本文關(guān)鍵詞： 杯狀細(xì)胞 菌群 糖尿病結(jié)膜病變 血管 炎性因子　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分糖尿病大鼠結(jié)膜囊菌群變化近年來糖尿病引起的眼表病變?cè)趶V泛受到人們關(guān)注。結(jié)膜作為一個(gè)暴露器官,與皮膚直接相連,細(xì)菌從出生不久就存在其中。結(jié)膜囊的正常菌群泛指共生于結(jié)膜囊,且可保持動(dòng)態(tài)平衡的多種需氧和厭氧菌群。這些菌群總是隨著個(gè)人、環(huán)境因素的變化而變化,一旦這種平衡被破壞,正常細(xì)菌就可導(dǎo)致眼部感染。[目的]1. 觀察DM大鼠結(jié)膜囊菌群變化2. 觀察DM大鼠微環(huán)境改變及易感性變化[研究方法]SPF級(jí)六周齡SD大鼠13只,雄性,體重240g-300g,飼養(yǎng)于中日友醫(yī)院臨床研究所SPF級(jí)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)前經(jīng)裂隙燈顯微鏡及眼底檢查,排除大鼠雙眼異常情況。隨機(jī)分為模型組7只,正常對(duì)照組6只。模型組經(jīng)腹腔一次性注射1％STZ:60mg/kg,誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病模型,72小時(shí)后尾尖靜脈連續(xù)3天血糖≥16.7mmol/L者即為糖尿病大鼠模型。實(shí)驗(yàn)周期6個(gè)月,取結(jié)膜囊細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)、分離、鑒定。RT-PCR法檢測(cè)結(jié)膜炎性因子表達(dá)水平。采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理,以P≤0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[研究結(jié)果]對(duì)糖尿病大鼠結(jié)膜囊菌群進(jìn)行分離培養(yǎng),從細(xì)菌種類來看,正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,結(jié)膜囊的菌群均以革蘭氏染色陽性細(xì)菌為主,共有的為屎腸球菌和大腸桿菌,其他細(xì)菌均不同。分離到的共有的菌實(shí)驗(yàn)組比正常對(duì)照組多。正常對(duì)照組的腸球菌的種類和數(shù)量比實(shí)驗(yàn)組明顯減少,在實(shí)驗(yàn)組中出現(xiàn)了多種腸球菌,還出現(xiàn)了克氏考克菌和普通變形桿菌。從細(xì)菌數(shù)量來看,大鼠患糖尿病后,細(xì)菌增多。[結(jié)論]DM大鼠結(jié)膜囊菌群數(shù)量增多,種類改變,提示大鼠結(jié)膜囊微環(huán)境發(fā)生變化且導(dǎo)致其易感性增加。第二部分 益氣活血通絡(luò)方干預(yù)對(duì)糖尿病大鼠結(jié)膜血管與組織的影響眼表(0cular surface)其解剖學(xué)上指起始于上瞼或下瞼緣間的整個(gè)眼球表面所有粘膜上皮,它包括了角膜上皮與結(jié)膜上皮,結(jié)膜上皮涵蓋了：球結(jié)膜、瞼結(jié)膜和穹窿部結(jié)膜。眼表上皮來源于各個(gè)的干細(xì)胞,結(jié)膜上皮由復(fù)層扁平細(xì)胞為主,夾有許多分泌黏蛋白的杯狀細(xì)胞。眼表疾病泛指對(duì)角膜、結(jié)膜等眼表正常結(jié)構(gòu)與功能造成損害的疾病。糖尿病是一種內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病,它以高血糖為特征,由代謝紊亂造成涉及全身各個(gè)組織的多種并發(fā)癥。糖尿病可引起視網(wǎng)膜病變、白內(nèi)障、屈光不正、角膜病變等多種眼部改變。[目的]探討糖尿病對(duì)結(jié)膜囊菌群的影響[研究方法]SPF級(jí)六周齡SD大鼠25只,雄性,體重240g-300g,飼養(yǎng)于中日友醫(yī)院臨床研究所SPF級(jí)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)前經(jīng)裂隙燈顯微鏡及眼底檢查,排除大鼠雙眼異常情況。除正常對(duì)照組6只外,其余經(jīng)腹腔一次性注射1%STZ:60mg/kg,誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性大鼠糖尿病模型。