發(fā)布時間：2018-04-30 10:39

  本文選題：地塞米松 + 膝骨性關節(jié)炎��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：1.研究背景：膝骨性關節(jié)炎是很常見的骨科疾病,隨著老齡社會的到來,其發(fā)病率以驚人的速度逐年增長,據相關統(tǒng)計資料顯示,在50歲以上人口中,膝骨性關節(jié)炎發(fā)病率僅次于心臟病而居第二位。膝骨性關節(jié)炎的從病理學角度上來說是膝關節(jié)軟骨組織破壞和修復相互交替的復雜過程,同時伴有關節(jié)和滑膜組織的繼發(fā)性炎癥。根據這一本質,膝骨性關節(jié)炎是許多種因素和過程相互作用及影響造成的最終結果,其發(fā)生和發(fā)展最關鍵的環(huán)節(jié)是軟骨的損傷和破壞。膝骨性關節(jié)炎的病理過程中,既有關節(jié)軟骨形態(tài)學和功能的修復,又有關節(jié)軟骨的退行性變,這一病理過程受到多種復雜因素的調控,年齡被公認為是最主要的危險因素。在老年人群中,不但膝骨性關節(jié)炎的發(fā)病率隨年齡增加而升高,而且膝關節(jié)軟骨組織退變的程度和疼痛等癥狀也不斷加重,其主要原因是隨年齡的增長人體各項生理功能而逐漸下降,機體器官組織的衰老,關節(jié)軟骨的自身修復能力和關節(jié)組織保護結構的功能均下降,其他危險因素如果在此時誘發(fā),就極易發(fā)展為膝骨性關節(jié)炎。衰老是指缺陷和受損的細胞成分進行性聚集,最終導致器官老化和機體組織生理功能下降的過程。在組織水平,生物大分子(DNA、蛋白質和脂質)和細胞器的損傷以及毒性修飾的聚集是衰老的一個非常明顯的特點。許多學者發(fā)現(xiàn)在衰老過程中內環(huán)境維持系統(tǒng)收到損害,現(xiàn)在越來越多的研究開始關注自噬系統(tǒng)的衰老相關性改變。自噬與細胞凋亡和增殖發(fā)生過程及穩(wěn)態(tài)維持密切相關,是生命進化過程中具有高度保守性的細胞行為之一,其主要參與細胞內大分子物質循環(huán)和再利用、受損細胞器清除降解,在維持細胞內環(huán)境的自我穩(wěn)態(tài)及促進細胞生存方面發(fā)揮重要作用。當細胞器受損時,為了抑制細胞凋亡程序的啟動,通過明顯升高其自噬水平從而清除受損細胞器,從而起到保護細胞和組織的作用。在軟骨組織退變過程中,軟骨細胞的凋亡起著關鍵作用,因此阻斷軟骨細胞凋亡發(fā)生和發(fā)展,有可能促進退變軟骨修復,從而減緩甚至阻止膝骨性關節(jié)炎病理進程。在抑制軟骨細胞凋亡的啟動過程中自噬發(fā)揮重要的調控作用,提示通過各種方法對自噬進行干預有可能是防治膝骨性關節(jié)炎的潛在有效途徑之一。2.研究目的：早期采用關節(jié)腔注射糖皮質激素可以緩解疼痛并取得良好效果,但是,長期反復注射地塞米松可破壞軟骨細胞的代謝平衡,并可以引起軟骨細胞的死亡或凋亡,從而減少軟骨細胞數(shù)量和導致膝關節(jié)軟骨組織退變程度進一步加重的后果。因此,探索糖皮質激素副作用的機制并尋找應對策略,確保其療效又減少副作用,顯得尤為重要。自噬是否是軟骨細胞在糖皮質激素下適應性地升高而對軟骨產生一個保護作用?自噬與衰老在地塞米松作用下的關系又如何?尚不得而知。3.研究內容：3.1體外試驗部分SD大鼠原代膝關節(jié)軟骨細胞與地塞米松、3-甲基腺嘌呤(3-MA)混合培養(yǎng)地塞米松(DX)濃度：空白組,0.1ug/mL,1ug/mL,25ug/mL,50ug/mL。3-MA與地塞米松混合分為5組：1 mmol/L 3-MA+0.1ug/mL DX,1 mmol/L 3-MA+lug/mL DX,1 mmol/L 3-MA+25ug/mL DX,1 mmol/L 3-MA+50ug/mLDX,1 mmol/L 3-MA。上述各組和軟骨細胞混合培養(yǎng)后第2天,第4天,第6天分別用LysoTracker Red和MDC染色觀察自噬囊泡的生成情況,Western blot檢測LC3、beclin-1、P62、p70S6K和4EBP1蛋白表達的變化。