本文選題：膠原誘導關(guān)節(jié)炎 + 三七總皂苷��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 類風濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）屬于慢性、系統(tǒng)性、炎癥性自身免疫性疾病。近年研究發(fā)現(xiàn)，心血管疾病在RA患者中的發(fā)病率、死亡率不斷增高，已成為RA的首要死亡原因。因此探索RA合并心血管損傷的發(fā)病機理及防治措施已成為RA研究中亟待解決的重要問題之一。本課題擬在建立膠原誘導性關(guān)節(jié)炎（CIA）大鼠模型的基礎(chǔ)上，通過觀察三七總皂苷（PNS）聯(lián)合雷公藤多苷（TG）對CIA大鼠模型外周血炎性細胞因子及心血管損傷相關(guān)因子，包括腫瘤壞死因子（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）、單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein1,MCP-I）、纖溶酶原激活物抑制劑(Plasminogen Activator Inhibitor-1,PAI-1)、血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelial growth factor,VEGF）水平，以及胸主動脈及心肌組織對MCP-1、VEGF表達的影響，探討中藥有效成分配伍對CIA大鼠心血管損傷的保護作用及其可能機制，為臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法： 選擇體重180-200g的Wistar大鼠，雌雄各半。電子天平稱重，測量雙側(cè)足爪容積后，隨機分為正常對照組和實驗組（CIA造模組）。實驗組大鼠于尾根部、右足跖及背部常規(guī)消毒后，皮內(nèi)注射雞II型膠原共0.2ml/只，第14天實驗組加強免疫一次，建立CIA模型。正常對照組用上述方法注入等量生理鹽水。造模后第21天測量成模大鼠體重、雙后足爪容積，計算關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI），將成模大鼠隨機分為模型組、雷公藤多苷組（TG）、TG+PNS、來氟米特組（LEF），每組6只。正常對照組和模型組用生理鹽水灌胃，其他組分別給予TG(10mg/kg)、TG+PNS(10mg/kg+200mg/kg)、LEF(10mg/kg)灌胃治療，共42d。灌胃第28d及第42d分別測量各組大鼠體重、雙后足爪容積及關(guān)節(jié)炎指數(shù)，灌胃結(jié)束后第2天，用10%水合氯醛腹腔麻醉，腹主動脈取血，留取血清。應用液相蛋白芯片技術(shù)檢測TNF-α、IL-6、MCP-1、PAI-1、VEGF含量。取血后立即打開胸腔，取出胸主動脈及心肌組織，分離周圍脂肪及結(jié)締組織，經(jīng)固定、脫水、包埋、HE染色，免疫組織化學法檢測胸主動脈及心肌組織MCP-1、VEGF的表達。 統(tǒng)計學處理：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS for windows13.0軟件進行統(tǒng)計學處理。計量資料正態(tài)分布數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（one-wayANOVA），P0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1實驗大鼠體重變化 造模前各組體重統(tǒng)計學無差異（P0.05）。造模后第21天，模型組、LEF組、TG組與TG+PNS組體重及體重增加值明顯低于空白對照組（P＜0.01）；但模型組、LEF組、TG組與TG+PNS組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。灌胃4周后，模型組、LEF組、TG組與TG+PNS組體重明顯低于空白對照組（P＜0.01）；模型組、LEF組、TG組與TG+PNS組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但TG+PNS組體重增加值最大，與模型組相比有統(tǒng)計學差異（P0.05）。灌胃6周后，模型組、LEF組、TG組與TG+PNS組體重明顯低于空白對照組（P＜0.01）；模型組、LEF組、TG組與TG+PNS組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但TG+PNS組體重增加值最大，明顯高于模型組（P0.01）、高于LEF組（P0.05）。 2各組大鼠雙側(cè)足爪腫脹率及抑制率的變化 給藥4周后，LEF組、TG組與TG+PNS組造模側(cè)（右）足爪平均腫脹率明顯低于模型組（P＜0.01）；LEF組、TG組與TG+PNS組間比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），但TG+PNS組對造模側(cè)腫脹足爪的抑制率稍優(yōu)于LEF及TG組（37.35％、30.16％、27.58%）。LEF組、TG組與TG+PNS組非造模側(cè)平均腫脹率明顯低于模型組（P＜0.01）；LEF組、TG組與TG+PNS組間比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。給藥后6周LEF組、TG組與TG+PNS組造模側(cè)（右）足爪平均腫脹率明顯低于模型組（P＜0.01）；TG+PNS組腫脹率低于TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；TG+PNS組與LEF組相比雖無統(tǒng)計學差異，但TG+PNS組抑制率優(yōu)于LEF組（52.89%VS46.65%）。