本文關(guān)鍵詞： 哮喘 間歇低氧 瘦素 瘦素受體 氣道炎癥 氣道重塑　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:觀察間歇低氧條件下哮喘大鼠瘦素及其受體的表達(dá)情況。通過(guò)建立間歇低氧合并哮喘大鼠模型,監(jiān)測(cè)間歇低氧干預(yù)后哮喘大鼠血清瘦素濃度、瘦素及其受體m RNA表達(dá)情況與肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)、氣管壁及氣道平滑肌厚度的變化。探討間歇低氧對(duì)于瘦素及其受體的影響,分析瘦素及其受體在哮喘氣道炎癥和重塑中的作用。方法:將40只清潔級(jí)SD大鼠(雌性,6周齡,體重120g-150g之間)隨機(jī)分為正常對(duì)照組、間歇低氧組、哮喘組、間歇低氧哮喘組,各10只。哮喘組大鼠于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第1、8天通過(guò)腹腔注射給予卵清蛋白(OVA)100mg和氫氧化鋁100mg(溶于2m L 0.9%氯化鈉中)以致敏,于第15天起將大鼠置于自制非完全封閉霧化箱內(nèi),給予大鼠OVA溶液5ml霧化吸入,每次30分鐘,隔日一次,每激發(fā)4次,調(diào)整一次藥物濃度(依次為1%、1.5%、2%、2.5%、3%),共20次。間歇低氧組大鼠自實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第1天起,將大鼠放置于低氧艙內(nèi),循環(huán)充入45分鐘純氮?dú)?使低氧艙中氧氣濃度由21%降至5%,再充入壓縮空氣75分鐘,使低氧艙中氧濃度復(fù)升至21%,此為一個(gè)周期,低氧頻率為4周期/天(上午九點(diǎn)到下午五點(diǎn)),7天/周,共四周,其余時(shí)間常規(guī)飼養(yǎng)。間歇低氧哮喘組大鼠在激發(fā)日每次激發(fā)后將大鼠置于低氧艙內(nèi),低氧操作方式同間歇低氧組,在非激發(fā)日僅給予間歇低氧操作,其余時(shí)間常規(guī)飼養(yǎng),共四周。正常對(duì)照組的致敏和激發(fā)均使用等量生理鹽水替代,剩余時(shí)間常規(guī)飼養(yǎng)。最后一次激發(fā)24小時(shí)后,用1%戊巴比妥麻醉大鼠后處死,進(jìn)行取材。收集各組大鼠血清、肺組織、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。測(cè)定BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi);部分肺組織行病理切片,行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,觀察形態(tài)學(xué)變化,并應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件測(cè)定支氣管管壁厚度(總管壁面積/支氣管基底膜周徑)、支氣管平滑肌厚度(總管壁平滑肌面積/支氣管壁內(nèi)周長(zhǎng))及血管密度;應(yīng)用放射免疫法測(cè)定血清瘦素濃度;應(yīng)用RT-PCR法測(cè)定肺組織中瘦素及其受體m RNA的表達(dá)。1動(dòng)物模型的建立通過(guò)腹腔注射卵清蛋白致敏及反復(fù)霧化吸入激發(fā)的方式成功建立大鼠哮喘模型,于激發(fā)過(guò)程中可見(jiàn)大鼠出現(xiàn)呼吸急促、節(jié)律不規(guī)整、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍等表現(xiàn)。通過(guò)將大鼠放置于低氧艙內(nèi),循環(huán)低氧-復(fù)氧過(guò)程,成功給予間歇低氧干預(yù),于間歇低氧干預(yù)過(guò)程中可見(jiàn)大鼠出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍等癥狀。2 BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)的比較(×10~6/L):細(xì)胞總數(shù):四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2375.37,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(35.16±1.08)、哮喘組(15.34±0.83)、間歇低氧組(10.26±0.55)、正常對(duì)照組(9.48±0.55)。中性粒細(xì)胞:四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=424.57,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(0.98±0.07)、哮喘組(0.51±0.05)、間歇低氧組(0.36±0.03)、正常對(duì)照組(0.25±0.04)。淋巴細(xì)胞數(shù):四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1896.37,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(2.91±0.36)、哮喘組(2.22±0.39)、間歇低氧組(1.65±0.74)、正常對(duì)照組(1.25±0.51)。嗜酸性粒細(xì)胞數(shù):四組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5234.02,P0.01),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。