本文關鍵詞：七氟醚后處理對犬體外循環(huán)肺損傷及AktNF-κB表達的影響　出處：《遵義醫(yī)學院》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:研究七氟醚后處理對體外循環(huán)(CPB)犬肺組織蛋白質絲氨酸蘇氨酸激酶(Akt)/核轉錄因子-κB(NF-κB)表達的影響,探討七氟醚后處理減輕CPB肺損傷的作用機制。方法:健康成年雜種犬24只隨機分為四組,每組6只(n=6):單純手術組(C組)、體外循環(huán)缺血再灌注組(R組)、七氟醚后處理組(S組)、渥曼青霉素(wortmannin)+七氟醚后處理組(W組)。2.5%戊巴比妥鈉腹腔內注射麻醉固定后,行雙腔氣管插管機械通氣,右側股動、靜脈置管監(jiān)測有創(chuàng)動脈血壓及中心靜脈壓。正中開胸,全身肝素化后分別行左鎖骨下動脈和右心耳插管,連接人工心肺機及CPB管道,分離左肺動脈,建立犬體外循環(huán)單肺缺血再灌注損傷模型。S組在開放左肺動脈即刻通過人工膜肺給予呼氣末2%七氟醚后處理30min,W組在開放左肺動脈前10min給予wortmannin,開放左肺動脈的同時,給予2%七氟醚后處理30min,C組只開胸,不做其他處理。各組犬于CPB前(T1)、開放左肺動脈后(T2)及停機后2h(T3)三個時間點抽取股動脈血行血氣分析計算氧合指數(OI)和呼吸指數(RI);取左肺組織保存,HE染色光鏡觀察形態(tài)學變化;石蠟固定后TUNEL法檢測細胞凋亡情況;采用ELISA法檢測肺組織TNF-α的含量;應用Western blot技術檢測肺組織Akt、p-Akt(Ser473)及NF-κB(P65)蛋白表達變化。結果:(1)肺功能指標的變化:四組內不同時點比較:C組各時點OI、RI未見明顯改變(P0.05);與T1比較,T2、T3時刻R、S、W三組OI顯著降低,而RI則明顯升高(P0.05);與T2時刻比較,T3時刻R、S、W三組OI明顯降低,RI明顯升高(P0.05)。四組間同時點比較:T1時刻:四組犬之間OI、RI無明顯差異(P0.05);T2時刻:與C組比較,R、S、W三組OI顯著減低,RI則明顯升高(P0.05);T3時刻,R、S、W三組OI低于C組,相反RI明顯升高(P0.05),S組OI明顯高于R和W組,而RI則相反(P0.05),R和W組之間OI、RI無明顯差異(P0.05)。(2)肺組織光鏡形態(tài)學觀察:四組犬肺組織損傷程度隨時間延長逐漸加重。各組T1時刻肺組織結構完整清晰;T2時刻四組犬肺組織結構稍紊亂,可見部分肺泡壁斷裂,出現炎性細胞浸潤;T3時刻C組肺組織結構較清晰,見少量肺泡壁斷裂及炎性滲出;R和W組肺組織結構紊亂,肺泡壁斷裂嚴重,肺泡腔塌陷充滿水腫液,可見大量炎性細胞和紅細胞浸潤;S組肺組織結構尚清晰,部分肺泡腔塌陷,肺泡壁斷裂,可見炎性細胞及紅細胞滲出,肺損傷程度明顯較R和W組輕。(3)測肺組織細胞凋亡及IHS評分:四組犬肺組織凋亡程度隨時間延長逐漸增加。T1時刻各組犬肺組織可見少量棕褐色的凋亡細胞;T2時刻凋亡細胞數目逐漸增多,染色也逐漸加深;T3時刻,C組出現多量染色較深的陽性細胞,R、S、W三組均出現大量的深染陽性細胞,R、W兩組尤甚并形成凋亡細胞群,凋亡程度明顯高于S組。免疫組化評分(IHS):四組內各時點比較:C組各時點肺組織IHS評分無明顯變化;與T1比較,T3時刻R、S、W三組IHS評分均升高(P0.05),;與T2比較,T3時刻R、S、W三組IHS評分明顯升高(P0.05)。四組間同時點比較:T1、T2時刻各組犬之間IHS評分無明顯差異(P0.05);T3時刻,R、S、W三組IHS評分明顯高于C組(P0.05),與S組比較,R組和W組IHS評分明顯升高(P0.05),R組和W組IHS評分無明顯差異(P0.05)。(4)肺組織Akt/p-Akt(Ser473)表達變化:肺組織總Akt表達變化:四組內各時點及四組之間同時點比較,犬肺組織總Akt表達無明顯差異(P0.05)。肺組織p-Akt(Ser473)表達變化:四組內各時點比較:C組各時點肺p-Akt(Ser473)表達未見明顯改變(P0.05);與T1比較,T2時刻R、S、W三組肺組織p-Akt表達均升高(P0.05),R組和S組T3時刻p-Akt表達明顯高于T1時刻(P0.05),W組表達變化不顯著(P0.05);與T2比較,T3時刻R、S兩組肺組織p-Akt表達水平增高(P0.05),W組肺組織p-Akt表達水平降低(P0.05)。四組間同時點比較:T1時刻四組犬肺組織p-Akt表達無明顯差異(P0.05);T2時刻:與C組比較,R、S、W三組肺組織p-Akt表達增加(P0.05);T3時刻:S組和R組肺組織p-Akt表達水平明顯高于C組(P0.05),W組與C組比較無統(tǒng)計學意義(P0.05),S組p-Akt表達量顯著高于R組(P0.05)。(5)肺組織NF-κB(P65)表達的變化:四組內各時點比較:C組各時間點未見明顯改變;與T1比較,T2、T3時刻R、S、W三組肺組織NF-κB表達水平明顯升高(P0.05);與T2時刻比較,T3時刻R、S、W三組犬肺組織NF-κB表達水平均升高(P0.05)。