本文關(guān)鍵詞：右美托咪定減輕急性腎損傷及去乙�；窼IRT3介導(dǎo)其腎保護(hù)的機(jī)制研究　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分:生物學(xué)標(biāo)記物早期預(yù)測心血管手術(shù)后腎損傷的價值以及右美托咪定對術(shù)后早期腎損傷的影響目的:評價多項(xiàng)生物學(xué)標(biāo)記物早期預(yù)測心肺轉(zhuǎn)流術(shù)(Cardiopulmonary bypass,CPB)下心血管手術(shù)后腎損傷的價值,探討右美托咪定對心臟術(shù)后早期腎損傷的影響。方法:第1部分:擇期擬行CPB下心血管手術(shù)患者200例,年齡22～86歲,體重46～87 kg。常規(guī)麻醉。記錄術(shù)后急性腎損傷(Acute kidney injury,AKI)發(fā)生情況。于術(shù)前1d和術(shù)后Oh、2h、6h、12h、24h、48h、72h檢測血清肌酐和尿中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Neutrophil gelatinase-associatedlipocalin,NGAL)、胱抑素 C(CystatinC,Cys C)、金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑 2(Tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)和胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白 7(Ihsulin-like growth factor binding protein-7,IGFBP-7)濃度,并計算[TIMP-2]×[IGFBP-7]乘積。記錄術(shù)前1d、術(shù)后Oh、24h、48h、72h序貫器官衰竭估計評分(Sequential Organ Failure Assessment,SOFA)和急性生理與慢性健康評估系統(tǒng)Ⅱ(Acute physiology and chronic health evaluation scoring system,APACHE 11)。受試者工作特征曲線_(Receiver Operating Characteristic,ROC)評價 NGAL、CysC、[TIMP-2]×[IGFBP-7]早期診斷術(shù)后AKI的價值。第2部分:擇期擬行CPB下心血管手術(shù)患者60例,ASA分級Ⅱ或Ⅲ級,NYHA心功能分級Ⅱ或Ⅲ級,年齡23～64-歲,體重48～85 kg,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為2組(n=30):對照組和右美托咪定組(DEX組)。DEX組麻醉誘導(dǎo)前10min靜脈緩慢泵注右美托咪定0.5 μg/kg,繼之以0.2～0.5 μg·kg-1·h-1速率持續(xù)泵注至術(shù)畢,對照組給予等容量生理鹽水。記錄術(shù)后AKI發(fā)生情況。于術(shù)前1d和術(shù)后Oh、2h、6h、12h、24h、48h、72h檢測血清肌酐和尿NGAL、Cys C、TIMP-2、IGFBP-7濃度,并計算[TIMP-2]×[IGFBP-7]乘積。結(jié)果:第1部分:按照改善全球腎臟病預(yù)后組織(Kidney Disease:Improving Global Outcomes,KDIGO)指南診斷AKI,將200例患者根據(jù)術(shù)后是否發(fā)生AK1分為AKI組和非AK1組。AKI組41例,非AK1組159例。兩組患者一般情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。兩組患者CPB時間、主動脈阻斷時間、手術(shù)時間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。AKI患者41例,發(fā)生率為20.5%,其中1級21例(51.2%)、2級14例(34.1%)、3級6例(14.6%)。兩組患者術(shù)后SOFA和APACHEⅡ評分在術(shù)后Oh均顯著升高,隨后逐漸下降。與非AKI組比較,AKI組術(shù)后Oh、24h、48h、72h的SOFA和 APACHEⅡ 評分明顯升高(P0.05)。AKI 組尿 NGAL、CysC、[TIMP-2]×[IGFBP-7]于術(shù)后早期即升高,并持續(xù)至術(shù)后72h,非AKI組的各項(xiàng)尿指標(biāo)于術(shù)后較早期升高后逐漸下降,術(shù)后24～48h回落至術(shù)前水平。與非AKI組比較,AKI組術(shù)后各時間點(diǎn)尿中NGAL、CysC 和[TIMP-2]×[IGFBP-7]的水平升高(P0.05)。