本文關(guān)鍵詞：麻芥平喘巴布劑對哮喘的藥效及其免疫學調(diào)節(jié)機制研究

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【摘要】：支氣管哮喘(下文簡稱為“哮喘”)作為一種免疫的變態(tài)反應性疾病,引起這種疾病的因素有很多種,以氣道的炎癥性反應、氣道的高反應性和氣道的可逆性的阻塞作為它的主要特征。哮喘在世界范圍內(nèi)嚴重危害著人類健康,世界衛(wèi)生組織將其列為疾病當中的“四大頑癥”之一。中醫(yī)學有著千百年的發(fā)展歷史,在這個過程中,對于哮喘這一疾病的診斷和治療,中醫(yī)學是有著非常豐富的經(jīng)驗的,中醫(yī)學治療哮喘有治療方式多樣化,且無明顯的毒副作用等特點,并由于其療法的天然性和療效的顯著性等優(yōu)點,使中醫(yī)學在治療哮喘的實踐中,逐步得到了廣大哮喘患者的接受和認可。中醫(yī)學治療哮喘有內(nèi)治法和外治法等多種方式,并且外治法治療哮喘有其獨特的優(yōu)點,使其在哮喘的治療中占有重要地位。麻芥平喘巴布劑是由麻黃、白芥子、延胡索、苦杏仁和生姜汁制成的一種新型的中藥外用制劑,針對哮喘兼有氣郁、痰阻、血瘀的特點而組方,以期在哮喘的發(fā)作期可緩解氣道痙攣,在緩解期對于其發(fā)作能夠有一定的預防作用。本課題主要從麻芥平喘巴布劑對BN大鼠哮喘動物模型的藥效學評價及其對Th1/Th2、 Th17/Treg失衡調(diào)節(jié)機制的研究,來進一步分析在哮喘的治療中其發(fā)揮的具體作用,以及它是如何對哮喘的免疫學發(fā)病機制進行調(diào)節(jié)的。希望為日后將其開發(fā)成質(zhì)量可控,療效明確,機制清晰的新型中藥制劑奠定基礎。[目的]1.制備并觀察BN大鼠哮喘動物模型,通過比較麻芥平喘巴布劑與陽性藥物干預后治療效果的異同,以驗證麻芥平喘巴布劑的療效。2.通過進一步研究給藥后不同組別的Th1、Th2、Th17及Treg相關(guān)細胞因子水平及相關(guān)蛋白表達水平的情況,探究麻芥平喘巴布劑的免疫學調(diào)節(jié)機制。[方法]40只SPF級雄性BN大鼠,適應性喂養(yǎng)三天,隨機分為四組：空白對照組、模型對照組、陽性對照組、麻芥平喘巴布劑治療組。實驗第四天,模型對照組、陽性對照組、麻芥平喘巴布劑治療組三組,第一次腹腔注射10%的致敏OVA混懸液。實驗第十一天,以上三組第二次腹腔注射10%的致敏OVA混懸液。實驗第十六天起,陽性對照組腹腔注射1%地塞米松注射液(注射劑量為0.001m1/g)；麻芥平喘巴布劑治療組在背部膈俞和肺俞貼敷麻芥平喘巴布劑。實驗第十九天起,實驗動物用1%OVA溶液霧化激發(fā),連續(xù)激發(fā)七天。給藥激發(fā)結(jié)束后,四組BN大鼠在麻醉狀態(tài)下檢測肺功能指標(氣道阻力為主),而后取支氣管肺泡灌洗液(BALF)、全血、脾臟和肺組織標本。分別用于全血和BALF中白細胞(WBC)分類計數(shù),Th1、Th2、Th17和Treg相關(guān)細胞因子的Elisa檢測,流式細胞分類計數(shù),HE染色和免疫組化檢測。[結(jié)果]1.肺功能檢測結(jié)果：麻芥平喘巴布劑治療組在乙酰甲膽堿(Ach)濃度為3.125mg/ml和6.25mg/ml時,氣道阻力值顯著低于模型組(P0.01),在Ach濃度為12.5mg/ml時,氣道阻力值低于模型組(P0.05)。空白對照組,麻芥平喘巴布劑治療組和陽性對照組動物在Ach濃度分別為3.125mg/ml,6.25mg/ml和12.5mg/ml時,氣道阻力值均無顯著差異。2.