本文關(guān)鍵詞： 小鼠原位肝移植 缺血再灌注損傷 缺血預(yù)處理 遠(yuǎn)端缺血期處理　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分小鼠原位肝移植模型的建立和評(píng)價(jià)目的:建立成熟穩(wěn)定的非動(dòng)脈化的小鼠原位肝移植模型,并對(duì)肝移植模型進(jìn)行評(píng)價(jià),為后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ),亦為欲建立小鼠原位肝移植模型的研究者提供經(jīng)驗(yàn)支持和技術(shù)參考,以快速、平穩(wěn)、安全地渡過(guò)學(xué)習(xí)瓶頸期。方法:單人操作,采用雙袖套法和支架法行非動(dòng)脈化的小鼠同種異體原位肝移植術(shù),詳細(xì)記錄供受體手術(shù)時(shí)間、無(wú)肝期、肝上下腔靜脈吻合時(shí)間、存活時(shí)間等指標(biāo),并探查死亡原因。手術(shù)方法定型后選用80對(duì)B6小鼠進(jìn)行模型評(píng)價(jià),前6組(每組10例)分別于術(shù)后第1天、3天、5天、7天、1個(gè)月、2個(gè)月行組織病理學(xué)檢查和肝功檢測(cè),第7組(共20例)進(jìn)行遠(yuǎn)期存活率監(jiān)測(cè)。結(jié)果:建立模型過(guò)程中共行小鼠原位肝移植手術(shù)1074例,其中前541例主要用于鍛煉操作技能和積累圍手術(shù)期管理經(jīng)驗(yàn),之后453例主要為熟練定型階段。學(xué)習(xí)曲線(xiàn)表現(xiàn)為隨著練習(xí)次數(shù)的增加,供受體手術(shù)時(shí)間、無(wú)肝期、肝上下腔靜脈吻合時(shí)間均呈遞減趨勢(shì),手術(shù)成功率和存活時(shí)間亦相應(yīng)得到改善,但整體變化非常平緩。建模初期小鼠死亡原因多為無(wú)肝期過(guò)長(zhǎng)、供體灌注不良、肝上下腔靜脈和肝下下腔靜脈吻合口出血,后期死亡原因主要為膽道并發(fā)癥。模型評(píng)價(jià)階段,無(wú)肝期為17.4±2.3min,SHVC吻合時(shí)間為11.0±1.3min,手術(shù)成功率為96.3%(77/80),術(shù)后第1天、第3天、第5天、第7天、1個(gè)月、2個(gè)月和3個(gè)月的存活率分別為95%(19/20),95%(19/20),90%(18/20),85%(17/20),75%(15/20),60%(12/20)和35%(7/20)。ALT和AST在術(shù)后第三天達(dá)到峰值,肝臟病理學(xué)改變最為明顯。結(jié)論:在大量的練習(xí)和不斷的摸索、嘗試后成功建立了小鼠原位肝移植模型,熟練的顯微外科操作技術(shù)是首要條件,手術(shù)的難度在于操作的復(fù)雜性和手術(shù)步驟的嚴(yán)格時(shí)限,手術(shù)的關(guān)鍵在于麻醉、供肝的灌注和保存、套管技術(shù)和無(wú)肝期的精準(zhǔn)把控。術(shù)后肝臟組織病理學(xué)和肝功變化規(guī)律為下一步研究缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血期處理對(duì)小鼠原位肝移植后缺血再灌注損傷的保護(hù)作用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第二部分缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血期處理對(duì)小鼠肝移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制目的:觀察遠(yuǎn)端缺血期處理對(duì)小鼠肝移植缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用,比較缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血期處理對(duì)小鼠肝移植缺血再灌注損傷保護(hù)作用的強(qiáng)度,并探究二者聯(lián)合應(yīng)用是否能產(chǎn)生疊加的保護(hù)作用及可能存在的作用機(jī)制。