72小時(shí)后尾尖靜脈連續(xù)3天血糖≥16.7mmol/L者即為糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組7只,治療組6只,陽性對(duì)照組6只。治療組和對(duì)照組大鼠在造模成功后次日開始給藥,每日上午10時(shí)給藥一次,給藥途徑為灌胃。治療組(炙黃芪、紅參、桂枝、三七粉、丹參、地龍、茯苓等藥水煎,濃度為1g/ml)給藥量為10g/(kg·d)；陽性對(duì)照組(羥苯磺酸鈣膠囊)大鼠給藥量為250mg/(kg-d)。每2周定期檢測(cè)大鼠血糖、體重變化,實(shí)驗(yàn)周期為9個(gè)月。取材前,行激光多普勒血流檢查球結(jié)膜上部血管流速。用10%水合氯醛腹腔注射,過量麻醉處死大鼠,制備球結(jié)膜及穹窿部組織切片,通過光鏡、電鏡檢查觀察并拍照。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)MMP9、AGES. IL-6、IL-12p40、TNFa在結(jié)膜組織的表達(dá)變化。使用圖像分析軟件,對(duì)免疫組化的顯色強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)量并進(jìn)行定量分析。采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理,以P≤0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[研究結(jié)果](1)模型建立后,模型組大鼠各時(shí)期體重比正常對(duì)照組明顯減輕(P0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(2)基于連續(xù)監(jiān)測(cè)血糖結(jié)果：模型組大鼠血糖均高于正常對(duì)照組,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(3)形態(tài)學(xué)觀察：正常對(duì)照組大鼠結(jié)膜各層組織層次清楚,上皮細(xì)胞形態(tài)完整,排列整齊,杯狀細(xì)胞在上皮細(xì)胞基底層豐富分布。模型組：上皮細(xì)胞排列紊亂,炎細(xì)胞明顯增多,結(jié)膜杯狀細(xì)胞減少明顯,主要分布在上皮基底層。陽性對(duì)照組：上皮細(xì)胞排列紊亂,炎細(xì)胞增多,結(jié)膜杯狀細(xì)胞明顯減少,分布在上皮基底層。治療組：上皮細(xì)胞排列較整齊,結(jié)膜杯狀細(xì)胞較豐富且分布于上皮基底層。(4)激光多普勒血流圖：模型組較正常對(duì)照組血流速度減慢(P=0.004,P0.05),治療組與正常對(duì)照組無明顯差異(P=0929,P0.05),模型組較治療組血流減慢(P=0.019,P0.05). (5)MMP9在DM大鼠結(jié)膜的表達(dá)：模型組MMP9表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組、治療組、陽性對(duì)照組。AGES在大鼠結(jié)膜表達(dá)：模型組AGES表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組、治療組、陽性對(duì)照組。(6)電鏡：模型組結(jié)膜血管周細(xì)胞消失,血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。[結(jié)論]在糖尿病大鼠模型成功的基礎(chǔ)上,觀察到糖尿病大鼠結(jié)膜血管單位面積血流速度增加,且血管及組織出現(xiàn)病理性改變,結(jié)膜血管表現(xiàn)在內(nèi)皮細(xì)胞破壞,周細(xì)胞消失,結(jié)膜組織杯狀細(xì)胞減少,同時(shí)對(duì)結(jié)膜組織MMP9、AGES進(jìn)行免疫組化觀察到表達(dá)明顯升高。益氣活血通絡(luò)方能明顯改善糖尿病大鼠結(jié)膜單位面積血流速度,可使內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,周細(xì)胞破壞減小,益氣活血通絡(luò)方用于糖尿病大鼠可以延緩糖尿病結(jié)膜病變發(fā)生和發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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