由高至低依次為間歇低氧哮喘組(3.52±0.07)、哮喘組(1.75±0.04)、間歇低氧組(0.96±0.06)、正常對(duì)照組(0.57±0.05)。3病理圖像分析結(jié)果肺組織病理切片HE染色結(jié)果示:正常對(duì)照組:肺組織結(jié)構(gòu)規(guī)整,肺泡腔內(nèi)少許炎性細(xì)胞,支氣管粘膜上皮連續(xù)完整,管腔較規(guī)則,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少。哮喘組:肺組織結(jié)構(gòu)紊亂,可見(jiàn)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮細(xì)胞脫落、氣道平滑肌增厚及血管增生。間歇低氧組:支氣管肺泡結(jié)構(gòu)紊亂,可見(jiàn)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡上皮細(xì)胞、氣道平滑肌及血管增生。間歇低氧哮喘組:上述病理改變明顯加重。病理圖像分析結(jié)果示:間歇低氧哮喘組大鼠的氣道壁厚度、平滑肌厚結(jié)果:度(μm2/μm)及血管密度(A/mm2)(139.47±3.34、60.19±4.34、82.80±3.11)均高于哮喘組(98.49±5.36、42.75±3.83、59.35±2.80)、間歇低氧組(80.72±6.27、28.04±2.95、41.40±2.62),且哮喘組高于低氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);三組均高于對(duì)照組(67.06±4.58、15.08±2.50、19.18±1.55),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=394.298,P0.01;F=311.23,P0.01;F=1089.44,P0.01)。4放射免疫法測(cè)定血清瘦素濃度(ng/ml)間歇低氧哮喘組大鼠的瘦素濃度(2.74±0.24)高于哮喘組(2.06±0.15)、間歇低氧組(1.72±0.16),且哮喘組高于低氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);三組均高于正常對(duì)照組(0.93±0.17),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=172.33,P0.01)。5 RT-PCR法測(cè)定肺組織瘦素及其受體m RNA的表達(dá)間歇低氧哮喘組大鼠瘦素m RNA表達(dá)(0.90±0.07)高于哮喘組(0.73±0.01)、間歇低氧組(0.46±0.02),且哮喘組高于低氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);三組均高于正常對(duì)照組(0.36±0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=479.901,P0.01)。哮喘組大鼠瘦素受體m RNA(0.61±0.04)表達(dá)低于間歇低氧哮喘組(0.83±0.04)、間歇低氧組(0.88±0.02),且間歇低氧哮喘組低于低氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);三組均低于正常對(duì)照組(0.93±0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=188.629,P0.01)。6相關(guān)性分析結(jié)果血清瘦素濃度與BALF中中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞總數(shù)呈顯著正相關(guān)(r=0.886,P0.01;r=0.834,P0.01)(Fig.11,Fig.12);血清瘦素濃度與氣道平滑肌厚度、氣道壁厚度呈顯著正相關(guān)(r=0.943,P0.01;r=0.916,P0.01)(Fig.13,Fig.14)。肺組織瘦素m RNA表達(dá)與血清瘦素濃度呈顯著正相關(guān)(r=0.893,P0.01)(Fig.15)。結(jié)論:1通過(guò)抗原致敏和反復(fù)霧化激發(fā)、循環(huán)低氧干預(yù)成功建立大鼠間歇低氧合并哮喘模型,病理結(jié)果顯示較哮喘組存在更加明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及氣道壁、氣道平滑肌增厚,說(shuō)明合并間歇低氧存在時(shí)可能會(huì)加重哮喘。2血清瘦素濃度與炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)、氣道壁及平滑肌厚度均呈顯著正相關(guān),說(shuō)明瘦素可在氣道炎癥及重塑兩方面同時(shí)加重哮喘。合并間歇低氧存在時(shí),哮喘組大鼠瘦素在蛋白和基因水平的表達(dá)明顯升高,提示間歇低氧可通過(guò)影響瘦素濃度而加重哮喘。3哮喘時(shí)瘦素受體m RNA水平是降低的,同時(shí)存在間歇低氧時(shí)會(huì)升高,提示哮喘時(shí)可能存在瘦素抵抗,合并間歇低氧存在時(shí)會(huì)減輕此情況,從而使瘦素能夠與更多的瘦素受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)活性,加重哮喘。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1554996