發(fā)布時(shí)間：2018-01-21 00:56

  本文關(guān)鍵詞： 嗎啡 鞘內(nèi) 脊髓 遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理 心肌再灌注損傷　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的心臟之外的組織或器官(如骨骼肌、小腸等)的短暫缺血再灌注,不僅能減輕自身對(duì)隨后較長時(shí)間的缺血再灌注損傷,而且對(duì)遠(yuǎn)端的心臟也具有保護(hù)作用,即遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理(remote ischemic preconditioning,RIPC),其為繼缺血預(yù)處理(ischemic preconditioning,IPC)后的又一減輕心臟缺血后損傷的重要措施。嗎啡是臨床麻醉與鎮(zhèn)痛中常用的阿片類藥物。前期已經(jīng)證實(shí)鞘內(nèi)小劑量的嗎啡預(yù)處理可以模擬RIPC,對(duì)在體大鼠缺血后心肌損傷具有保護(hù)作用。本研究擬探討鞘內(nèi)遠(yuǎn)端嗎啡預(yù)處理(remote morphine preconditioning,RMPC)心肌保護(hù)作用的機(jī)制。方法成年雄性SD大鼠,體重250~300 g,建立大鼠鞘內(nèi)置管和在體心臟缺血再灌注損傷的動(dòng)物模型,心肌缺血和再灌注由結(jié)扎和開放左冠狀動(dòng)脈實(shí)現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)分組:本實(shí)驗(yàn)分三個(gè)系列進(jìn)行研究。第一部分:研究RMPC對(duì)心肌缺血后損傷的影響及心臟信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。研究分為假手術(shù)(SHAM)組、對(duì)照(CON)組和RMPC組。通過檢測(cè)心肌凋亡數(shù)和心臟Akt、p-Akt和eNOS蛋白的表達(dá),從而探討PI3K-Akt-eNOS介導(dǎo)抗凋亡的機(jī)制在RMPC的心肌保護(hù)效應(yīng)中的作用。第二部分:研究RMPC心肌保護(hù)作用的神經(jīng)體液介導(dǎo)機(jī)制。在RMPC前鞘內(nèi)注射內(nèi)源性遞質(zhì)受體以及神經(jīng)節(jié)阻斷劑(CGRP受體阻斷劑CGRP8-37、緩激肽受體阻斷劑HOE-140、腺苷受體阻斷劑8-SPT和神經(jīng)節(jié)阻斷劑HEX),另設(shè)各自的自身對(duì)照組。第三部分:研究RMPC心肌保護(hù)作用的中樞信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。在RMPC前鞘內(nèi)注射NO-cGMP-PKG信號(hào)通路的抑制劑(NOS抑制劑L-NAME、GC抑制劑ODQ和PKG抑制劑KT-5823),以及觀察胸段脊髓nNOS和PKG蛋白及mRNA的表達(dá),進(jìn)而證明RMPC心肌保護(hù)作用是否由胸段脊髓中樞NO-cGMP-PKG信號(hào)通路參與介導(dǎo)。鞘內(nèi)遠(yuǎn)端嗎啡預(yù)處理是在缺血前30 min內(nèi)經(jīng)5 min鞘內(nèi)輸注嗎啡1μg/kg(用生理鹽水稀釋到10μl),停止5 min,共3個(gè)循環(huán)。觀察指標(biāo)包括:血流動(dòng)力學(xué)和心肌病理學(xué)改變(以梗死區(qū)/危險(xiǎn)區(qū)表示心肌梗死面積,is/aar);westernblotting技術(shù)分析心臟akt、p-akt和enos的蛋白以及胸段脊髓nnos和pkg蛋白的表達(dá);tunel染色測(cè)定心肌細(xì)胞凋亡細(xì)胞數(shù);比色法檢測(cè)血清乳酸脫氫酶(ldh)水平;放射免疫法測(cè)定胸段脊髓組織cgmp的含量;硝酸還原酶法和比色法分別測(cè)定胸段脊髓組織no含量和nos活性;免疫組化染色測(cè)定胸段脊髓nnos和pkg蛋白的表達(dá);rt-pcr測(cè)定胸段脊髓nnosmrna的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,各組之間比較采用方差分析,兩兩比較采用t檢驗(yàn)分析,p0.05認(rèn)為差異有顯著意義。結(jié)果第一部分:1.血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)與sham組比較,con組和rmpc組在缺血30min和再灌注120min時(shí)點(diǎn),hr、map和rpp均顯著降低(p0.05);與基礎(chǔ)值比較,con組和rmpc組缺血30min、再灌注120min時(shí)hr、map和rpp均降低(p0.05)。2.心肌梗死面積與con組比較,rmpc組顯著降低了梗死區(qū)體積(is)和心肌梗死面積(is/aar),表明rmpc對(duì)在體大鼠心肌缺血/再灌注損傷有保護(hù)作用。