LEF組、TG組與TG+PNS組非造模側(cè)足爪平均腫脹率明顯低于模型組（P＜0.01）；TG+PNS組腫脹率低于TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）；TG+PNS組與LEF組相比，差異無統(tǒng)計學意義，TG+PNS組抑制率略優(yōu)于LEF組（51.60%VS44.10%）。 3各組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）的變化 造模后第21天，模型組、TG組、LEF組、TG+PNS組之間的AI差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；灌胃4周后，與模型組相比，TG組、LEF組、TG+PNS組AI差異顯著（P0.01），其中TG+PNS組AI最低，但與TG組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。灌胃6周后，與模型組相比，TG組、LEF組、TG+PNS組AI差異顯著（P0.01），其中TG+PNS組平均AI最低。 4各組大鼠血清TNF-α、IL-6、MCP-1、PAI-1、VEGF水平比較 各組TNF-α血清水平（pg/ml）比較結(jié)果：模型組、LEF組、TG組明顯高于空白對照組，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；PNS+TG組高于空白組（P＜0.05）；模型組明顯高于LEF組、TG組、PNS+TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；PNS+TG組與LEF組、TG組相比水平最低，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。 各組IL-6血清水平（pg/ml）比較結(jié)果：模型組、LEF組、TG組明顯高于空白對照組，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；PNS+TG組高于空白組（P＜0.05）；模型組明顯高于LEF組、TG組、PNS+TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；PNS+TG組與LEF組、TG組相比水平最低，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。 各組MCP-1血清水平（pg/ml）比較結(jié)果：模型組、LEF組、TG組明顯高于空白對照組，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；PNS+TG組高于空白組（P＜0.05）；模型組明顯高于LEF組、TG組、PNS+TG組，，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；PNS+TG組與LEF組、TG組相比水平最低，有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。 各組PAI-1血清水平（pg/ml）比較結(jié)果：模型組、LEF組、TG組明顯高于空白對照組（P＜0.01）；PNS+TG組高于空白組,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；模型組明顯高于LEF組、TG組、PNS+TG組，有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；PNS+TG組與LEF組、TG組相比水平最低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 各組VEGF血清水平（pg/ml）比較結(jié)果：模型組、LEF組、TG組明顯高于空白對照組（P＜0.01）；PNS+TG組高于空白組,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；模型組明顯高于LEF組、TG組、PNS+TG組（P＜0.01）；PNS+TG組與LEF組、TG組相比水平最低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 5各組大鼠胸主動脈、心肌病理變化和MCP-1、VEGF的表達 5.1各組大鼠胸主動脈及心肌病理變化 大鼠胸主動脈病理變化：模型組胸主動脈的內(nèi)膜完整性差，可見泡沫細胞的形成，出現(xiàn)脂滴沉積，部分內(nèi)膜平滑肌細胞之間的連接被細胞外脂滴破壞，屬于動脈粥樣硬化Ⅲ型改變；在LEF組、TG組中可見部分單核細胞增多、聚集，內(nèi)膜內(nèi)輕度脂質(zhì)沉積，屬于動脈粥樣硬化Ⅰ型改變；PNS+TG組和空白對照組內(nèi)皮顯示完整，連續(xù)性相對較好，未見明顯病理改變。大鼠心肌病理變化：模型組可見心肌廣泛的炎性病變，部分心肌細胞間質(zhì)水腫，心肌細胞間可見散在的淋巴細胞，心肌細胞內(nèi)有局限性空泡變性；LEF組、TG組病變減輕，部分心肌細胞肥大及間質(zhì)輕度水腫，局部炎性細胞聚集，并可見部分心肌細胞排列紊亂；PNS+TG組治療效果最優(yōu)，僅可見零星炎性細胞，空白對照組的心肌結(jié)構(gòu)基本正常，心肌細胞未見明顯異常變化。 