本文選題：痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變 + 木丹顆粒　； 參考：《遼寧中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:糖尿病(DM)是臨床上比較多見(jiàn)的一種慢性代謝性疾病,而糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)是DM常見(jiàn)的一種慢性神經(jīng)并發(fā)癥,患病率高達(dá)47%~91%,其中痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變(PDPN)的發(fā)生率可以達(dá)到13%~26%,是DPN早期的臨床體征之一,給DM患者帶來(lái)了很大的困苦,甚至導(dǎo)致糖尿病患者截肢、致死的嚴(yán)重后果。PDPN常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)有肢體對(duì)稱性麻木、疼痛、燒灼感、發(fā)涼、感覺(jué)減退,下午或夜間加重,以觸痛(allodynia)、自發(fā)痛(spontaneous pain)、痛覺(jué)過(guò)敏(hyperalgesia)為神經(jīng)病理性疼痛特征。然而,目前其發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜,尚不完全清楚,可能與氧化應(yīng)激、離子通道、炎癥反應(yīng)、高血糖等多種因素有關(guān)。糖尿病預(yù)防和治療的規(guī)范化綱要中,明確指出延緩糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展是糖尿病三級(jí)預(yù)防�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)上治療多采用控制血糖、抗抑郁類藥物、改善微循環(huán)、抗氧化、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)、離子通道抑制劑、抗癲癇藥或阿片類藥物等。但是,即使采用以上多種治療方法,疼痛仍然不能減輕。目前也沒(méi)有滿意治療效果的方案,而且西藥副作用大,不良反應(yīng)多,而中醫(yī)藥強(qiáng)調(diào)辨證施治,標(biāo)本同治,整體調(diào)節(jié),從多個(gè)角度,多個(gè)靶點(diǎn)治療,且無(wú)確切的副作用,在DPN治療方面發(fā)揮了明顯優(yōu)勢(shì)。木丹顆粒是于世家教授結(jié)合多年的臨床實(shí)踐,根據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論和中藥學(xué),辨病、辨證制定的方藥,精選黃芪,延胡索,三七,赤芍,丹參,川芎,紅花,蘇木,雞血藤九味中藥,嚴(yán)密配伍而成。該藥以益氣活血,通絡(luò)止痛而立法,臨床上治療本病的療效確切。以前研究結(jié)果證實(shí),木丹顆粒明顯提高糖尿病大鼠的坐骨神經(jīng)Na+-K+-ATP酶活性,上調(diào)糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)NGF、IGF-l蛋白的表達(dá),改善患者血漿內(nèi)啡肽水平,從結(jié)構(gòu)及功能上對(duì)周圍神經(jīng)起到保護(hù)作用,具有中醫(yī)獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),為進(jìn)一步探索其對(duì)PDPN的作用機(jī)制奠定了一定基礎(chǔ)。本次研究首先建立痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變(PDPN)的動(dòng)物模型,運(yùn)用病理形態(tài)學(xué)、RT-PCR法,酶聯(lián)免疫法、免疫組化法等現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢測(cè)方法,從組織形態(tài)和分子水平角度探討木丹顆粒對(duì)PDPN的作用機(jī)制。材料與方法:雄性Wistar大鼠180只,體質(zhì)量180~220g,8周(w)齡,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按體重層次隨機(jī)取30只,分為三組,分別為2w、4w、8w正常組(每組10只),其余造模,應(yīng)用鏈脲佐菌素(STZ)誘發(fā)PDPN大鼠模型,成模后的大鼠按血糖層次隨機(jī)分為,2w、4w、8w模型組(各12只)、2w、4w、8w苯妥英鈉組(各12只)、2w、4w、8w木丹顆粒組(各12只),以上各組均從成模后開(kāi)始每日灌胃給藥一次,連續(xù)8周,至各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束。在給藥治療后的第2、4、8周末,各組三個(gè)時(shí)間段隨機(jī)取8只大鼠,處死前測(cè)定大鼠尾靜脈血糖,機(jī)械性痛閾,坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度,以觀察大鼠血糖、行為學(xué)及神經(jīng)電生理的動(dòng)態(tài)變化;麻醉后取大鼠腓腸神經(jīng)制作病理切片和電鏡切片,應(yīng)用光鏡及電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)變化,取L4-5背根神經(jīng)節(jié)應(yīng)用光鏡觀察其形態(tài)學(xué)變化;另取大鼠L4-5背根神經(jīng)節(jié)及脊髓,采用免疫組化法及RT-PCR法觀察N型Ca2+通道及Kv7.3通道基因表達(dá)的變化;應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測(cè)定大鼠L4-5脊髓的TNF-α和IL-6水平的變化。結(jié)果:第一部分木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠神經(jīng)電生理和病理形態(tài)學(xué)的影響(1)木丹顆粒能夠明顯地改善糖尿病大鼠的癥狀。