方法:160只健康成年雄性B6小鼠隨機(jī)分成4組:假處理組(sham組,n=40):僅行小鼠原位肝移植術(shù),無(wú)任何特殊處理;2缺血預(yù)處理組(IPC組,n=40):供體開(kāi)腹后游離肝臟,用顯微血管夾夾閉小鼠肝動(dòng)脈和門(mén)靜脈10分鐘,開(kāi)放15分鐘后,進(jìn)行供肝的獲取;3遠(yuǎn)端缺血期處理組(RIPer組,n=40):受體麻醉后,在肝臟再灌注前用顯微血管夾對(duì)小鼠兩側(cè)股血管束反復(fù)進(jìn)行5分鐘夾閉、5分鐘開(kāi)放,共3個(gè)循環(huán);4聯(lián)合應(yīng)用缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血期處理組(IPC+RIPer組,n=40):供體行缺血預(yù)處理,受體行遠(yuǎn)端缺血期處理。各組小鼠分別于再灌注后2小時(shí)、24小時(shí)和72小時(shí)切取肝臟行組織病理學(xué)檢查、TUNEL染色、F4/80免疫組化染色、MDA水平檢測(cè)、GSH-Px水平檢測(cè)、ICAM-1 m RNA、Bcl-2 m RNA及Bax m RNA水平檢測(cè)、NF-κB p65蛋白表達(dá)水平檢測(cè),并從下腔靜脈取血檢測(cè)血清ALT、AST、TNF-α、NOx水平,流式分析外周血白細(xì)胞表面抗原CD11b、CD16/32和F4/80的表達(dá)情況。結(jié)果:雖然各組間小鼠術(shù)后存活率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但是與sham組相比,三個(gè)處理組小鼠術(shù)后的ALT、AST、MDA、TNF-α、ICAM-1 m RNA、NF-κB p65蛋白水平、Suzuki評(píng)分、凋亡指數(shù)、肝臟組織中F4/80陽(yáng)性細(xì)胞比例、CD11b+和F4/80+細(xì)胞在白細(xì)胞中的比例、CD11b+CD16/32+細(xì)胞和CD11b+CD16/32high細(xì)胞在CD11b+細(xì)胞中的比例上升幅度均較小,而GSH-Px、NOx以及Bcl-2 m RNA/Bax m RNA比值則有所提升(P0.05)。在移植術(shù)后早期(2h),IPC組和RIPer組在ALT、TNF-α、GSH-Px、NOx和肝臟組織F4/80陽(yáng)性細(xì)胞比例等方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。除Suzuki評(píng)分、Bcl-2 m RNA/Bax m RNA比值、F4/80+細(xì)胞在白細(xì)胞中的比例外,其他指標(biāo)均在不同的時(shí)間點(diǎn)顯示IPC組和RIPer組均與IPC+RIPer組有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用的遠(yuǎn)端缺血期處理策略可以對(duì)小鼠原位肝移植缺血再灌注損傷發(fā)揮有效的保護(hù)作用。在移植術(shù)后早期(2h),遠(yuǎn)端缺血期處理對(duì)小鼠原位肝移植IRI的保護(hù)作用弱于IPC,然而后期兩者的保護(hù)效力無(wú)明顯區(qū)別。提示遠(yuǎn)端缺血期處理同缺血預(yù)處理一樣,亦有兩個(gè)保護(hù)時(shí)間窗,而在第一保護(hù)時(shí)間窗內(nèi)抑制庫(kù)弗細(xì)胞活化、調(diào)整微循環(huán)障礙及抗氧化作用較弱導(dǎo)致其保護(hù)效力較弱。聯(lián)合應(yīng)用缺血預(yù)處理和遠(yuǎn)端缺血期處理可以在抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、調(diào)整微循環(huán)障礙、抑制固有免疫反應(yīng)方面產(chǎn)生疊加作用,從而進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)小鼠原位肝移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R657.3

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本文編號(hào)：1526553