本文關(guān)鍵詞： 轉(zhuǎn)化生長因子-β Th類細(xì)胞因子 趨化因子 泡球蚴 肝纖維化 肝損傷　出處：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探討TGF-p與Th類細(xì)胞因子的“對話”在泡球蚴感染所致宿主病理損傷中的作用。方法：1)肉眼直視下肝臟穿刺建立泡球蚴感染小鼠模型：8-10周齡雌性BALB/c小鼠,隨機分為實驗組和對照組。乙醚麻醉,實驗組開腹直視下肝左葉注射0.1mL泡球蚴混懸液,絲線縫合關(guān)閉腹腔。對照組相同部位注射等量生理鹽水。感染2、8、30、60、90、180、270、360天處死小鼠,兩組均在肝左葉相同部位采集標(biāo)本；2)采用36k小鼠全基因組寡核苷酸芯片分析BALB/c小鼠肝泡球蚴感染動物模型,肝臟基因mRNA轉(zhuǎn)錄本含量的改變；確定目標(biāo)基因并聯(lián)機檢索GeneBank等整合數(shù)據(jù)庫,按其生物功能進行分類。應(yīng)用Gene Cluster3.0生物信息可視化分析軟件進行等級聚類分析。篩選肝臟免疫相關(guān)基因；3)泡球蚴病人和泡球蚴感染小鼠肝臟組織,福爾馬林固定、石蠟包埋,4μm連續(xù)切片。HE染色觀察病理變化,免疫組化方法、Western Blot和實時熒光定量RT-PCR檢測TGF-β1、Smads、MAPK、肝細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)蛋白及mRNA的表達(dá)與分布,原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測病灶肝細(xì)胞凋亡；4)原位肝臟灌注法分離大鼠肝細(xì)胞,與泡球蚴囊液共培養(yǎng),15min、30min、1h、2h、24h收集細(xì)胞,Western Blot檢測TGF-β1、Smads、MAPK相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1)隨著泡球蚴感染時間的延長,肝損傷逐漸增加,肝纖維化程度增加,TGF-β1在泡球蚴感染所致的肝纖維化中具有促進作用；2)泡球蚴感染早期以Thl免疫反應(yīng)為主,感染中期呈現(xiàn)出混合的Th1/Th2免疫反應(yīng),感染晚期免疫反應(yīng)降低,化學(xué)趨化因子在泡球蚴感染過程中發(fā)揮著重要的作用,病灶旁肝組織促進了細(xì)胞因子和化學(xué)趨化因子的產(chǎn)生和活性；3)在泡球蚴感染早期,IL-17A和IL-17F在病灶炎性帶組織和病灶旁肝組織中均高表達(dá),感染晚期IL-17A表達(dá)低于對照組,而IL-17F的表達(dá)雖有所降低,但仍高于對照組；4)泡球蚴感染激活宿主肝細(xì)胞TGF-p/Smad信號通路,造成了肝纖維化；5)在泡球蚴感染的早期,以ERK1/2信號通路被激活,促進肝細(xì)胞的增殖；在感染的中期,以Gadd45β高表達(dá),調(diào)控肝細(xì)胞的抗凋亡；在感染的晚期,以細(xì)胞凋亡蛋白p53、p21高表達(dá),肝細(xì)胞發(fā)生生長抑制或凋亡。結(jié)論：1)泡球蚴感染TGF-P高表達(dá),引起機體免疫抑制狀態(tài)的形成,造成泡球蚴的“免疫逃避”,同時導(dǎo)致宿主肝臟發(fā)生病理性損傷；2)泡球蚴感染早期以Thl免疫反應(yīng)為主,感染中晚期呈現(xiàn)出混合的Th1/Th2免疫反應(yīng),化學(xué)趨化因子在泡球蚴感染過程中也發(fā)揮著重要的作用,病灶旁肝組織促進了細(xì)胞因子和化學(xué)趨化因子的產(chǎn)生和活性；3)首次證明細(xì)胞因子和化學(xué)趨化因子,尤其是IL-17,在泡球蚴感染病灶旁炎性帶和病灶旁肝組織發(fā)揮著重要的作用,結(jié)果提示TGF-β對IL-17不同的亞型表達(dá)及Treg具有調(diào)控作用,調(diào)節(jié)T細(xì)胞向特定方向分化,并誘導(dǎo)免疫細(xì)胞發(fā)生凋亡,從而介導(dǎo)泡球蚴的免疫逃避,同時造成宿主組織損傷；4)我們的研究結(jié)果的提示,在泡球蚴感染宿主肝臟過程中,泡球蚴感染引起宿主炎癥反應(yīng)或泡球蚴自身,分泌TGF-β及炎癥／抗炎癥細(xì)胞因子,激活下游Smad信號通路,從而導(dǎo)致宿主肝臟發(fā)生纖維化；5)在泡球蚴感染宿主肝臟的過程中,泡球蚴通過直接刺激(囊液中的有害成分、原頭蚴本身分泌的某些成分)或間接(引起宿主免疫系統(tǒng)分泌的TGF-β及相關(guān)細(xì)胞因子)刺激,產(chǎn)生細(xì)胞毒性,造成宿主細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),激活宿主肝細(xì)胞MAPK信號通路(ERK和JNK信號通路)和細(xì)胞周期相關(guān)調(diào)控因子,影響宿主肝細(xì)胞周期、引起宿主肝細(xì)胞增殖、生長抑制、凋亡和肝細(xì)胞功能改變等,最終導(dǎo)致宿主“肝腫大(感染早、中期)”或肝臟萎縮、變性甚至壞死(感染晚期)；6)在泡球蚴感染的早期,以ERK1/2-Cyclin D1為主線的信號通路調(diào)控肝細(xì)胞的增殖；在感染的中期,以ERK1/2-Gadd45β (Cyclin A)-PCNA為主線的信號通路調(diào)控肝細(xì)胞的抗凋亡；在感染的晚期,以p53-p21-Cyclins和p53-Gadd45y-JNK為主線的信號通路調(diào)控肝細(xì)胞的生長抑制或凋亡,從而造成宿主病理性肝損傷。
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【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392.1;R532.32

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1534436