5.2各組大鼠胸主動脈及心肌VEGF、MCP-1表達 胸主動脈中各組VEGF表達（以灰度值表示）：模型組、LEF組、TG組明顯低于空白對照組（P＜0.01）；PNS+TG組低于空白組（P＜0.05）；模型組明顯低于LEF組、TG組、PNS+TG組，呈顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；LEF組、TG組明顯低于PNS+TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 胸主動脈中各組MCP-1表達（以灰度值表示）：模型組、LEF組、TG組明顯低于空白對照組（P＜0.01）；PNS+TG組低于空白組（P＜0.05），模型組明顯低于LEF組、TG組、PNS+TG組，呈顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；LEF組、TG組明顯低于PNS+TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 心肌中各組VEGF表達（以灰度值表示）：模型組、LEF組、TG組明顯低于空白對照組（P＜0.01）；PNS+TG組低于空白組（P＜0.05）；模型組明顯低于LEF組、TG組、PNS+TG組，呈顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；LEF組、TG組明顯低于PNS+TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 心肌中各組MCP-1表達（以灰度值表示）：模型組、LEF組、TG組明顯低于空白對照組（P＜0.01）；PNS+TG組低于空白組（P＜0.05）；模型組明顯低于LEF組、TG組、PNS+TG組，呈顯著性統(tǒng)計學差異（P＜0.01）；LEF組、TG組明顯低于PNS+TG組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 結(jié)論： 1、膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠TNF-α、IL-6、MCP-1、PAI-1、VEGF血清水平明顯升高，光鏡下主動脈內(nèi)膜可見脂質(zhì)沉積、泡沫細胞形成，心肌組織可見炎癥細胞浸潤，主動脈及心肌MCP-1、VEGF表達增強，證實CIA大鼠存在心血管損傷的相關(guān)因素。 2、三七總皂苷聯(lián)合雷公藤多苷明顯降低CIA大鼠足爪腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)及血清炎癥細胞因子TNF-α、IL-6水平，且較單用雷公藤多苷或來氟米特效果更優(yōu)，提示中藥有效成分配伍在抗炎方面具有增效作用。 3、在防治CIA大鼠心血管損傷方面，三七總皂苷與雷公藤多苷配伍具有顯著的增效/協(xié)同效應。其心血管保護作用機制包括：降低CIA大鼠血清PAI-1、MCP-1、VEGF及IL-6水平，減少胸主動脈脂質(zhì)沉積，抑制心肌組織炎性細胞浸潤，下調(diào)胸主動脈及心肌MCP-1、VEGF表達等。
[Abstract]:Objective:
Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic, systematic, and inflammatory autoimmune disease. Recent studies have found that the incidence and mortality of cardiovascular disease in RA patients are increasing, and it has become the leading cause of death in RA. Therefore, the exploration of the pathogenesis and prevention measures of RA combined with cardio tube injury has become a study of RA. One of the important problems to be solved is to establish a rat model of collagen induced arthritis (CIA) by observing 37 total saponins (PNS) combined with Tripterygium wilfordii polysaccharide (TG) on peripheral blood inflammatory cytokines and cardiovascular damage related factors in CIA rat models, including tumor necrosis factor (tumor necrosisfactor- alpha, TNF- alpha). Interleukin -6 (interleukin-6, IL-6), monocyte chemoattractant protein -1 (monocyte chemotactic protein1, MCP-I), plasminogen activator inhibitor (Plasminogen Activator Inhibitor-1, PAI-1), vascular endothelial growth factor (VEGF) level, and the expression of thoracic aorta and myocardial tissue To explore the protective effect of Chinese herbal medicine effective ingredients on cardiovascular damage in CIA rats and its possible mechanism, so as to provide experimental evidence for clinical application.
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本文編號：1816161