本文選題：子癇前期　切入點(diǎn)：合體滋養(yǎng)細(xì)胞微絨毛膜　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景和目的： 妊娠期高血壓疾病是孕期特有的疾病，發(fā)病率在5%-8%，造成的孕產(chǎn)婦死亡約占妊娠相關(guān)死亡總數(shù)的10%-16%。該病病因不明，治療上唯一確切有效的手段就是終止妊娠。對(duì)PE病因?qū)W的研究已經(jīng)歷了半個(gè)多世紀(jì)，近年來(lái)主要集中在血管內(nèi)皮損傷、免疫系統(tǒng)Th1/Th2的失衡、過(guò)氧化物損害以及胎盤源性不良因子釋放等方面。公認(rèn)的兩階段病因?qū)W說(shuō)認(rèn)為，妊娠早期階段，在遺傳易感性及免疫耐受失調(diào)等多因素作用背景下，滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不足，胎盤淺著床，為該病埋下隱患；妊娠晚期階段：胎盤源性因子大量異常釋放入母血，引起母體血管內(nèi)皮功能紊亂、全身性炎癥應(yīng)答加強(qiáng)，繼而出現(xiàn)高血壓、蛋白尿等子癇前期癥狀。而隨著妊娠終止，胎盤娩出，母體PE癥狀及實(shí)驗(yàn)室改變迅速恢復(fù)正常，故有學(xué)者認(rèn)為PE可能是一個(gè)胎盤源性疾病。 正常妊娠晚期時(shí)孕婦全身各系統(tǒng)均會(huì)表現(xiàn)相應(yīng)的變化，其中外周血的APTT、PT縮短，F(xiàn)IB升高，孕婦機(jī)體處于血液高凝狀態(tài)，為預(yù)防分娩出血奠定基礎(chǔ)。血液及凝血系統(tǒng)的這一改變屬于妊娠晚期的生理過(guò)程。而PE孕婦血液及凝血系統(tǒng)的改變與正常孕婦差異較大，且在發(fā)病的早期階段即出現(xiàn)了這一異常改變。PE的嚴(yán)重并發(fā)癥---HELLP綜合征，臨床上出現(xiàn)血小板減少、溶血、肝酶升高，為該病引起凝血功能損害的重度表型。但迄今為止，PE患者血液及凝血系統(tǒng)的變化規(guī)律、與疾病的嚴(yán)重程度，影響這一病理變化的核心分子及病因機(jī)制尚不明了。既往研究多集中在PE患者外周血中凝血物質(zhì)的改變，包括促凝物質(zhì)TAT、可溶性纖維蛋白及TM、蛋白C、AT-Ⅲ等指標(biāo)。而臨床輔助檢查的結(jié)果，僅能從現(xiàn)象上提示PE患者有凝血機(jī)能的變化，其對(duì)疾病的變化影響、嚴(yán)重程度的判定、如何指導(dǎo)臨床診治尚缺乏清晰的思路，且導(dǎo)致PE孕婦血液及凝血功能異常的中心環(huán)節(jié)尚無(wú)合理解釋，因此，有深入研究的必要。 近些年，胎盤形成過(guò)程中的功能狀態(tài)及后續(xù)的胎盤源性不良因子釋放增加在PE發(fā)病中的作用受到越來(lái)越多的關(guān)注。胎盤源性不良因子包括類花生酸類、sFlt-1、合體滋養(yǎng)細(xì)胞微絨毛膜(syncytiotrophoblast microvillous membrane，STBM)、過(guò)氧化物類分子等,可能在子癇前期的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。STBM是一種含有合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞質(zhì)及信號(hào)的帶膜囊泡狀結(jié)構(gòu)。正常妊娠孕婦外周血中STBM脫落釋放，發(fā)揮著母胎界面信號(hào)傳導(dǎo)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)交換作用，它的脫落受滋養(yǎng)細(xì)胞激活和凋亡的影響，不斷順應(yīng)機(jī)體發(fā)生生理或病理的變化。而已有研究觀察到PE患者外周血STBM含量顯著增加，尤其在早發(fā)型PE則更為明顯。體外實(shí)驗(yàn)認(rèn)為STBM可能通過(guò)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、破壞其單層分布結(jié)構(gòu)、干擾小動(dòng)脈的舒張功能，調(diào)節(jié)機(jī)體炎性因子釋放和調(diào)控細(xì)胞免疫等多種途徑影響母體免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致PE的發(fā)生。我課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，STBM在小鼠體內(nèi)可以誘發(fā)子癇樣改變，成功構(gòu)建了小鼠子癇前期/子癇模型，但尚未進(jìn)一步研究STBM在模型鼠各器官及系統(tǒng)的功能改變。結(jié)合PE孕婦外周血STBM顯著上調(diào)及血液凝血系統(tǒng)變化的客觀證據(jù)，我們推測(cè)，STBM可能對(duì)孕婦凝血功能產(chǎn)生影響，導(dǎo)致組織器官缺血缺氧、干擾細(xì)胞正常代謝，，引起器官功能障礙，最終子癇前期及子癇發(fā)生。但其具體作用模式及途徑有待進(jìn)一步研究。 材料和方法： (一)子癇前期孕婦不同孕期凝血功能的變化 1.