本文選題：腎盂積水　切入點(diǎn)：環(huán)孢素A　出處：《武漢大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景：隨著電子技術(shù)的發(fā)展,各種醫(yī)療設(shè)備的更新更加趨向于電子化、精細(xì)化,現(xiàn)在腔鏡手術(shù)已逐漸成為外科手術(shù)的常規(guī)治療方法,成為大多數(shù)醫(yī)生和患者的更加傾向的治療手段,尤其在泌尿外科領(lǐng)域,隨著泌尿系結(jié)石發(fā)病率的增高,結(jié)石的處理方式更加微創(chuàng)化,伴隨著醫(yī)療設(shè)備的進(jìn)步,各種輸尿管鏡、腎鏡及輸尿管軟鏡等已經(jīng)廣泛應(yīng)用于結(jié)石的處理,因其切口小、住院時(shí)間短、碎石效果好、術(shù)后恢復(fù)快等特點(diǎn)基本取代了傳統(tǒng)的開(kāi)放手術(shù),成為大多數(shù)醫(yī)生和患者首選的治療的方式,但是,由于腔鏡手術(shù)空間的局限性,整個(gè)手術(shù)過(guò)程只能在泌尿系腔道內(nèi)進(jìn)行,所以在一定程度上增加了腔道內(nèi)的壓力,尤其是在術(shù)前因結(jié)石引起的腎臟積水固有的腎臟病理性損傷,更加加重了腎臟的損傷,當(dāng)腎盂內(nèi)壓力超過(guò)一定界限時(shí)導(dǎo)致腎臟缺血性損傷,從而導(dǎo)致急性腎衰竭。當(dāng)腎臟發(fā)生缺血性損傷時(shí),最先出現(xiàn)功能障礙的是腎小管細(xì)胞,在腎小管細(xì)胞病理生理過(guò)程中,腎小管細(xì)胞的線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開(kāi)放是關(guān)鍵環(huán)節(jié),其并發(fā)的線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是造成腎小管細(xì)胞損傷的重要因素,環(huán)孢素A是特異性的MPTP抑制劑代表,目前在許多腎臟和腎外器官動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和一部分小規(guī)模臨床研究中已經(jīng)證實(shí)其可以通過(guò)抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)而減少臟器的缺血性損傷,本課題擬先建立不同程度腎積水模型,在腎盂灌注之前先藥物干預(yù)治療,觀察環(huán)孢素A對(duì)積水腎腎盂灌注時(shí)的保護(hù)作用。目的：建立不同程度的腎臟積水模型,通過(guò)藥物的靶向干預(yù)治療,探討環(huán)孢素A (CsA)對(duì)不同程度積水腎在受到外界腎盂壓力灌注時(shí)的保護(hù)作用,觀察線粒體靶向干預(yù)治療后,積水腎在受到外界腎盂灌注后腎小管細(xì)胞線粒體形態(tài)及功能改變情況。方法：(1)取成年新西蘭大白兔24只,雌雄不拘,隨機(jī)分為3組,分別為對(duì)照組(n=6)、輕度腎積水組(n=9)和重度腎積水組(n=9)。經(jīng)耳靜脈麻醉后取腹部正中切口,暴露左側(cè)輸尿管上段,并游離輸尿管上段及腰大肌,對(duì)照組僅暴露輸尿管后立即關(guān)閉切口,將實(shí)驗(yàn)組的左側(cè)輸尿管上段1/4和2/3分別埋入腰大肌裂隙內(nèi),制作成輸尿管輕度和重度梗阻模型,然后3-0腸線逐層關(guān)閉腹腔。隔日行雙腎B超探查,觀察腎臟積水及輸尿管擴(kuò)張情況,2周后用B超探頭探查左側(cè)腎臟及輸尿管積水?dāng)U張情況；石蠟切片標(biāo)本HE染色觀察腎小管損傷情況；電子顯微鏡下觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)改變。(2)購(gòu)買成年新西蘭大白兔48只,雌雄不拘,分為兩組,每組24只分別建立輕度(M)和重度(S)腎積水模型,每組再隨機(jī)分為4個(gè)亞組,兩組中各取12只分別行CsA灌胃,1周后M組分別行60和100mmHg灌注,S組分別行20和60mmHg灌注,灌注后48h取腎行腎臟損傷評(píng)定,蘇木素-伊紅(HE)染色觀察腎組織變化,免疫組化學(xué)測(cè)NGAL表達(dá),Wstern-blot檢測(cè)細(xì)胞色素C和半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶(caspase)-3表達(dá)。(3)取第二部分實(shí)驗(yàn)獲得部分腎臟標(biāo)本,提取線粒體,行透射電鏡檢測(cè),觀察線粒體形態(tài)改變情況；通過(guò)線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒行線粒體膜電位檢測(cè),觀察線粒體膜電位變化情況。