術(shù)后 Oh、2h、6h 和 12h,尿 NGAL 的 ROC 曲線下面積(Area under the curve,AUC)分別為 0.689、0.709、0.713、0.803,尿 CysC 的 AUC 分別為 0.639、0.762、0.774、0.812,尿[TIMP-2]×[IGFBP-7]的AUC 分別為 0.687、0.721、0.740、0.779。以尿 NGAL、Cys C、[TIMP-2]×[IGFBP-7]平行試驗(yàn)檢驗(yàn)變量時,術(shù)后-Oh、2h、6h診斷AKI的AUC分別為0.694、0.773、0.794。以系列試驗(yàn)為診斷變量,術(shù)后Oh、2h、6h診斷AKI的AUC分別為0.610、0.631、0.667。三項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)檢測或聯(lián)合檢測的診斷價值均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。AKI診斷敏感性比較,平行試驗(yàn)單項(xiàng)檢測系、列試驗(yàn)。第2部分:兩組患者一般情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。按照KDIGO指南診斷AKI,對照組發(fā)生AKI患者6例(20.0%),DEX組3例(10%),兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。兩組患者術(shù)前Scr以及尿NGAL、Cys C和[TIMP-2]×[IGFBP-7]比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與術(shù)前比較,兩組Scr在術(shù)后未見升高(P0.05);兩組尿NGAL、CysC、[TIMP-2]×[IGFBP-7]在術(shù)后0～6h即開始升高,術(shù)后12～24h逐漸下降,至術(shù)后48～72h回落至術(shù)前水平。與對照組比較,DEX組術(shù)后2～24h 尿 NGAL 和 CysC 水平降低,術(shù)后 0～24h 尿[TIMP-2]×[IGFBP-7]降低(P0.05)。結(jié)論:尿NGAL、CysC以及[TIMP-2]×[IGFBP-7]是預(yù)測CPB下心血管手術(shù)后AKI的早期敏感性指標(biāo),三者聯(lián)合可提高診斷效能。右美托咪定可降低尿NGAL、CysC水平以及TIMP-2和IGFBP-7乘積,減輕心臟術(shù)后早期腎損傷。第二部分:超聲造影監(jiān)測下右美托咪定改善腎缺血再灌注引起的微循環(huán)灌注障礙的研究目的:應(yīng)用超聲增強(qiáng)造影(Contrast-enhancedultrasound,CEUS)技術(shù)定量分析兔腎缺血再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)損傷時微循環(huán)灌注的改變,評價右美托咪定對微循環(huán)的影響。方法 新西蘭家兔24只隨機(jī)分成3組(每組8只):對照組、腎缺血再灌注損傷組(I/R組)和右美托咪定組(DEX組)。I/R組和DEX組切除右腎建立左腎缺血再灌注損傷模型。DEX組在腎缺血前30 min腹腔注射10ug/kg右美托咪定。再灌注24 h后,二維超聲測定腎臟大小,彩色多普勒超聲血流顯像(Color Doppler flow imaging,CDFI)測定腎血流阻力(Resistance index,RI)。超聲造影觀察腎皮質(zhì)灌注,時間-強(qiáng)度曲線(Time-intensity curve,TIC)分析達(dá)峰時間(Time to peak,TTP)、峰值強(qiáng)度(Peak signal intensity,PSI)、曲線上升斜率(Gradientbetweenstart frame to peak frame,Grad)和曲線下面積(Area under the curve,AUC)。超聲造影結(jié)束后,留取血標(biāo)本測定腎功能指標(biāo)(血肌酐、尿素以及NGAL、CysC),留取尿樣本測定尿NGAL、CysC。取腎臟觀察病理改變,測定腎皮質(zhì)中細(xì)胞間粘附分子-1(Intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管細(xì)胞粘附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)含量。直線相關(guān)性分析TIC曲線參數(shù)與ICAM-1、VCAM-1表達(dá)含量之間的關(guān)系。