發(fā)布時(shí)間：2018-03-11 22:37

  本文選題：手術(shù)創(chuàng)傷　切入點(diǎn)：高遷移率族蛋白1　出處：《華中科技大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 結(jié)直腸癌已成為第三大癌癥發(fā)生和死亡原因,手術(shù)切除仍然是可能治愈結(jié)直腸癌的唯一治療方法,然而結(jié)直腸癌的術(shù)后復(fù)發(fā)還是臨床亟待解決的問題。手術(shù)在治療腫瘤的同時(shí)也常常帶來創(chuàng)傷,手術(shù)創(chuàng)傷可釋放多種損傷相關(guān)分子模式分子包括HMGB1,同時(shí)也通過多種機(jī)制引起免疫抑制,而免疫抑制如MDSC與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。結(jié)直腸癌手術(shù)創(chuàng)傷對(duì)腫瘤腹腔種植復(fù)發(fā)的影響還不清楚。本研究旨在通過動(dòng)物腫瘤手術(shù)模型探索手術(shù)創(chuàng)傷在結(jié)直腸腫瘤腹腔局部復(fù)發(fā)中作用。 方法： 通過腹部手術(shù)模擬結(jié)直腸腫瘤的手術(shù)創(chuàng)傷,收集術(shù)后24小時(shí)腹腔滲液,用HMGB1的ELISA試劑盒檢測(cè)HMGB1水平；給于外源性HMGB1注射小鼠腹腔三次,每天一次,收集腹腔灌洗液,流式檢測(cè)MDSC在CD45中的比例和計(jì)數(shù)MDSC在灌洗液中的數(shù)量；體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞系CT26,皮下種植CT26細(xì)胞,制造小鼠負(fù)瘤模型；兩周后麻醉小鼠,剝除腫瘤并制造腹腔內(nèi)手術(shù)損傷,模擬腹腔腫瘤切除手術(shù)。用HMGB1Box-A阻斷HMGB1,用Gemcitabine清除MDSC,收集小鼠腹腔灌洗液,流式檢測(cè)腹腔灌洗液中MDSC的比例和數(shù)量；給HMGB1阻斷組、Gemcitabine去除組、單純手術(shù)組和對(duì)照組腹腔創(chuàng)傷小鼠種植CT26細(xì)胞,兩周后對(duì)腫瘤種植負(fù)荷評(píng)分。收集HMGB1阻斷、Gemcitabine去除組、單純手術(shù)組和對(duì)照組腹腔創(chuàng)傷術(shù)后腹腔中MDSC,分別用DAF-FM DA熒光探針和DCFH-DA熒光探針標(biāo)記MDSC,流式檢測(cè)NOS活性和ROS水平。應(yīng)用NOS抑制劑(L-NAME)和ROS清除劑(Tiron)注射創(chuàng)傷術(shù)后腹腔,同時(shí)腹腔種植CT26,兩周后進(jìn)行腹腔腫瘤種植評(píng)分,評(píng)估L-NAME和Tiron對(duì)CT26腹腔種植的影響。 結(jié)果： 正常小鼠手術(shù)后腹腔滲液的HMGB1濃度平均為4237.67ng/ml,負(fù)瘤小鼠手術(shù)后腹腔滲液的HMGB1濃度平均為3300.67ng/ml,負(fù)瘤小鼠無手術(shù)時(shí),腹腔液中HMGB1濃度平均為53.97ng/ml。正常小鼠腹腔中只有很少量的MDSC存在,只占CD45陽性細(xì)胞的2%左右,而腹腔中只有數(shù)量有限的MDSC,約為2.4×10^3個(gè)MDSC細(xì)胞；100ng/ml HMGB1處理組小鼠腹腔中MDSC比例占CD45陽性細(xì)胞的10%,lml腹腔灌洗液含有MDSC數(shù)量為3.9×10^4；1000ng/ml HMGB1處理組小鼠腹腔中MDSC比例占CD45陽性細(xì)胞的30%,lml腹腔灌洗液中有1×10^5左右個(gè)MDSC細(xì)胞,與對(duì)照組相比此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。HMGB1拮抗劑HMGB1Box-A處理后,小鼠腹腔灌洗液中MDSC占CD45陽性細(xì)胞比例為12%,lml小鼠腹腔灌洗液中MDSC數(shù)量為0.75×10^6；單純手術(shù)組小鼠腹腔灌洗液中MDSC比例為73%,1ml小鼠腹腔灌洗液中MDSC可達(dá)6.0×10^6,另外術(shù)前給以Gemcitabine去除小鼠體內(nèi)的MDSC后,趨化至小鼠腹腔中MDSC比例約為28%,lml小鼠腹腔灌洗液中MDSC數(shù)量減少為1.3×10^6；負(fù)瘤小鼠無手術(shù)組,小鼠腹腔灌洗液中MDSC比例為2.3%,lml小鼠腹腔灌洗液中MDSC為2.0×10^3。