與模型組相比較,木丹顆粒組大鼠精神狀態(tài)比較好,飲水量、進(jìn)食量和尿量都明顯減少。實(shí)驗(yàn)期間,正常組大鼠的體質(zhì)量明顯增加,而模型組大鼠的體質(zhì)量明顯下降,與正常組比較,2w、4w和8w時(shí),有顯著性差異(P0.01);而木丹顆粒組大鼠的體質(zhì)量變化不明顯,與模型組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與正常組比較,在2w和4w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),8w時(shí),有顯著性差異(P0.01)。(2)實(shí)驗(yàn)期間,隨著時(shí)間延長(zhǎng),模型組大鼠血糖明顯升高,與正常組相比,2w,4w和8w時(shí)都有顯著性差異(P0.01);而治療組血糖變化不明顯,與模型組比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),與正常組相比,血糖仍高于正常組,在2w,4w,8w時(shí)有顯著性差異(P0.01)。(3)模型組大鼠機(jī)械性痛閾值隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng),呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì),與正常組相比,2w,4w和8w時(shí)有顯著性差異(P0.01);而治療組大鼠機(jī)械性痛閾值與模型組相比,呈升高趨勢(shì),在2w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),4w和8w時(shí),有顯著性差異(P0.01),與正常組相比,在2w和4w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),8w時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(4)實(shí)驗(yàn)期間,隨著時(shí)間延長(zhǎng),模型組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(NCV)明顯降低,與正常組相比,在2w,4w,8w時(shí)有顯著性差異(P0.01)。木丹顆粒組大鼠NCV與同期模型組比較,有所加快,2w和4w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),8周時(shí)有顯著性差異(P0.01),與正常組相比,2w、4w和8w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);苯妥英鈉組與正常組相比,2w、4w和8w時(shí)有顯著性差異(P0.01),與模型組比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(5)從組織超微結(jié)構(gòu)觀察到,正常組大鼠腓腸神經(jīng)纖維的髓鞘板層結(jié)構(gòu)清晰,致密、均勻、形態(tài)規(guī)則,軸索無(wú)腫脹及萎縮,神經(jīng)膜結(jié)構(gòu)正常。而模型組大鼠腓腸神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)模糊、松散,軸索微絲及微管斷裂,溶解,髓鞘脫失和板層分離現(xiàn)象,雪旺細(xì)胞的細(xì)胞核出現(xiàn)不規(guī)則,線粒體空泡形成。模型組大鼠隨著時(shí)間延長(zhǎng),神經(jīng)損害更加嚴(yán)重,而治療組明顯減輕其損害,效果優(yōu)于模型組。第二部分木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠的N型鈣離子通道和鉀離子通道Kv7.3表達(dá)的影響(1)木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠的N型鈣離子通道表達(dá)的影響RT-PCR法測(cè)定結(jié)果:模型組大鼠L4-5背根神經(jīng)節(jié)N型鈣離子通道m(xù) RNA表達(dá)水平隨著時(shí)間延長(zhǎng),呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì),與正常組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);治療組大鼠m RNA表達(dá)水平隨著時(shí)間延長(zhǎng),呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì),與模型組比,在4w和8w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),與正常組比較,2w時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);而木丹顆粒組和苯妥英鈉組兩組m RNA表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。免疫組化法測(cè)定結(jié)果:正常組少見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),模型組在各時(shí)間點(diǎn)(2w、4w、8w)陽(yáng)性表達(dá)開(kāi)始逐漸增強(qiáng),在脊髓內(nèi)有大量胞質(zhì)呈棕色的N型Ca2+通道表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞分布,與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。