研究對(duì)象第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院常規(guī)產(chǎn)檢并分娩的PE及正常孕婦 2.血液的采集用含抗凝劑的真空采血管取孕婦靜脈血，離心得血漿，2小時(shí)內(nèi)上機(jī)檢測(cè)。 3.指標(biāo)檢測(cè)用全自動(dòng)儀測(cè)凝血5項(xiàng)和血小板指標(biāo)。 4.數(shù)據(jù)整理、統(tǒng)計(jì)運(yùn)用EXCEL及SPSS軟件處理數(shù)據(jù)。 (二) STBM上調(diào)對(duì)小鼠凝血功能的影響 1.STBM的制備與鑒定取正常孕17天的C57BL/6小鼠，無(wú)菌條件制備STBM、測(cè)蛋白含量、掃描電鏡驗(yàn)證。 2.實(shí)驗(yàn)分組已孕組分為五組，分別是PBS組(P-CTL)、低濃度STBM組(P-S-L)、中濃度組STBM(P-S-M)、高濃度STBM組(P-S-H)、高濃度STBM+肝素組(P-S-H+heprin)；未孕組為中濃度STBM組(NP-S-M)。自孕10天起，尾靜脈注射相應(yīng)液體0.2ml/d；P-S-H組、P-S-H+heprin組孕17天時(shí)注射。 3.采集小鼠血標(biāo)本麻醉下挖眼取小鼠的血并離心制血漿，取肺臟和腦組織后處死小鼠。將血漿標(biāo)本保存于-20°C，組織用多聚甲醛固定24h后包蠟，常溫保存。 4.檢測(cè)凝血五項(xiàng)在全自動(dòng)凝血儀上測(cè)定凝血指標(biāo)(APTT、PT、D-D)。 5.檢測(cè)凝血物質(zhì)按照ELISA試劑要求，分別測(cè)凝血酶復(fù)合物(TAT)、活化蛋白C(APC)、抗凝血酶(AT-III)、凝血調(diào)節(jié)蛋白(TM)、組織因子(TF)及組織因子途徑抑制物(TFPI)六項(xiàng)指標(biāo)。 5.孕鼠肺、腦組織的HE染色，在光鏡下進(jìn)行觀察，采集圖像。 結(jié)果： (一)子癇前期孕婦不同孕期凝血功能的變化 在正常妊娠組、wPE組、sPE組孕婦，晚孕期外周血漿FIB水平均較早孕期顯著升高(P0.05)，APTT均顯著縮短(P0.05)；與正常妊娠、wPE組比較，sPE組孕婦晚孕期TT顯著升高(P0.05)，D-D值顯著升高(P0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PT無(wú)明顯改變；在正常妊娠、wPE、sPE組孕婦，晚孕期外周血PLT水平均顯著降低(P0.05)，MPV顯著上調(diào)(P0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PDW、PCT未見明顯改變。 (二) STBM上調(diào)對(duì)小鼠凝血功能的影響 制備的STBM總蛋白含量為0.73±0.10mg/ml，掃描電子顯微鏡下可見直徑約200-500nm的囊泡狀結(jié)構(gòu)成團(tuán)簇?fù)�，部分發(fā)生融合，符合STBM固有特征。 1.小鼠的凝血五項(xiàng) 與P-CTL組比較，P-S-M組的APTT縮短(P0.05)，PT縮短(P0.05)，D-D增高不明顯。P-S-L組與NP-S-M組無(wú)明顯變化。 2.小鼠各項(xiàng)凝血物質(zhì)比較 隨著STBM濃度的升高，TAT、APC、TF、TFPI呈升高趨勢(shì)。與P-CTL組比較，P-S-M組以及NP-S-M組的TF/TFPI均顯著升高(P0.05)，P-S-L組變化不明顯。與P-CTL組和P-S-H+heprin組，P-S-H組的TAT顯著上調(diào)(P=0.02)、APC也明顯升高(P0.05)。與P-S-M組對(duì)比，NP-S-M組各值無(wú)明顯變化。 3.小鼠血栓形成 P-S-H組較之P-CTL組小鼠的肺臟及腦病理切片中，見均質(zhì)紅染無(wú)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)填滿血管內(nèi)腔，考慮透明血栓形成。 結(jié)論： 1.子癇前期患者的外周血中STBM釋放增加可引起凝血及纖溶系統(tǒng)激活，尤其在sPE患者TT顯著延長(zhǎng)、D-D明顯升高，提示PE患者處于“超高凝狀態(tài)”； 2.隨著STBM脫落的增加，小鼠外周血中APTT、PT明顯縮短，TF/TFPI顯著上調(diào)，證實(shí)外源性凝血途徑被激活，小鼠出現(xiàn)類似PE孕婦的高凝狀態(tài)； 3. STBM引發(fā)的類子癇樣模型的小鼠外周血中，TAT及APC顯著升高，可能是凝血功能異常的關(guān)鍵分子。
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【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R714.244

【參考文獻(xiàn)】

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3 楊孜;王伽略;黃萍;石凌懿;李蓉;葉蓉華;陳蕾;;重度子癇前期臨床發(fā)病類型及特點(diǎn)與圍產(chǎn)結(jié)局的關(guān)系[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2006年05期

本文編號(hào)：1638833