本文關(guān)鍵詞： 普羅布考 肥胖 系統(tǒng)性炎癥?氧化應(yīng)激 胰島素抵抗 小膠質(zhì)細(xì)胞激活 普羅布考 腦缺血再灌注損傷 一氧化氮 炎癥因子 小膠質(zhì)細(xì)胞 普羅布考 腦缺血再灌注損傷 細(xì)胞凋亡 B淋巴細(xì)胞瘤-2蛋白 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 磷脂酰肌　出處：《中南大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分普羅布考對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠系統(tǒng)性炎癥及腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響 目的：觀察普羅布考對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠脂代謝、體內(nèi)氧化應(yīng)激、系統(tǒng)性炎癥及腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響,探討其對(duì)神經(jīng)保護(hù)的潛在價(jià)值。 方法:將40只SD大鼠隨機(jī)分為兩組：NG16只：給予普通飼料喂養(yǎng),8周末隨機(jī)抽取8只大鼠(NG8W)處死進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究,剩余8只(NG16W)繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)。高脂飲食組(HG)24只,高脂飼料喂養(yǎng)8周后隨機(jī)抽取8只大鼠(HG8W)處死進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。第9周開(kāi)始把高脂飲食組剩下的大鼠隨機(jī)分為兩亞組：高脂飲食組(HG16W)8只及普羅布考干預(yù)組(PB16W)8只,兩組均繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng),PB組每天6pm給予5%普羅布考混懸液100mg/d.kg灌胃1次共8周,NG16W及HG16W組均給予不含普羅布考的0.5%羧甲基纖維素鈉灌胃。各組大鼠處死前禁食12h并稱重和測(cè)量體長(zhǎng),麻醉處死后采集血漿、肝臟、脂肪、腦等組織標(biāo)本,計(jì)算大鼠Lee's指數(shù)、體脂指數(shù)和肝指數(shù),測(cè)定血漿TC,TG, LDL, ox-LDL, HDL, FBS, FINS, ALT, AST, hs-CRP, TNF-α, IL-1β, IL-6, SOD, MDA, T-AOC水平,計(jì)算HOMA-IR(FIRI)值,HE染色觀察腹部脂肪和肝臟組織病理學(xué)變化,免疫組織化學(xué)測(cè)定腦組織中Iba-1表達(dá)情況。 結(jié)果：各組大鼠體重均隨著周齡增大而逐漸增加,12周后HG組體重明顯高于NG組(p0.05),在8、16周末HG組lee's指數(shù)、肝指數(shù)、體脂指數(shù)明顯高于NG組(p0.05),普羅布考干預(yù)后,PB16W組體重增長(zhǎng)減緩,lee's指數(shù)、肝指數(shù)、體脂指數(shù)較HG16W組下降明顯(p0.05)。 在第8、16周末NG、HG兩組空腹血糖無(wú)顯著性差異,而HG組Fins及FIRI明顯高于NG組(p0.05)。普羅布考干預(yù)后,PB16W組FIns及FIR/較HG16W組明顯改善(p0.05),但略高于NG16W組(p0.05)。 在16周末HG16W組大鼠肝臟ALT、AST水平明顯高于NG16W組(p0.05),出現(xiàn)重度肝脂肪變性,脂肪細(xì)胞直徑也明顯增大,存在炎性細(xì)胞浸潤(rùn),普羅布考干預(yù)后,PB16W組與HG18W比較ALT、AST及肝脂肪變性程度明顯下降(p0.05),脂肪細(xì)胞直徑減小,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。NG16W組ALT、AST正常,無(wú)肝脂肪變性。 在第8、16周末HG組TG、TC、LDL-C、Ox-LDL明顯高于同期NG組(p0.05),HDL-C水平無(wú)明顯差異(p0.05)。普羅布考干預(yù)后,PB16W組TG、TC、LDL-C、Ox-LDL較HG16W組明顯下降(p0.05),但仍明顯高于NG16W組(p0.05),HDL-C水平也明顯降低(p0.05)。 在16周末HG16W組hs-CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA水平明顯高于NG16W組(p0.05),SOD活力及T-AOC水平明顯低于NG16W組(p0.05)；普羅布考干預(yù)后,PB16W組血漿hs-CRP、TNF-α、 IL-1β、IL-6較HG16W組明顯降低(p0.05),血漿MDA顯著減少(p0.05),SOD、T-AOC較HG16W組明顯恢復(fù)(p0.05), 在16周末HG16W組大鼠腦內(nèi)Iba-1表達(dá)(OD值)明顯增加,普羅布考干預(yù)后PB16W組Iba-1表達(dá)與HG16W組比較明顯減輕。 