木丹顆粒組和苯妥英鈉組與模型組比較,陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)呈現(xiàn)減弱的趨勢(shì),在2周時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在4周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在8周時(shí)有顯著性差異(P0.01);與正常組比較,陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)強(qiáng),2周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而4周和8周時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。并且在2w、4w、8w時(shí),L4-5背根神經(jīng)節(jié)中陽(yáng)性表達(dá)比脊髓中的強(qiáng)。(2)木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠的鉀離子通道Kv7.3表達(dá)的影響RT-PCR法測(cè)定結(jié)果:模型組L4-5背根神經(jīng)節(jié)鉀離子通道Kv7.3 m RNA表達(dá)減少,與正常組相比,在2周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),在4周和8周時(shí)有顯著性差異(P0.01)。而木丹顆粒組和苯妥英鈉組m RNA表達(dá)逐漸增加,與模型組比,2w時(shí),木丹顆粒組和苯妥英鈉組m RNA表達(dá)雖有增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在4周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),8w時(shí)有顯著性差異(P0.01),而與正常組比較,在2周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而在4周和8周時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組化法測(cè)定結(jié)果:正常組大鼠L4-5背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞區(qū)有大量胞質(zhì)呈棕色的Kv7.3通道表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞分布,陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較強(qiáng);模型組在各時(shí)間點(diǎn)(2周、4周、8周)陽(yáng)性表達(dá)開(kāi)始逐漸減弱,表達(dá)明顯低于正常組,與正常組比較,在2周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在4周和8周時(shí)有顯著性差異(P0.01)。木丹顆粒組和苯妥英鈉組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)呈現(xiàn)增強(qiáng)的趨勢(shì),與模型組比較,在4周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在8周時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯增加,有顯著性差異(P0.01),而與正常組比較,陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)稍弱,在2周時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而在4周和8周時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而且在2w,4w和8w背根神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)比脊髓中強(qiáng)。第三部分木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠TNF-α和IL-6水平的影響模型組大鼠脊髓TNF-α和IL-6水平較正常組明顯升高,與時(shí)間呈正相關(guān)(2w時(shí)P0.05;而4w和8w時(shí)P0.01),木丹顆�？梢悦黠@下調(diào)TNF-α和IL-6水平,與模型組相比,2w和4w時(shí)P0.05;8w時(shí)P0.01)。結(jié)論:第一部分木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠的神經(jīng)電生理和病理形態(tài)學(xué)的影響(1)鏈脲佐菌素53mg/Kg單次腹腔注射所誘導(dǎo)PDPN大鼠模型的方法有一定的可行性的。(2)木丹顆粒只有抑制PDPN大鼠血糖升高作用。(3)木丹顆粒能夠提高PDPN大鼠的機(jī)械性痛閾值。(4)木丹顆粒可以促進(jìn)PDPN大鼠的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度加快。(5)木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠腓腸神經(jīng)及背根神經(jīng)節(jié)組織的損傷具有保護(hù)作用第二部分木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠的N型鈣離子通道和鉀通道Kv7.3表達(dá)的影響木丹顆�？赡芡ㄟ^(guò)下調(diào)PDPN大鼠L4-5背根神經(jīng)節(jié)及脊髓N型鈣離子通道基因表達(dá),上調(diào)鉀離子通道Kv7.3基因表達(dá)的作用,起到減輕了PDPN所引起神經(jīng)性疼痛等癥狀。第三部分木丹顆粒對(duì)PDPN大鼠TNF-α和IL-6水平的影響木丹顆�？赡芡ㄟ^(guò)下調(diào)TNF-α和IL-6水平,從而對(duì)PDPN大鼠起到抑制炎癥作用。
[Abstract]:Objective : Diabetes mellitus ( DM ) is a kind of chronic metabolic disease in clinic . The incidence of diabetic peripheral neuropathy ( PDPN ) can reach 13 % 锝，

本文編號(hào)：1734841