β-半乳糖苷酶染色分析地塞米松對軟骨細胞衰老的影響。3.2大鼠成體祖細胞與軟骨細胞共培養(yǎng)誘導其向軟骨細胞分化培養(yǎng)大鼠原代成體祖細胞及軟骨細胞并鑒定之。將傳代的軟骨細胞接種于Transwell 6板下層,對照組上層放置培養(yǎng)基,實驗組將第二代MAPC細胞接種于上層,孔徑為0.3μm的聚碳酸酯膜隔置于中間,。上層于共培養(yǎng)4天后移去,將對照組和實驗組細胞懸液放置于5%胎牛血清培養(yǎng)液中,觀察細胞形態(tài),第7天終止培養(yǎng),采用抗Ⅱ型膠原抗體熒光標記軟骨細胞。雙盲法分別計數(shù)兩組在熒光顯微鏡下陽性細胞比例,取平均值并進行統(tǒng)計學分析。共培養(yǎng)14天后,提取細胞RNA。RT-PCR方法檢測Ⅱ型膠原mRNA和聚集蛋白多糖含量。測定RNA在280 nm和260 nm處的吸光度,計算RNA濃度和純度。應用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析,記數(shù)資料均采用(x±s)表示。組間比較采用單因素方差分析,P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。3.3單純切除前交叉韌帶建立SD大鼠膝骨性關節(jié)炎動物模型SD大鼠10只,僅單純切除前交叉韌帶,術后2周、4周、6周脫頸處死。對不同時間點的SD大鼠膝骨性關節(jié)炎動物模型膝關節(jié)組織采用HE染色,甲苯胺藍染色和Masson染色,按照Mankin評分進行分級評定。3.4體內試驗部分建立大鼠膝骨性關節(jié)炎模型SD大鼠30只,分為A、B、C三組,每組各10只,A組僅切開皮膚模擬造模手術6周后在膝關節(jié)注射地塞米松, B組單純前交叉韌帶切斷造模術后6周在膝關節(jié)腔中注射地塞米松,C組單純前交叉韌帶切斷造模術后6周在膝關節(jié)腔中注射生理鹽水。每組里面又分2個小組(即A1、A2, B1、B2, C1、C2); A1、B1和C1組為術后6周注射一次藥物；A2、B2和C2組為術后6周注射-次藥物和術后7周注射一次藥物。隨機取材行膝關節(jié)軟骨組織的HE染色、Masson染色、番紅O固綠染色、β-半乳糖苷酶染色和LC3免疫組化染色進行衰老和自噬的評估。4.研究方法：4.1地塞米松對軟骨細胞自噬和衰老的影響4.1.1大鼠原代膝關節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)：用解剖刀將膝關節(jié)軟骨組織切成1mm3的小塊,放入培養(yǎng)皿,用PBS淹蓋。收集全部切碎的軟骨組織,去除PBS,加入適量的0.5%透明質酸酶,室溫下作用5分鐘。除去透明質酸酶,再次加入適量新鮮的0.5%透明質酸酶室溫下作用10分鐘。用0.2%胰蛋白酶沖洗軟骨組織碎塊2次,去除用過的胰蛋白酶,加入適量新鮮的0.2%胰蛋白酶,37℃下作用30分鐘。去除胰蛋白酶,用PBS清洗2次。用適量的0.2%膠原酶清洗5分鐘,去除清洗液后再加入適量膠原酶,37℃下作用90分鐘。收集上清液,離心三次,收集細胞,把細胞懸浮于適量培養(yǎng)液中(含12%FCS)在75cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。4.1.2試驗分組：地塞米松分為5組：空白組,0.1mg/L,1mg/L,25mg/L,50mg/L。3-MA與地塞米松(DXM)混合分為5組：空白組、10mmol/L3-MA、10mmol/L 3-MA+25mg/L DXM、25mg/L DXM。時間點：軟骨細胞與上述各組混合培養(yǎng)后第2天,第4天,第6天。4.1.3 Western blot檢測軟骨細胞的LC-3,Beclin-1的蛋白表達提取和測定總蛋,蛋白制樣及電泳,將蛋白質進行轉膜,濕轉法,封閉與顯色4.1.4 LysoTracker Red染色不同濃度的地塞米松作用軟骨細胞4天后。