本文選題：胃黏膜防御-修復(fù)機(jī)制　切入點(diǎn)：胃竇黏膜　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：胃黏膜防御-修復(fù)機(jī)制包括黏液-碳酸氫鹽-磷脂屏障、胃黏膜上皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞間的緊密連接和黏膜下血流三層屏障,健全完整的GMD-RM是維持正常胃黏膜功能的必要條件。臨床工作中發(fā)現(xiàn)老年人上消化道潰瘍、糜爛等炎癥性疾病發(fā)病率高,且病情較中青年人重。因人體標(biāo)本采集較為困難,不可控因素多,無法控制實(shí)驗(yàn)中的混雜因素,而大鼠胃黏膜的增齡變化已有研究較多,因此本課題選取健康成年比格犬為研究對象,通過觀察不同年齡組正常胃竇黏膜、幽門腺體及上皮細(xì)胞組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)及與GMD-RM相關(guān)生物活性因子的增齡變化,以探討胃黏膜防御-修復(fù)功能有無隨增齡減退的現(xiàn)象,并對其機(jī)制做初步探討。方法：選取健康成年比格犬19只,按照年齡分為三組：1.5-6歲為中青年組共8只,6-9歲為低齡老年組共5只,≥9歲為高齡老年組共6只。靜脈麻醉處死前稱體重,抽血做血常規(guī)、生化全套；處死后十分鐘內(nèi)離體取胃竇黏膜組織3塊,1塊做常規(guī)病理,1塊做電鏡檢查,另1塊即刻凍存做分子生物學(xué)檢測。光鏡下觀察胃竇黏膜組織學(xué)形態(tài)、有無腸上皮化生及異型增生等,半定量分析黏膜炎癥指數(shù),同時(shí)測量固有膜厚度、測定黏液腺體實(shí)質(zhì)百分比；電鏡下觀察上皮細(xì)胞及幽門腺細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),對比細(xì)胞間連接變化,計(jì)算黏原顆粒實(shí)質(zhì)百分比；分子生物學(xué)檢測包括TBA法測定胃竇黏膜組織中MDA、MPO、LPO含量,硝酸還原酶法測定胃竇黏膜組織中NO含量,Elisa法測定胃竇黏膜組織中Survivin、 PTEN、CGRP、VEGF、緊密連接蛋白ZO-1、COX-1、COX-2、Caspase-3、Caspase-9及端粒酶的含量。結(jié)果：(1)19只比格犬體重均在14-20Kg范圍內(nèi)；血常規(guī)、生化指標(biāo)均正常。(2)光鏡下觀察各年齡組比格犬胃竇黏膜,顯示：隨增齡上皮細(xì)胞形態(tài)、黏液腺腺體形態(tài)及細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化,所有標(biāo)本中均未見腸化及異型增生部分標(biāo)本有少量炎性細(xì)胞浸潤,半定量測定各組炎癥指數(shù),結(jié)果表明無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.977)。在高齡老年組可見胃竇黏膜固有層間質(zhì)明顯增生,黏液腺腺體排列較中青年組稀疏。定量測定發(fā)現(xiàn)固有膜厚度、胃竇黏液腺實(shí)質(zhì)比例隨增齡有下降趨勢,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.015,P=0.002)。(3)電鏡下觀察各年齡組上皮細(xì)胞及胃竇幽門腺細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞間的連接,顯示：上皮細(xì)胞間的緊密連接無明顯變化,但中間連接及縫隙連接隨增齡有逐漸疏松趨勢；幽門腺細(xì)胞中分與泌黏液功能相關(guān)的細(xì)胞器一黏原顆粒,分布隨增齡逐漸稀疏。定量測定示黏原顆粒面積分?jǐn)?shù)比隨齡有明顯降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000)。(4)TBA法定量測定比格犬胃竇黏膜組織中MDA、LPO、MPO含量,發(fā)現(xiàn)隨增齡MDA、MPO含量有升高趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為0.452,0.094),兩組間比較發(fā)現(xiàn)高齡老年組胃竇黏膜組織中MPO含量均值高于中青年組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.044); LPO含量隨增齡升高,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.047)。 (5)硝酸還原酶法定量測定胃竇黏膜組織中NO含量,胃竇黏膜組織中NO含量隨增齡有降低趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.200)。(6) Elisa法定量測定胃竇黏膜組織中Survivin。PTEN、CGRP、VEGF、緊密連接蛋白ZO-1、COX-1、COX-2、 Caspase-3、 Caspase-9及端粒酶的含量。隨增齡,胃竇黏膜組織中Survivin含量明顯降低(P=0.049),PTEN、caspase-9的含量明顯升高(P值分別為0.015,0.002)；而CGRP、VEGF、ZO-1、COX-1、COX-2、caspase-3、端粒酶的含量隨增齡雖有降低趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組間比較發(fā)現(xiàn),低齡老年組胃竇黏膜組織中VEGF、COX-1、COX-2的含量明顯低于中青年組,(P值分別為0.024,0.033和0.048)；高齡老年組和中青年組比較,高齡老年組胃竇黏膜組織中caspase-3的含量均明顯低于中青年組(P=0.026)。結(jié)論：比格犬胃竇黏膜厚度、幽門腺體密度、上皮細(xì)胞間中間連接及縫隙連接緊密程度、分泌黏液的黏原顆粒百分比均隨增齡明顯降低,提示胃竇黏膜及其功能腺體在形態(tài)學(xué)上存在隨增齡老化現(xiàn)象。同時(shí)發(fā)現(xiàn)：隨增齡,胃竇黏膜組織中與脂質(zhì)過氧化及氧化應(yīng)激損傷程度相關(guān)的MDA、LPO、MPO含量有增加趨勢,與黏膜下血流調(diào)節(jié)相關(guān)的CGRP、NO含量降低,與抗細(xì)胞凋亡相關(guān)的Survivin有降低趨勢,而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的PTEN、caspase-3、caspase-9含量有升高趨勢,與胃黏膜血管再生能力相關(guān)的VEGF含量有降低趨勢,間接調(diào)節(jié)胃黏膜血流的COX-1、COX-2有降低趨勢。由此可以推測：胃竇黏膜防御-修復(fù)機(jī)制的老化是多種因素相互作用的結(jié)果。
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【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R573

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1584532