3.tunel染色結(jié)果與sham組比較,con組大鼠心肌組織凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多(p0.01);與con組比較,rmpc組大鼠心肌組織凋亡細(xì)胞數(shù)減少(p0.01)。表明rmpc可以降低心臟缺血后心肌細(xì)胞的凋亡。4.westernblotting檢測(cè)結(jié)果各組大鼠心肌組織akt表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與sham組比較,con組心肌組織p-akt表達(dá)上調(diào)(p0.01),enos表達(dá)下調(diào)(p0.01);與con組比較,rmpc組心肌組織p-akt和enos表達(dá)均上調(diào)(p0.01)。表明心臟經(jīng)歷缺血后大鼠心肌處于p-akt激活和enos抑制水平;然而rmpc可同時(shí)激活心肌組織p-akt和enos。第二部分:1.血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)與con組比較,缺血前即刻hex組map降低,hex+rmpc組map、rpp降低(p0.05),基礎(chǔ)值、缺血30min和再灌注120min其余各組hr、map和rpp差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與基礎(chǔ)值比較,缺血前即刻hex組map、rpp降低,hex+rmpc組hr、map和rpp均降低(p0.05),各組缺血30min、再灌注120min時(shí)hr、map和rpp均降低(p0.05)。2.心肌梗死面積與con組比較,除8-spt+rmpc組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)外;其余cgrp8-37+rmpc組、hoe-140+rmpc組和hex+RMPC組以及它們自身對(duì)照組(CGRP8-37組、8-SPT組、HOE-140組和HEX組)差異均無顯著性(P0.05);然而,與RMPC組比較均有顯著性差異(P0.01)。表明這些阻斷劑自身對(duì)IS/AAR無影響;除8-SPT部分阻斷RMPC心肌保護(hù)作用,其余均可完全取消RMPC心肌保護(hù)效應(yīng)。3.血清中乳酸脫氫酶(LDH)水平與CON組比較,RMPC組血清LDH水平降低(P0.01);而與RMPC組比較,CGRP8-37+RMPC組、8-SPT+RMPC組、HOE-140+RMPC組和HEX+RMPC組血清LDH水平升高(P0.01)。第三部分:1.血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)與CON組比較,基礎(chǔ)值、缺血前即刻、缺血30 min和再灌注120 min時(shí)點(diǎn),其余各組HR、MAP和RPP差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與基礎(chǔ)值比較,各組缺血30 min、再灌注120 min時(shí)HR、MAP和RPP均降低(P0.05)。2.心肌梗死面積L-NAME+RMPC組、ODQ+RMPC組和KT-5823+RMPC組以及它們自身對(duì)照組(L-NAME組、ODQ組和KT-5823組),與CON組相比差異均無顯著性(P0.05);然而,與RMPC組比較均有顯著性差異(P0.01)。表明這些抑制劑本身對(duì)IS/AAR無影響,但均可完全取消RMPC心肌保護(hù)效應(yīng)。3.Western blotting檢測(cè)結(jié)果與CON組比較,RMPC組大鼠胸段脊髓nNOS、PKG蛋白表達(dá)明顯增高(P0.01)。4.放射免疫檢測(cè)結(jié)果與CON組比較,RMPC組胸段脊髓cGMP的含量顯著增加(P0.01)。5.硝酸還原酶法和比色法結(jié)果與CON組比較,RMPC組胸段脊髓組織NO含量和NOS活性均顯著增加(P0.05,P0.01)。6.免疫組化染色結(jié)果與CON組比較,RMPC組胸段脊髓背角區(qū)nNOS和PKG表達(dá)顯著增加(P0.05,P0.01)。7.RT-PCR分析結(jié)果與CON組比較,RMPC組胸段脊髓nNOS mRNA的表達(dá)顯著增加(P0.01)。結(jié)論RMPC對(duì)在體大鼠心臟缺血后損傷具有保護(hù)作用。其的可能機(jī)制:1.RMPC的心肌保護(hù)作用與心臟PI3K-Akt-eNOS信號(hào)通路介導(dǎo)的抗凋亡機(jī)制有關(guān);2.RMPC的心肌保護(hù)作用涉及神經(jīng)與體液機(jī)制,體液因子主要包括CGRP、緩激肽和腺苷;3.RMPC心肌保護(hù)作用的與脊髓中樞NO-cGMP-PKG信號(hào)傳導(dǎo)通路參與介導(dǎo)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1449961