小鼠腹膜腫瘤種植評(píng)分結(jié)果顯示非手術(shù)組、HGMB1Box-A處理組、Gemcitabine組和手術(shù)組小鼠壁層腹膜腫瘤種植總評(píng)分分別為：2.0±1.0,5.0±1.0,7.3±3.0和10.4±3.5,組內(nèi)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.008)；而總的腹腔種植轉(zhuǎn)移評(píng)分分別為：6.7±1.5,11.0±1.0,13.5±3.8和18.8±3.5,組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.001)。同時(shí),腹腔種植腫瘤病灶的最大直徑分別為：0.3±0.1cm、0.3±0.1cm,0.5±0cm和0.8±0.3cm,組內(nèi)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.013)。NOS和ROS活性檢測(cè)結(jié)果顯示手術(shù)創(chuàng)傷募集的MDSC中DAF-FMDA探針熒光強(qiáng)度較無手術(shù)組明顯增加,而Gecitabine和]HMGB1Box-A組DAF-FMDA探針熒光較手術(shù)組減弱；手術(shù)組與Gemcitabine處理組和無手術(shù)組小鼠腹腔灌洗液的MDSC中DCFH-DA探針熒光強(qiáng)度差異不大,而手術(shù)組與HMGB1Box-A處理組小鼠腹腔灌洗液的MDSC中DCFH-DA探針熒光強(qiáng)度有顯差異。然而,HMGB1Box-A處理組較無手術(shù)組小鼠腹腔灌洗液的MDSC中DCFH-DA探針熒光強(qiáng)度也明顯減弱。用NOS和ROS抑制劑干預(yù)后,評(píng)估腫瘤腹腔種植轉(zhuǎn)移負(fù)荷結(jié)果顯示手術(shù)組、Tiron處理組和L-NAME組小鼠壁層腹膜腫瘤種植總評(píng)分分別為：8.5±1.3,6.3±3.7和4.8±1.3,組內(nèi)比較差異不明顯(p=0.134)；而總的腹腔種植轉(zhuǎn)移評(píng)分分別為：16.3±1.0,12.3±3.7和9.7±1.5,組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.011)。同時(shí),腹腔種植腫瘤病灶的最大直徑分別為：0.7±0.1cm、0.5±0.1cm和0.5±0.1cm,組內(nèi)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.044) 結(jié)論： 我們通過動(dòng)物腫瘤手術(shù)模型研究表明手術(shù)創(chuàng)傷導(dǎo)致?lián)p傷組織釋放損傷相關(guān)分子HMGB1,HMGB1可以募集大量的髓系來源免疫抑制性細(xì)胞MDSC趨化至腹腔,阻斷HMGB1可抑制MDSC的趨化,減輕結(jié)腸癌細(xì)胞CT26腹腔種植,腹腔術(shù)后趨化的MDSC通過產(chǎn)生NOS促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞種植灶的形成和生長(zhǎng),通過產(chǎn)生ROS促進(jìn)CT26腫瘤種植灶的增大。
[Abstract]:Objective:
Colorectal cancer has become the third largest cause of death and cancer, surgical resection is still the only treatment may cure colorectal cancer, however, colorectal cancer recurrence or clinical problems. Surgery in the treatment of tumor and often bring trauma, surgical trauma can release a variety of damage associated molecular patterns including molecular HMGB1 at the same time also caused by a variety of mechanisms of immune suppression and immune suppression, advances such as MDSC and tumor is closely related to the effect of trauma surgery for colorectal cancer on tumor peritoneal recurrence is unclear. The purpose of this study is through animal tumor model to explore surgical trauma in local recurrence of colorectal cancer in the abdominal cavity.
Method錛，

本文編號(hào)：1600265