALI+los組低于ALI組。血清和BALF中Treg相關(guān)細(xì)胞因子(IL-10, IL-2, IL-35)在ALI組低于Con組，在ALI+los組高于ALI組。肺組織和血清中Ang11含量在ALI組均高于Con組；肺組織中Ang11含量在ALI+los組低于ALI組,但是血清中Ang11含量在ALI+los組與ALI組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。煙霧吸入后,除了內(nèi)皮細(xì)胞,AT1受體可見較多定位于肺泡和間質(zhì)的巨噬細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞；氯沙坦處理后,AT1受體在肺泡和間質(zhì)的表達(dá)明顯減少。Western blot結(jié)果顯示,火藥煙霧吸入后,肺組織中AT1受體的表達(dá)顯著增加；用氯沙坦治療后,AT1受體的表達(dá)顯著減少。煙霧吸入后,除了內(nèi)皮細(xì)胞,ACE、 ACE2可見較多定位于肺泡上皮細(xì)胞表面以及間質(zhì)中的炎性浸潤細(xì)胞；用氯沙坦處理后,ACE、ACE2在肺泡上皮細(xì)胞和間質(zhì)的表達(dá)明顯減少。Western blot結(jié)果顯示,火藥煙霧導(dǎo)致肺組織中ACE和ACE2的表達(dá)顯著增加；用氯沙坦治療后,ACE、ACE2的表達(dá)顯著減少。Western blot結(jié)果顯示,火藥煙霧吸入后，肺組織中p-NF-κB p65表達(dá)顯著增加、IκB-α的表達(dá)下降；氯沙坦可降低p-NF-κB p65的表達(dá)水平、阻止IκB-α的表達(dá)降低。結(jié)論：1.我們成功建立了火藥煙霧吸入性肺損傷的實(shí)驗(yàn)大鼠模型。2.氯沙坦通過改善肺組織病理和動(dòng)脈血?dú)庾兓�、減輕炎性細(xì)胞浸潤和肺微血管通透性，對火藥煙霧吸入性肺損傷具有有效的治療作用。氯沙坦減輕火藥煙霧吸入性肺損傷大鼠炎癥反應(yīng)的可能機(jī)制為：通過降低肺組織中Ang Ⅱ、AT1受體、ACE及ACE2的表達(dá)水平及抑制下游NF-κB信號通路的激活發(fā)揮其對CD4+T細(xì)胞免疫調(diào)控的活性(包括抑制Th2和Th17細(xì)胞的過度表達(dá)、促進(jìn)Th1細(xì)胞和Treg的功能)。
[Abstract]:Objective : To investigate the therapeutic effect and mechanism of losartan . Methods : Seventy rats were randomly divided into two groups : normal group ( Con group , 10 rats ) and inhaled lung injury group ( ALI group , 60 rats ) . The rats were divided into four groups : normal group ( Con group , 10 rats ) , losartan treatment group ( 1 os group , 10 rats ) , inhaled lung injury group ( ALI group , 10 rats ) and losartan treatment group ( ALI + los group , 10 rats ) . In ALI + los group , the rats were injected with losartan potassium solution ( 15 mg / kg ) . After inhalation for 24 hours , the rats were injected intraperitoneally with losartan potassium solution ( 15 mg / kg ) . For ALI + los group , the potassium chloride solution ( 15 mg / kg ) was injected intraperitoneally after 30 min of smoke inhalation . 鍚屾椂,瀵笴on緇勫拰ALI緇勮鑵硅厰娉ㄥ皠鐢熺悊鐩愭按.鐢ㄦ祦寮忕粏鑳?yōu)鏈垎鏋愬悇缁勫ぇ榧犲鍛ㄨ?

本文編號：1890778