結(jié)果：(1)造模結(jié)束2周后,B超探查左腎結(jié)果發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組(N)腎盂分離為0.07±0.03cm,,M組腎盂分離為0.89±0.32cm,S組腎盂分離為1.72±0.35cm,三者之間兩兩比較p0.05,差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肉眼下可見(jiàn)兩組腎臟均不同程度的腫大,腎盂擴(kuò)張積水,HE染色后光鏡下觀察評(píng)分結(jié)果顯示：N組、M組與S組評(píng)分分別為N(1.8±0.4)；M(23.1±4.3)；S(37.5±3.8),三者比較結(jié)果具有差異性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；電鏡下可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞的線粒體腫脹,部分空泡樣改變,對(duì)照組未見(jiàn)明顯線粒體腫脹,M組和S組比較,線粒體腫脹比例較低。(2)藥物干預(yù)組HE評(píng)分分別為M1’(12.8±3.3)；M2'(13.1±4.4)；S1’(18.8±3.6)；S2’(21.1±1.9),分別與對(duì)照組M1(24.2±5.5);M2(36.5±4.9); S1(39.2±4.8); S2(56.2±4.1)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；藥物干預(yù)組CytC表達(dá)分別為M1'(0.44±0.02);M2'(0.45±0.01);S1'(0.71±0.01);S2'(0.73±0.01),分別與對(duì)照組M1(0.59±0.01);M2(0.78±0.02);S1(0.83±0.01);S2(0.88±0.01)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05); caspase3表達(dá)分別為M1'(0.43±0.01);M2'(0.49±0.01);S1'(0.74±0.02); S2'(0.75±0.01),分別與對(duì)照組M1(0.71±0.02);M2(0.85±0.02); S1(0.87±0.01); S2(0.98±0.01)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；藥物干預(yù)組NGAL表達(dá)分別為M1'(2.67±0.51);M2'(3.17±0.41);S1'(3.33±0.52);S2'(3.50±0.55),分別與對(duì)照組M1(4.51±0.55);M2(5.50±0.54);S1(5.67±0.81);S2(6.66±0.51)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(3)腎臟超微結(jié)構(gòu)改變結(jié)果：電鏡下可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞的線粒體腫脹,部分空泡樣改變,線粒體嵴消失；與模型組比較,相應(yīng)的藥物干預(yù)組腎臟超微結(jié)構(gòu)改變明顯減輕,線粒體腫脹比例減少；MMP檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：藥物干預(yù)組MMP分別為M1'(1.71±0.31);M2'(1.54±0.26);S1'(1.66±0.17);S2'(1.53±0.15),對(duì)照組M1(1.42±0.22);M2(0.88±0.25);S1(1.39±0.18);S2(0.81±0.18),藥物干預(yù)組與對(duì)照組比較,結(jié)果具有差異性,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),藥物干預(yù)組內(nèi)比較,M1’與M2’比較,S1’與S2’比較均無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論：(1)腰大肌包埋法可準(zhǔn)確有效的建立輕度和重度腎積水模型,約一周后開(kāi)始出現(xiàn)腎積水。(2)CsA可降低線粒體內(nèi)凋亡因子的釋放,抑制凋亡的級(jí)聯(lián)反應(yīng),抑制腎小管細(xì)胞凋亡,對(duì)不同程度積水腎在腎盂灌注時(shí)具有保護(hù)作用。(3)CsA對(duì)維護(hù)線粒體的通透性和完整性具有保護(hù)作用,能維持線粒體膜電位的穩(wěn)定性,抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生,減少腎小管的上皮細(xì)胞的損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.2

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本文編號(hào)：1599636