四組間同時點比較:T1時刻,四組犬肺組織NF-κB表達無明顯差異(P0.05);T2時刻:與C組比較,R、S、W三組犬肺組織NF-κB水平升高(P0.05);T3時刻:C組犬肺組織NF-κB表達水平明顯低于R、S、W三組(P0.05),S組肺組織NF-κB表達水平均明顯低于R和W組(P0.05),R組和W組NF-κB表達無明顯差異(P0.05)。(6)肺組織TNF-α含量的變化:四組內各時點比較:C組各時點肺組織TNF-α含量未見明顯改變(P0.05);與T1比較,T2、T3時刻R、S、W三組肺組織TNF-α含量明顯增加(P0.05);與T2時刻比較,T3時刻R、S、W三組犬肺組織TNF-α含量明顯升高(P0.05)。四組間同時點比較:T1時刻四組犬肺組織TNF-α含量無明顯差異(P0.05);T2時刻:與C組比較,R、S、W三組肺組織TNF-α含量明顯增加(P0.05);T3時刻:R、S、W三組肺組織TNF-α含量明顯高于C組(P0.05),S組TNF-α含量明顯低于R和W組(P0.05),R組和W組TNF-α含量無明顯差異(P0.05)。結論:(1)CPB后隨著犬肺組織TNF-α含量的增加,細胞凋亡增加,肺組織結構破壞嚴重,肺功能降低,肺組織TNF-α含量的增加可能是導致細胞凋亡,加重肺損傷的重要原因。(2)七氟醚后處理后肺功能明顯改善,細胞凋亡減少、肺組織破壞程度減輕,對CPB犬肺損傷有一定的保護作用。(3)七氟醚后處理減輕CPB肺損傷的作用可能與激活PI3K/Akt信號通路抑制肺組織TNF-α和NF-κB表達有關。
[Abstract]:Objective : To study the effect of post - treatment of heptafluoroether on the expression of protein serine - threonine kinase ( PTK ) / nuclear transcription factor - 魏B ( NF - 魏B ) in canine lung tissue during cardiopulmonary bypass ( CPB ) . There was no significant difference in OI and RI between four groups ( P0.05 ) . The levels of OI and RI in groups R , S and W were significantly lower than those in group C ( P0.05 ) . At the same time , the number of apoptotic cells in group C was significantly higher than that in group C ( P0.05 ) . At the same time , the levels of R , S and W in group C were significantly higher than those in group C ( P0.05 ) . There was no significant difference in the expression of p - protein in lung tissue ( P0.05 ) . At the same time , there was no significant difference in the expression level of p - protein in lung tissue ( P0.05 ) in group C and group C ( P0.05 ) . ( 5 ) The expression of NF - 魏B ( P65 ) in lung tissue was significantly higher than that in group C ( P0.05 ) . The levels of NF - 魏B in lung tissues of three groups were significantly lower than those in group C ( P0.05 ) . Compared with group C , the levels of TNF - 偽 in lung tissues of three groups were significantly higher than those in group C ( P0.05 ) , and the levels of TNF - 偽 in lung tissues were significantly higher than those in group C ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R614

【共引文獻】

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1 王麗s，

本文編號：1398889