本文選題：性腸損傷　切入點：盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)　出處：《浙江中醫(yī)藥大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探討急性腸損傷大鼠體內(nèi)Ghrelin及其受體的表達以及電針足三里穴的干預(yù)作用。 方法①建立大鼠急性腸損傷(ABI)動物模型通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)導(dǎo)致的腹腔感染來誘發(fā)急性腸損傷。將32只Wistar雄性大鼠分為兩個實驗組：急性腸損傷組(CLP組)和假手術(shù)對照組(Sham組),各16只。CLP組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)的方法建立,取正中切口開腹,暴露盲腸并結(jié)扎根部,用16號針貫通穿刺盲腸4次形成腸瘺,再逐層縫合腹壁切口;假手術(shù)對照組以相同的方式暴露盲腸后回納并縫合腹壁切口,并不行盲腸結(jié)扎和穿孔。于術(shù)后12h麻醉下留取血樣本后處死,留取腸組織,測定大鼠血清TNF-α、HMGB1和腸組織含水率、腸組織髓過氧化物酶(MPO)活性和二胺氧化酶(DAO)活性,腸組織的大體及鏡下病理組織學(xué)變化來確定ABI的形成。②急性腸損傷大鼠體內(nèi)ghrelin及其受體的表達和電針足三里穴干預(yù)作用的關(guān)聯(lián)將48只Wistar大鼠隨機分為：假手術(shù)對照組(Sham組)、急性腸損傷組(CLP組)、電針治療組(CLP+EA組)及ghrelin受體阻斷劑組(CLP+GHSRA+EA組),每組各12只。假手術(shù)對照組取腹正中切口、暴露盲腸后回納、縫合腹腔切口,急性腸損傷組采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)的方法建立,電針治療組于建立大鼠ABI模型后取雙側(cè)足三里穴電針儀持續(xù)針刺30min, ghrelin受體阻斷劑組于建立大鼠ABI模型后在尾靜脈注射ghrelin受體阻斷劑[D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7.9,Leu11] substance P、再行雙側(cè)足三里穴電針儀持續(xù)針刺30min。于術(shù)后12h麻醉下留取血樣本后處死,留取腸組織。測定血清ghrelin、TNF-α、HMGB1和腸組織含水率、腸組織髓過氧化物酶(MPO)活性和二胺氧化酶(DAO)活性,并通過western blot測定腸組織ghrelin及其受體、HMGB1蛋白表達,免疫組化測定腸組織ghrelin及其受體陽性的細胞數(shù)。 結(jié)果①CLP組腸組織結(jié)構(gòu)明顯破壞,腸組織含水率和病理評分明顯高于假手術(shù)對照組(P0.05)。與Sham組相比,ABI模型組血清TNF-α、HMGB1兩者均較對照組高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。CLP組腸組織含水率和髓過氧化物酶(MPO)活性明顯高于Sham組、而腸組織二胺氧化酶(DAO)活性則低于Sham組,兩者有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。②CLP組血清ghrelin水平、腸組織ghrelin陽性細胞數(shù)和蛋白表達量均低于Sham組(P0.05),腸組織ghrelin受體蛋白表達量在CLP組明顯低于假手術(shù)對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③CLP+EA組血清TNF-α、HMGB1水平以及腸組織MPO活性均較CLP組低,而腸組織DAO活性則高于CLP組,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與CLP組相比,CLP+EA組腸組織含水率和病理評分均有下降(P0.05)。④CLP+EA組血清ghrelin水平、腸組織ghrelin陽性細胞數(shù)和蛋白表達量均高于CLP組(P0.05),與CLP組相比,CLP+EA組腸組織ghrelin受體蛋白表達量明顯升高,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。⑤CLP+GHSRA+EA組血清TNF-α、HMGB1水平以及腸組織MPO活性均較CLP+EA組高,而腸組織DAO活性則低于CLP+EA組,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與CLP+EA相比,CLP+GHSRA+EA組腸組織含水率和病理評分均升高(P0.05)。⑥血液中Ghrelin水平和血清HMGB1水平呈負相關(guān)(r=-0.664,p0.001),血液中Ghrelin水平和腸組織DAO活性呈負相關(guān)(r=-0.423,p=0.003,血液中Ghrelin水平和腸組織MPO活性呈負相關(guān)(r=-0.404,p=0.004)。 結(jié)論①盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)能誘發(fā)大鼠急性腸損傷模型。②急性腸損傷大鼠體內(nèi)Ghrelin及其受體的血清水平和腸組織蛋白表達是下降的。③電針足三里穴能抑制急性腸損傷大鼠體內(nèi)促炎因子(TNF-α、HMGB1)產(chǎn)生和改善腸粘膜屏障功能。④電針足三里穴能促進急性腸損傷大鼠體內(nèi)Ghrelin的分泌和腸組織Ghrelin受體的表達。⑤Ghrelin受體阻斷后,電針足三里穴就失去對急性腸損傷的保護作用,說明電針足三里穴對急性腸損傷的影響與大鼠體內(nèi)Ghrelin及其受體的作用有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of Ghrelin and its receptor in rats with acute intestinal injury and the intervention of Zusanli (Zusanli).