結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠模型表現(xiàn)出血脂異常、胰島素抵抗、非酒精性脂肪肝等代謝綜合征表現(xiàn),還存在全身抗氧化能力下降、慢性低度系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)和腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活。普羅布考干預(yù)可改善高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠全身胰島素抵抗,抗氧化儲(chǔ)備,減輕系統(tǒng)性炎癥狀態(tài)和腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活。 第二部分普羅布考預(yù)處理對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 目的：觀察普羅布考對(duì)缺血再灌注損傷腦組織抗氧化能力、炎癥及小膠質(zhì)細(xì)胞激活的影響,探討普羅布考預(yù)處理對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：將160只大鼠隨機(jī)分為五組,每組32只：假手術(shù)組(Sham)、正常對(duì)照組(NG)、正常干預(yù)組(NG+PB)、高脂對(duì)照組(HG)、高脂干預(yù)組(HG＋PB)。NG+PB組：普通飼料喂養(yǎng)8周后,每天給予5%普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周；Sham及NG組：給予普通飼料喂養(yǎng)8周后,每天給予等容積不含普羅布考的0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)灌胃1次共8周；HG+PB組：高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天加予5%普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周；HG組：高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天給等量不含普羅布考的0.5%CMC灌胃共8周。Sham組行假手術(shù),其余四組于實(shí)驗(yàn)第16周末線栓法制作左側(cè)大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注損傷模型,缺血2小時(shí)再灌注24小時(shí)后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分,處死動(dòng)物采集腦標(biāo)本,TTC染色測(cè)定腦梗死體積(11=8),干濕重法測(cè)定腦組織含水量(n=8),免疫組化法測(cè)定腦組織中IL-1β、TNF-α、Iba-1蛋白水平(n=8),缺血皮質(zhì)腦組織勻漿后測(cè)定IL-1β、TNF-α、SOD、MDA、NO、NOS、iNOS含量(n=8)。 結(jié)果： Sham組無(wú)神經(jīng)功能缺損,HG組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于NG組(P0.05); NG+PB組評(píng)分略低于NG組(P0.05)；HG+PB組大鼠組評(píng)分明顯低于HG組(P0.05)。 NG+PB組腦含水量稍高于Sham組(P0.05),其余各組腦含水量明顯高于Sham組(P0.05)；NG組大鼠腦含水量明顯高于NG組(P0.05); NG+PB、 HG+PB兩組腦含水量明顯低于對(duì)應(yīng)的NG、NG組(均P0.05)；HG+PB組腦含水量高于NG+PB組(P0.05)。 Sham組未見(jiàn)腦梗死灶；HG組大鼠腦梗死體積比明顯高于NG組(P0.05)；NG+PB、HG+PB兩組大鼠腦梗死體積比明顯低于對(duì)應(yīng)的NG、NG組(均P0.05)；HG+PB組腦梗死體積比仍高于NG+PB組(P0.05)。 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明,各組缺血側(cè)腦組織中Iba-1、IL-1β、TNF-α的.表達(dá)(OD值)均高于Sham組(均P0.05),HG組表達(dá)均高于NG組(均P0.05)；NG+PB、HG+PB兩組表達(dá)均較對(duì)應(yīng)的NG、NG組減少(均P0.05)；但HG+PB組仍高于NG+PB組(P0.05)。 各組缺血再灌注各組腦組織SOD活力均較Sham組明顯下降,而MDA含量增高(P0.05)；HG組大鼠腦組織SOD活力較NG組下降明顯,而MDA、IL-1β、TNF-α含量明顯增高(P0.05)；兩干預(yù)組腦組織SOD活力均較相應(yīng)對(duì)照組明顯升高,而MMDA、IL-1β、TNF-α含量較相應(yīng)對(duì)照組明顯下降(P0.05)。各組腦組織中NO、NOS、iNOS水平均較Sham組明顯升高(P0.05),HG組較NG組更加明顯(P0.05),兩干預(yù)組腦組織NO及其合成酶NOS、iNOS活力均較相應(yīng)模型組下降(P0.05), NG+PB組和HG+PB組差異不明顯(P0.05)。 結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠缺血再灌注后腦組織氧化應(yīng)激和炎癥因子表達(dá)水平較普通大鼠明顯升高,小膠質(zhì)細(xì)胞激活及腦水腫更明顯,梗死體積更大,神經(jīng)功能評(píng)分更高,腦損害更嚴(yán)重。