結(jié)果:與對照組比較,I/R組和DEX組腎大小和病理改變明顯,RI增高,TTP延長,PSI和Grad降低,AUC增加,血肌酐、尿素增加,血清和尿中NGAL、Cys C 水平增加,腎皮質(zhì)中ICAM-1、VCAM-1含量增加(P0.05);與I/R組比較,DEX組腎大小和病理改變輕微,RI降低,TTP縮短,PSI和Grad增高,AUC減少,血肌酐、尿素水平降低,血清和尿中NGAL、CysC水平降低,腎皮質(zhì)中ICAM-1、VCAM-1含量降低(P0.05)。TIC參數(shù)(TTP、PSI、Grad)與 ICAM-1、VCAM-1 呈相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:超聲造影結(jié)合時間-強(qiáng)度曲線參數(shù)能定量分析腎I/R損傷時微循環(huán)灌注的改變,右美托咪定可改善腎I/R引起的微循環(huán)損傷。第三部分:右美托咪定通過去乙酰化酶SIRT3減輕腎缺血再灌注損傷的機(jī)制研究目的:探討右美托咪定通過去乙�；赋聊畔⒄{(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶(Sirtuins,SIRT)3保護(hù)腎缺血再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)損傷的機(jī)制。方法:人近端腎小管上皮細(xì)胞系HK2細(xì)胞隨機(jī)分成對照(Control)組、缺氧復(fù)氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)組、右美托咪定(DEX)組(分為 3 個亞組:0.O01nM、O.O1nM 和 O.1nM 組)。H/R組細(xì)胞缺氧(5%C02、1%02、94%N2)24h、復(fù)氧(5%CO2、21%02、74%N2)3h建立H/R損傷細(xì)胞模型,DEX組在缺氧前60min給予不同濃度的右美托咪定,Control組細(xì)胞不做任何處理。HK-2細(xì)胞分別以SIRT3小干擾RNA(Small interfering RNA,siRNA)和質(zhì)粒處理建立SIRT3基因敲減和高表達(dá)的細(xì)胞模型。健康雄性成年C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為3組:假手術(shù)(Sham組)、缺血/再灌注(I/R)組、右美托咪定(DEX)組。I/R組小鼠夾閉雙側(cè)腎蒂45min、再灌注24h建立腎I/R損傷模型;DEX組在缺血前30min給予右美托咪定(25μg/kg,i.p.),Sham僅打開腹腔。缺血前3d以SIRT3siRNA.轉(zhuǎn)染小鼠建立SIRT3基因敲減動物模型。收集HK-2細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞死亡和線粒體膜電位。檢測小鼠血清Scr、血尿素、血清中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)和胱抑素 C(CystatinC,Cys C)水平,檢測腎組織病理形態(tài)學(xué)和細(xì)胞凋亡,測定線粒體SIRT3活性。測定細(xì)胞和組織中親環(huán)蛋白 D(CyclophilinD,CypD)、SIRT3 和細(xì)胞色素 C(Cytochrome C,CytC)以及CypD乙酰化水平。結(jié)果:與Control組比較,H/R誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞死亡率增加,線粒體膜電位下降,SIRT3表達(dá)下降,CypD乙�；胶虲ytC表達(dá)增加(P0.05)。O.01nM、O.1nM濃度的右美托咪定可逆轉(zhuǎn)H/R引起的變化(P0.05),0.1nM右美托咪定效果優(yōu)于O.O1nM(P0.05)。SIRT3質(zhì)粒增強(qiáng)右美托咪定的細(xì)胞保護(hù)作用。SIRT3 siRNA逆轉(zhuǎn)右美托咪定的細(xì)胞保護(hù)作用。I/R可導(dǎo)致小鼠血清Scr、血尿素、NGAL、CysC水平升高,腎小管損傷評分和細(xì)胞凋亡計數(shù)增加,SIRT3表達(dá)和活性降低,CypD乙�；胶虲ytC表達(dá)增加(P0.05)。右美托咪定可逆轉(zhuǎn)I/R誘導(dǎo)的變化(P0.05)。右美托咪定對SIRT3 siRNA小鼠無保護(hù)作用。結(jié)論:右美托咪定通過上調(diào)去乙�；窼IRT3,減輕線粒體損害,抑制細(xì)胞凋亡,從而改善腎缺血再灌注損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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