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高壓電燒傷對大鼠血清ROS和GSH的影響及烏司他丁的干預(yù)作用

發(fā)布時間:2018-03-16 14:26

  本文選題:高壓電 切入點(diǎn):電燒傷 出處:《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:目的:高壓電燒傷時電能在機(jī)體轉(zhuǎn)化為熱能而造成深部組織(如血管、臟器等)嚴(yán)重?fù)p傷。電燒傷是特殊類型的燒傷,不僅能造成機(jī)體的局部損害,還能造成機(jī)體整體的損傷,但其機(jī)制尚不完全明確。目前大量文獻(xiàn)報道,燒傷后早期機(jī)體產(chǎn)生大量活性氧(reactive oxygen species,ROS)可直接損傷機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和糖類等結(jié)構(gòu),并與血管活性物質(zhì)和炎癥因子等協(xié)同作用,引起細(xì)胞形態(tài)及功能的改變,造成機(jī)體損傷[1]。烏司他丁(ulinastain,UTI)具有清除氧自由基和抑制炎癥介質(zhì)釋放等作用。那么高壓電燒傷后機(jī)體是否存在氧化應(yīng)激,如果發(fā)生了氧化應(yīng)激損傷,氧化產(chǎn)物及抗氧化物質(zhì)的含量的變化趨勢如何?本實驗旨在研究高壓電燒傷早期大鼠血清氧化產(chǎn)物ROS、抗氧化物質(zhì)還原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)的含量變化,探討高壓電燒傷后氧化應(yīng)激和抗氧化系統(tǒng)損傷的程度,并通過UTI進(jìn)行干預(yù),探討UTI改善高壓電燒傷后氧化應(yīng)激損傷的可行性。方法:1實驗動物分組成年健康SD大鼠240只,按隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為4組:假電燒傷組(簡稱假傷組)、高壓電燒傷組(簡稱電傷組)、電傷后鹽水對照組(簡稱鹽水組)和UTI治療組(簡稱UTI組),每組各60只。每組再次應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法按觀察時間分為6個時相組,即電傷前15min、電傷后5min、電擊后1h、2h、4h、8h,每組各10只大鼠,分籠飼養(yǎng)。2實驗前準(zhǔn)備a.將大鼠編號、稱重;b.配制實驗所需麻醉藥物和UTI溶液濃度;c.10%水合氯醛按(3ml/kg)的劑量腹腔注射麻醉實驗大鼠,麻醉成功后給予左前肢及右后肢及前胸脫毛及備皮;d.準(zhǔn)確記錄數(shù)據(jù)。3大鼠高壓電燒傷模型建立實驗人員分組檢查具體操作和檢查操作程序,確保按步驟安全操作。檢測電源及電路,檢查實驗電源、電擊系統(tǒng)與線路連接正確無誤。再固定大鼠及連線,將麻醉狀態(tài)的大鼠俯臥位于專用絕緣臺上,固定其四肢,以左前肢為電流流入端,右后肢為電流流出端,把兩個1 cm×1 cm大小的銅質(zhì)電極板分別固定在左前肢和右后肢脫毛處,左前肢電極板與升壓器輸出端火線相連,右后肢電極板與升壓器輸出端零線相連,電極板與大鼠皮膚固定緊密。旋轉(zhuǎn)調(diào)壓器按鈕使調(diào)壓指針歸零,然后合總閘,接通380V電源;開啟調(diào)壓器,旋轉(zhuǎn)調(diào)壓按鈕,將額定電壓調(diào)至2k V,此時升壓器輸出電壓為2k V。用4m絕緣桿合閘,接通升壓器輸出電路,此時高壓電流流經(jīng)大鼠,大鼠被電擊3s后斷電,確定模型制作是否成功。假傷組除升壓器輸出電線環(huán)路開關(guān)不合閘外,其它處理過程與電傷組一致。其中UTI組在電傷后立即于腹腔內(nèi)注射UTI,按2×104u/kg(即2ml/kg)給藥;鹽水組立即腹腔內(nèi)注射2ml/kg生理鹽水。電傷組和假傷組不給于處理。4標(biāo)本的采集及保存按實驗分組的時相分別采血,將麻醉成功后的大鼠取仰臥位,四肢伸展固定于實驗動物手術(shù)臺上,將胸壁再次消毒,沿胸壁打開胸腔顯露心臟,用無菌注射器于直視下,心臟采血6ml,置于一次性促凝采血管中,輕輕震蕩數(shù)次,靜置約30min,待血液自然凝固,析出血清。將凝固的全血以3000r/min離心,離心時間為10min,離心半徑為13.5cm。離心后用移液器取上層血清至Eppendorf管中,準(zhǔn)確標(biāo)記后將血清貯藏于 70℃冰箱中待用。5指標(biāo)檢測采用ELISA雙抗體夾心法,檢測4組各時相血清ROS、GSH的OD值,根據(jù)試劑盒說明制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出樣本ROS和GSH的濃度值。6實驗數(shù)據(jù)處理采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件,行兩因素析因設(shè)計的方差分析,多重比較采用LSD法t檢驗。以α=0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。結(jié)果:1大鼠血清ROS含量變化電傷組ROS含量總體高于假電組(主效應(yīng)F=1717.281,P0.05);電傷組ROS含量受電后時間變量影響(主效應(yīng)F=219.585,P0.05),其中電傷組大鼠血清ROS含量傷后1h~8h各時相均高于本組電傷前值(P0.05),且呈逐漸增高趨勢。UTI組ROS含量總體低于鹽水組(主效應(yīng)F=42.825,P0.05);UTI組ROS含量受電后時間變量影響(主效應(yīng)F=880.082,P0.05),UTI組電傷后1~8h各時相均高于本組電傷前值(P0.05)。2大鼠血清GSH含量變化電傷組GSH表達(dá)總體低于假傷組(主效應(yīng)F=302.346,P0.05);電傷組GSH含量受電后時間變量影響(主效應(yīng)F=35.412,P0.05),其中電傷組大鼠血清GSH含量傷后1~8 h各時相均低于本組電傷前值(P0.05),且呈逐漸減低趨勢。UTI組GSH含量總體高于鹽水組(主效應(yīng)F=40.488,P0.05);UTI組GSH含量受電后時間變量影響(主效應(yīng)F=383.968,P0.05),UTI組電傷后1~8h各時相均低于本組電傷前值(P0.05)。結(jié)論:高壓電燒傷后早期大鼠血清ROS水平升高,而抗氧化物質(zhì)GSH水平降低,而應(yīng)用UTI后可抑制ROS的增多和GSH的減少,減輕機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷程度,增加機(jī)體的抗氧化能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:R647

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號:1620311

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