普羅布考預(yù)處理可顯著增高高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注后腦組織抗氧化能力,降低含氮自由基及炎癥因子的表達(dá),減少腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。普羅布考預(yù)處理可改善高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損,減輕腦水腫和腦梗死體積,保護(hù)腦缺血再灌注損傷。 第三部分普羅布考預(yù)處理對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷大腦皮層細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 目的：觀察普羅布考預(yù)處理對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡和腦組織中相關(guān)凋亡因子及通路的影響,進(jìn)一步探討普羅布考對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制。 方法：將80只大鼠隨機(jī)分為五組,每組16只：假手術(shù)組(sham)、正常對(duì)照組(NG)、正常干預(yù)組(NG+PB)、高脂對(duì)照組(HG)、高脂干預(yù)組(HG+PB)。NG+PB組：普通飼料喂養(yǎng)8周后,每天給予5%普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周；sham及NG組：給予普通飼料喂養(yǎng)8周后,每天給予等容積不含普羅布考的0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)灌胃1次共8周；HG+PB組：高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天加予5%普羅布考(100mg/d.kg)灌胃1次共8周；HG組：高脂飼料喂養(yǎng)8周后每天給予給予等量不含普羅布考的0.5%CMC灌胃共8周。Sham組行假手術(shù),其余四組于實(shí)驗(yàn)第16周末制作大鼠大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注損傷模型,缺血2小時(shí)再灌注24小時(shí)后TUNEL法檢測(cè)缺血大腦皮層凋亡細(xì)胞數(shù),Western Blot法測(cè)定Bcl-2、caspase-3、Akt、p-Akt蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)Sham組大腦皮層偶見(jiàn)凋亡細(xì)胞,HG組大鼠缺血大腦皮層凋亡細(xì)胞數(shù)較NG組明顯增多(P0.05), NG+PB組及HG+PB組經(jīng)普羅布考預(yù)處理凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少(均P0.05), HG+PB組凋亡細(xì)胞數(shù)仍高于NG+PB組(P0.05)。 (2)NG組大鼠大腦皮層中Bcl-2表達(dá)水平較假手術(shù)組無(wú)明顯變化(P0.05),HG組Bcl-2表達(dá)水平較NG組升高(P0.05)；與NG、HG組比較,普羅布考預(yù)處理能夠顯著上調(diào)NG+PB組及HG+PB組Bcl-2表達(dá)水平(均P0.05)。腦缺血再灌注各組大腦皮層caspase-3蛋白表達(dá)均較假手術(shù)組增加(P0.05),NG+PB組及HG+PB組經(jīng)普羅布考預(yù)處理caspase-3表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.05),HG+PB組caspase-3表達(dá)仍高于NG+PB組(P0.05)。 (3)各組大腦皮質(zhì)Akt總蛋白表達(dá)水平各組間無(wú)明顯變化(P0.05)。NG組Ser473p-Akt蛋白水平均較假手術(shù)組略升高(P0.05),余各組Ser473p-Akt蛋白水平均較假手術(shù)升高(P0.05),普羅布考預(yù)處理能夠顯著增加NG+PB組及HG+PB組Ser473p-Akt蛋白水平(P0.05)。 結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)肥胖促進(jìn)腦缺血再灌注后大腦皮層caspase-3蛋白表達(dá),加重細(xì)胞凋亡,普羅布考預(yù)處理能夠可使Bcl-2表達(dá)水平上調(diào),減輕Caspase依賴細(xì)胞凋亡通路的激活,促進(jìn)Akt蛋白磷酸化,減輕缺血再灌注誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R589.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 范學(xué)軍,郭科,肖波,資曉宏,宋治;七葉皂甙鈉對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠Bcl-2和Caspase-3表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年03期

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本文編號(hào)：1516786