使用新鮮的培養(yǎng)基洗滌細胞3遍,滴加LysoTracker Red后在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30分鐘。使用綠色濾光片在倒置熒光顯微鏡下觀察細胞的染色情況。4.1.5 MDC染色經處理關節(jié)軟骨細胞使用PBS清洗3遍后,使用MDC在37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘。PBS洗滌細胞3次,使用紫外激發(fā)光直接在倒置熒光顯微鏡下觀察細胞。染色后的細胞再上流式細胞儀進行細胞自噬率的檢測。4.1.6 β-半乳糖苷酶染色軟骨細胞和25 mg/L的地塞米松混合培養(yǎng)24小時、48小時和72小時后使用p-半乳糖苷酶固定液在室溫下固定,再使用p-半乳糖苷酶染液染色12小時后在倒置顯微鏡下觀察細胞。4.1.7 GFP-RFP-LC3測定在地塞米松激素處理前,當軟骨細胞的融合度達到50-70%的時候,轉染mRFP-GFP-LC3腺病毒。感染復數(shù)適宜值為100。37℃下使用腺病毒孵育軟骨細胞2小時。再使用地塞米松處理來排除饑餓對自噬的影響。使用不同劑量的地塞米松處理4天后,使用共聚焦顯微鏡觀察軟骨細胞中的自噬體和自噬溶酶體。4.1.8 統(tǒng)計學處理全部數(shù)據以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示,采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析,組間差異比較采用單因素方差分析,兩兩之間比較用Turkey's方法進行檢測,以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。4.2大鼠成體祖細胞(MAPC)與軟骨細胞共培養(yǎng)誘導其向軟骨細胞分化4.2.1 MAPC原代培養(yǎng)及鑒定抽取SD大鼠骨髓5 ml注入培養(yǎng)瓶中。培養(yǎng)1天后換液,移去未貼壁細胞,每3天換液1次。細胞80%～90%融合后PBS洗滌2次,胰酶消化1分鐘,用吸管吹打至單細胞懸液,離心10分鐘后棄去上清液,接種于培養(yǎng)瓶中。倒置相差顯微鏡觀察細胞生長情況,錐蟲藍染色,計數(shù)活細胞數(shù),取平均值。將第2代MAPC消化,加入熒光標記抗體,用PBS洗去多余抗體,流式細胞儀檢測細胞陽性率。4.2.2軟骨細胞原代培養(yǎng)及鑒定將SD大鼠膝關節(jié)軟骨切成約2 mm3置于無菌試管,PBS沖洗后下離心3分鐘。逐次用胰酶及Ⅱ型膠原酶放置孵箱內消化。收集消化液離心3分鐘后棄去上清液,以1×105/ml接種于含有DMEM培養(yǎng)液的營養(yǎng)瓶中。原代細胞貼壁融合后傳代培養(yǎng),2天換液一次。觀察軟骨細胞的形態(tài)并甲苯胺藍染色鑒定。4.2.3 MAPC與軟骨細胞共培養(yǎng)收集第2代軟骨細胞吹打成單細胞懸液,接種于Transwell 6孔板下層,對照組上層放置培養(yǎng)基,實驗組將第二代MAPC細胞以同樣密度接種于上層,孔徑為0.3μm的聚碳酸酯膜隔置于中間。觀察細胞形態(tài)變化,兩天換液1次。4.2.4共培養(yǎng)對MAPC轉化軟骨細胞對比共培養(yǎng)4天后移去上層,將對照組和實驗組的細胞懸液放置于5%胎牛血清培養(yǎng)液中,每2天換液一次,第7天終止培養(yǎng),軟骨細胞用抗Ⅱ型膠原抗體熒光標記。隨機在實驗組和對照組各選取10個視野,用雙盲法分別計數(shù)兩組在熒光顯微鏡下陽性細胞比例,取平均值并進行統(tǒng)計學分析。4.2.5 RT-PCR檢測聚集蛋白多糖和Ⅱ型膠原nRNA含量共培養(yǎng)14天后,提取細胞RNA。RT-PCR方法檢測聚集蛋白多糖和Ⅱ型膠原mRNA含量。測定RNA在280 nm和260 nm處的吸光度,計算RNA濃度和純度。