Methods to establish acute intestinal injury in rats (ABI) were caused by perforation of animal model of abdominal infection to acute intestinal injury induced by cecal ligation. By 32 Wistar male rats were divided into two groups: acute intestinal injury group (CLP group) and sham operation group (Sham group), 16 rats in each.CLP group by cecal ligation and puncture (CLP) method was established, the incision, exposure and ligation of the cecum root, with 16 needle puncture of the cecum through 4 times the formation of intestinal fistula, abdominal incision and then sutured; sham operation group in the same way after returning and exposed the cecum and abdominal wall incision suture. No cecal ligation and puncture. After 12h anesthesia, blood samples were collected, intestinal tissue, determination of serum TNF- in rats, HMGB1 water and intestine rate, intestinal myeloperoxidase (MPO) activity and two amine oxidase (DAO) activity, intestine gross and microscopic pathology group The histological changes to determine the formation of ABI. The expression and correlation of electro acupuncture intervention in ghrelin and its receptor in rat acute intestinal injury in 48 Wistar rats were randomly divided into sham operation group (group Sham), acute intestinal injury group (CLP group), treatment group (CLP+EA group) and ghrelin receptor antagonist group (CLP+GHSRA+EA group), 12 rats in each group. The sham operation control group median abdominal incision, exposed after cecal retraction, abdominal incision suture, acute intestinal injury group by cecal ligation and puncture (CLP) method was established, electroacupuncture group in a rat model of ABI after bilateral Zusanli electroacupuncture instrument for acupuncture 30min, ghrelin receptor antagonist group in a rat model of ABI blocking agent [D-Arg1, the intravenous injection of ghrelin receptor D-Phe5, D-Trp7.9 Leu11], substance P, and then underwent bilateral Zusanli electroacupuncture instrument for acupuncture 30min. on postoperative 12h Ma Drunk blood samples were collected in intestinal tissue. Determination of serum ghrelin, TNF- alpha, HMGB1 water and intestine rate, intestinal myeloperoxidase (MPO) activity and two amine oxidase (DAO) activity, and through the Western blot determination of ghrelin and its receptor in intestinal tissue, the expression of HMGB1 protein was detected by immunohistochemistry. Intestinal tissue ghrelin and its receptor positive cell number.
Results CLP group structure was damaged, water content and pathological score of intestinal tissue was significantly higher than that of the sham operation control group (P0.05). Compared with Sham group, ABI model group, serum TNF- alpha, HMGB1 both were higher than the control group, there was statistical significance (P0.05).CLP group water content and myeloperoxidase (MPO) the activity was significantly higher than Sham group, and two in intestinal tissue monoamine oxidase (DAO) activity was significantly lower than that in Sham group, which was statistically significant (P0.05). In CLP group the serum level of ghrelin, number and protein expression in intestinal tissue of ghrelin positive cells were lower than that of Sham group (P0.05), in CLP group were significantly lower than those in sham operation group ghrelin receptor protein expression in intestinal tissues had statistical significance (P0.05). Serum TNF- group CLP+EA alpha, HMGB1 level and MPO activity in intestinal tissue were lower than group CLP, but the activity of DAO in intestinal tissue was higher than that of CLP group, there was statistically significant (P0.05), compared with the CLP group, CLP+EA group Intestinal tissue water content and pathological score decreased in CLP+EA group (P0.05). The serum level of ghrelin, number and protein expression in intestinal tissue of ghrelin positive cells were higher than CLP group (P0.05), compared with the CLP group, increased ghrelin receptor protein expression in intestinal tissue of CLP+EA group had statistical significance (P0.05). The serum TNF- of group CLP+GHSRA+EA alpha, HMGB1 level and MPO activity in intestinal tissue were higher than CLP+EA group, but the activity of DAO in intestinal tissue was lower than that of group CLP+EA, were statistically significant (P0.05), compared with CLP+EA, water content and pathological score of CLP+GHSRA+EA group were significantly increased (P0.05). The level of Ghrelin and HMGB1 in serum the blood in the negative correlation (r=-0.664, p0.001), the Ghrelin level in the blood and intestinal tissue DAO activity was negatively correlated (r=-0.423, p=0.003, MPO activity and Ghrelin level in the blood and intestinal tissue were negatively correlated (r=-0.404, p=0.004).
Conclusion the cecal ligation and puncture can induce acute intestinal injury model of rats. Serum and intestinal tissue protein acute intestinal injury in rats Ghrelin and its receptor expression is decreased. The electroacupuncture can inhibit the acute intestinal injury in rats in vivo proinflammatory cytokines (TNF- alpha, HMGB1) and improve the intestinal mucosal barrier the function of electro acupuncture can promote the expression of acute intestinal injury in rats Ghrelin secretion and intestinal tissue. The Ghrelin receptor blocking Ghrelin receptor after electroacupuncture lose protective effect on acute intestinal injury, the effect of electro acupuncture in three foot acupoints on acute intestinal injury in rats with Ghrelin and its receptor role.

【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R245

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本文編號：1570038