4.2.6統(tǒng)計學處理應用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析,記數(shù)資料均采用(x±s)表示。組間比較采用單因素方差分析,P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。4.3單純切除前交叉韌帶建立SD大鼠膝骨關節(jié)炎動物模型4.3.1手術操作用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠后,常規(guī)備皮消毒手術區(qū)域。取膝關節(jié)髕旁內側切口,切開皮膚及關節(jié)囊進入關節(jié)腔,向外側牽拉開髕骨,盡量屈曲膝關節(jié)以顯露前交叉韌帶,在直視下橫向切斷前交叉韌帶并行前抽屜試驗確認已完全斷裂。逐層縫合關節(jié)囊及皮膚。4.3.2術后處理每天每只大鼠肌肉注射青霉素20萬單位預防感染持續(xù)3天。大鼠分別于術后2周、4周、6周脫頸處死。取關節(jié)軟骨以10%福爾馬林固定后行組織學切片觀察。4.3.3評估分期膝關節(jié)軟骨行HE染色、Masson染色及甲苯胺藍染色,根據不同時間點進行Mankin評分。4.4體內試驗部分4.4.1建立大鼠膝骨性關節(jié)炎模型SD大鼠水合氯醛腹腔麻醉后膝關節(jié)內側縱向切口,切斷前交叉韌帶,注意勿損傷關節(jié)軟骨面,逐層縫合關閉創(chuàng)口。術后每天每只注射丁胺卡那霉素,連續(xù)3天,籠內自由活動。術后6周大鼠膝骨性關節(jié)炎模型建立。地塞米松藥液的配置：一支劑量為0.125g(5ml),按照成人體重60kg計算,人體常規(guī)用量為0.42mg/kg,按照人和大鼠用藥劑量換算公式為：大鼠劑量(mg/kg)=6.25×0.42mg/kg。即每只大鼠(270g)每次注射 0.709mg (0.028ml)即為相應人體的常規(guī)劑量。4.4.2實驗分組：SD大鼠30只,分為A、B、C三組,每組各10只,A組僅切開皮膚模擬造模手術6周后在膝關節(jié)注射地塞米松, B組單純前交叉韌帶切斷造模術后6周在膝關節(jié)腔中注射地塞米松,C組單純前交叉韌帶切斷造模術后6周在膝關節(jié)腔中注射生理鹽水。每組里面又分2個小組(即A1、A2, B1、B2, C1、C2);A1、B1和C1組為術后6周注射一次藥物；A2、B2和C2組為術后6周注射第一次藥物和術后7周注射第二次藥物。隨機取材行膝關節(jié)軟骨組織進行HE染色、Masson染色、番紅。固綠染色、β-半乳糖苷酶染色和LC3免疫組化染色,分別在鏡下觀察HE染色切片,Masson染色切片,番紅O/固綠染色切片,p-半乳糖苷酶染色切片和LC3免疫組化切片并評估衰老和自噬。5.結果5.1地塞米松對軟骨細胞自噬和衰老的影響對地塞米松作用4天后軟骨細胞進行Lyso-Tracker染色發(fā)現(xiàn)隨著地塞米松的濃度增加Lyso-Tracker染色陽性細胞數(shù)量也急劇增加。經地塞米松處理的軟骨細胞MDC染色和流式細胞儀分析。隨著地塞米松濃度的上升,軟骨細胞的MDC染色熒光強度明顯增加。經地塞米松作用后軟骨細胞自噬的發(fā)生率與對照組相比明顯升高,具有統(tǒng)計學意義。培養(yǎng)4天后,與對照組相比,地塞米松明顯促進軟骨細胞胞漿中點狀的紅色熒光和黃色熒光的數(shù)量,融合后形成點狀的黃色自噬體已經部分紅色的自噬溶酶體,并且具有劑量依賴性,這提示地塞米松可以明顯促進軟骨細胞中自噬流的形成,使得細胞中的自噬體逐漸地轉化成為自噬溶酶體。當軟骨細胞在不同濃度的地塞米松作用2天后,不同組之間的LC3-Ⅱ/β-actin沒有明顯差異；但是,LC3-Ⅱ/β-actin表達水平在混合培養(yǎng)4天后隨著地塞米松的濃度增加而顯著升高；6天后,在地塞米松濃度最高水平LC3-Ⅱ/β-actin的表達稍有下降。在P62、Beclin-1表達水平的變化與LC3-II的表達非常相似。p-p70S6K和p-4EBP1的表達水平在1mg/L和25mg/L地塞米松處理組相對于對照組明顯降低,比較差異有統(tǒng)計學意義,這表明地塞米松是通過mTOR依賴途徑抑制自噬。隨著地塞米松作用時間的延長,關節(jié)軟骨細胞的p-半乳糖苷酶染色陽性率明顯升高,作用72小時后最高。單純3-MA的作用并沒有引起軟骨細胞的p-半乳糖苷酶染色陽性率增加。但是采用3-MA與地塞米松共同作用軟骨細胞72小時后自噬被3-MA抑制,軟骨細胞中p-半乳糖苷酶染色的陽性率相對于單純地塞米松組明顯升高。5.2成體祖細胞(MAPC)與軟骨細胞共培養(yǎng)誘導前者向軟骨細胞分化在培養(yǎng)后24小時內原代MAPC大多數(shù)貼壁,呈多角形。24小時內換液,以后每2天換液1次,8天內貼壁其他細胞多死亡。剩余MAPC形態(tài)為長條形或梭形,呈克隆樣生長。傳代的MAPC細胞在1天內即出現(xiàn)生長,倍增時間約為2天。由生長曲線可見,MAPC在接種1天后開始增殖,第2-4天為對數(shù)生長期,第6天時細胞數(shù)量達到1.32×106/ml,然后進入平臺期。SD大鼠軟骨細胞在24小時內貼壁,呈三角形或四角形,6天內貼壁的其他細胞多死亡。剩余的軟骨細胞生長旺盛,甲苯胺藍染色顯示軟骨細胞存活及傳代較穩(wěn)定。流式細胞儀檢測結果表明,SSEA-1和CD13陽性細胞的百分比分別為21.47%和14.31%,說明細胞中MAPC占大部分。RT-PCR結果顯示,實驗組與對照組聚集蛋白多糖mRNA含量分別是1.46±0.51、6.61±0.34,Ⅱ型膠原mRNA含量分別是2.14±0.48、8.37±0.79,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.3單純切除前交叉韌帶建立SD大鼠膝骨性關節(jié)炎模型術后2周HE染色見軟骨表面出現(xiàn)少數(shù)散在的不規(guī)則裂隙；甲苯胺藍染色均勻且呈深藍；Masson染色軟骨基質被染成藍色,染色較均勻,細胞排列規(guī)則。術后4周HE染色見軟骨細胞輕度增生,細胞排列開始出現(xiàn)紊亂,軟骨淺層出現(xiàn)裂隙,表層及中層細胞收縮；甲苯胺藍染色不均勻；Masson染色軟骨基質被染成藍紅相間色,細胞分布規(guī)則。術后6周HE染色見軟骨層變薄,軟骨細胞排列層次紊亂,表面纖維化明顯,軟骨細胞數(shù)量有所減少;甲苯胺藍染色見軟骨組織大部分層次染色明顯變淺；Masson染色見紅色部分面積較多,藍色部分面積較少。單純切除前交叉韌帶造模術后2周Mankin評分是1.6分,術后4周Mankin評分是4.8分,術后6周Mankin評分是7.2分。5.4地塞米松對膝骨性關節(jié)炎動物模型的作用p-半乳糖苷酶染色：A1與B1,C1均有顯著性差異,A2和B2有顯著性差異,B2和C1有顯著性差異；LC3免疫組化：A1與B1有顯著性差異,A2與B2有顯著性差異,B2與C2有顯著性差異。局部注射地塞米松后B1和C1兩組及B2和C2兩組均無明顯差異,并沒有導致軟骨衰老加重；軟骨細胞自噬則表現(xiàn)出收到地塞米松的誘導作用,所以與前面體外軟骨細胞部分研究結果相似,地塞米松誘導軟骨細胞自噬同時抑制了衰老,因此可以解釋有許多患者膝關節(jié)局部注射封閉后自覺疼痛癥狀緩解。6.結論6.1地塞米松誘導軟骨細胞的衰老,并同時激活軟骨細胞中的自噬,而自噬在這過程中對細胞的衰老可能具有代償性的保護作用。同時地塞米松抑制mTOR信號通路,可能與自噬的激活相關。6.2成體祖細胞(MAPC)與軟骨細胞共培養(yǎng)后可誘導前者向軟骨細胞定向分化。6.3單純切除前交叉韌帶法可以造成大鼠膝骨關節(jié)炎模型,而且對膝關節(jié)組織損傷小,術后6周可以觀察到早中期骨關節(jié)炎病理變化。6.4中期膝骨性關節(jié)炎患者注射地塞米松后不會加重軟骨衰老,但自噬會明顯發(fā)生。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R684.3

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3 張元民;MiR-145在原發(fā)性膝關節(jié)骨性關節(jié)炎軟骨中的表達及其意義[D];天津醫(yī)科大學;2015年

4 張龍強;整合素β1促進GIT1表達而影響軟骨細胞增殖凋亡的研究[D];山東大學;2015年

5 馬中希;周期性張應力對大鼠生長板軟骨細胞的增殖和凋亡作用[D];華中科技大學;2015年

6 劉艷;BMP-2在骨性關節(jié)炎中表達的意義及其誘導凋亡及增殖的研究[D];吉林大學;2016年

7 甄允方;軟骨干細胞來源的微囊泡對骨髓間充質干細胞分化、增殖的作用及機理的研究[D];蘇州大學;2016年

8 鄢博;mTORC1通路調節(jié)PTHrP來調控軟骨生長、增殖、分化[D];南方醫(yī)科大學;2016年

9 張國梁;miRNA-502-5p對骨關節(jié)炎軟骨細胞損傷的生物學作用及機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2016年

10 薛恩興;地塞米松激活自噬對軟骨細胞衰老影響的研究[D];南方醫(yī)科大學;2016年

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1 李亮;骨形成蛋白-7促進多孔鉭—軟骨細胞分泌功能及基因表達的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

2 簡曉蕾;甲狀旁腺激素(1-34)對豚鼠自發(fā)性OA模型作用的體內體外實驗研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

3 趙陽;堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對多孔鉭—軟骨細胞復合物細胞增殖及分化影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

4 趙宏坤;精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（RGD）多肽修飾多孔鉭材料對軟骨細胞粘附性影響的實驗研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

5 魏麗杰;降鈣素對IL-1β誘導的大鼠軟骨細胞炎性反應的影響[D];河北聯(lián)合大學;2014年

6 張嶺;國產多孔鉭對大鼠軟骨細胞生物學行為及功能變化的體外研究[D];河北聯(lián)合大學;2014年

7 史東;uPA-siRNA重組慢病毒載體感染兔軟骨細胞對其增殖情況初步研究[D];石河子大學;2015年

8 劉登榜;可注射型工程化TGF-β_3重組軟骨細胞靶向治療OA的體外研究[D];遵義醫(yī)學院;2016年

9 陶雨雷;17β-雌二醇對骨性關節(jié)炎軟骨細胞mTOR信號通路影響的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學;2016年

10 侯威宇;骨髓間充質干細胞源性微囊泡作用于軟骨細胞NF-kB信號傳導通路機制的研究[D];山西醫(yī)科大學;2016年

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