全血中WBC分類計數(shù)結(jié)果：麻芥平喘巴布劑治療組的嗜酸性粒細胞(EOS)的數(shù)目和中性粒細胞的數(shù)目均顯著低于模型組(P0.01),嗜酸性粒細胞的數(shù)目,在空白對照組、麻芥平喘巴布劑治療組、和陽性對照組三組之間無顯著性差異；中性粒細胞的數(shù)目在空白對照組與麻芥平喘巴布劑治療組之間無顯著性差異。3. BALF中WBC分類計數(shù)結(jié)果：麻芥平喘巴布劑治療組的嗜酸性粒細胞(EOS)的數(shù)目和中性粒細胞的數(shù)目均顯著低于模型組(P0.01),嗜酸性粒細胞的數(shù)目,在空白對照組、麻芥平喘巴布劑治療組、和陽性對照組三組之間無顯著性差異；中性粒細胞的數(shù)目在空白對照組與麻芥平喘巴布劑治療組之間無顯著性差異。4.肺組織切片HE染色結(jié)果：模型對照組可見肺組織病理切片中有明顯的炎癥細胞浸潤,支氣管黏膜上皮可見細胞排列紊亂,甚至細胞脫落,還可見肺泡間隔增厚等明顯的病理損傷。麻芥平喘巴布劑治療組與陽性對照組可見肺組織病理切片中有少量的炎癥細胞浸潤,未見其它肺組織的明顯病理損傷�？瞻讓φ战M肺組織病理切片中未見炎癥細胞的浸潤,且肺泡和支氣管黏膜上皮的結(jié)構(gòu)均完整清晰。5.脾臟流式細胞計數(shù)結(jié)果：麻芥平喘巴布劑治療組Thl細胞數(shù)目高于模型組(P0.05),Th2細胞的數(shù)目是顯著低于模型組的(P0.01),Th17細胞的數(shù)目是低于模型組的(P0.05), Treg細胞的數(shù)目是顯著高于模型組的(P0.01)。與空白對照組和陽性對照組相比,Th1、Th2、Th17和Treg細胞數(shù)目均無顯著差異。6.免疫組化結(jié)果：麻芥平喘巴布劑治療組肺組織IFN-γ積分光密度值顯著高于模型組(P0.01),IL-4積分光密度值低于模型組(P0.05),IL-17積分光密度值顯著低于模型組(P0.01),IL-10積分光密度值與模型組未見顯著差異,T-bet積分光密度值高于模型組(P0.05), GATA-3積分光密度值顯著低于模型組(P0.01), RORγt的積分光密度值是顯著低于模型組的(P0.01), FoxP3的積分光密度值是高于模型組的(P0.05)。麻芥平喘巴布劑治療組與空白對照組、陽性對照組相比,IFN-γ、IL-4、IL-17、GATA-3、RORγt和FoxP3積分光密度值均無顯著差異,麻芥平喘巴布劑治療組與陽性對照組的T-bet和IL-10積分光密度值顯著高于空白對照組(P0.01)。7.血清、BALF及肺勻漿中Th1、Th2、Th17及Treg相關(guān)細胞因子Elisa檢測結(jié)果：麻芥平喘巴布劑治療組血清中IL-4濃度低于模型組(P0.05),BALF和肺勻漿中IL-4濃度均顯著低于模型對照組(P0.01)；血清中IFN- γ濃度高于模型對照組(P0.05),BALF和肺勻漿中IFN- γ濃度均顯著高于模型組(P0.01)；血清、BALF和肺勻漿中IL-17濃度均顯著低于模型組(P0.01)；血清中IL-10濃度顯著高于模型對照組(P0.01),BALF中IL-10濃度高于模型組(P0.05),肺勻漿IL-10濃度與空白對照組相比沒有顯著差異,與模型對照組相比也沒有顯著差異。麻芥平喘巴布劑治療組在與空白對照組、陽性對照組兩組進行比較時,發(fā)現(xiàn)血清、BALF和肺勻漿中IL-4濃度無顯著差異；血清中IFN- γ濃度高于空白對照組(P0.05),與陽性對照組相比無顯著差異,BALF中IFN- γ的濃度是顯著高于空白對照組的(P0.01),與陽性對照組相比,IFN- γ的濃度未見顯著差異,肺勻漿中IFN- γ濃度與空白對照組和陽性對照組相比無顯著差異；血清、BALF和肺勻漿中IL-4濃度無顯著差異；血清中IL-10濃度是顯著高于空白對照組的(P0.01),與陽性對照組相比,IL-10的濃度未見顯著性的差異,BALF和肺勻漿中IL-10濃度均無顯著差異。[結(jié)論]1.麻芥平喘巴布劑對BN大鼠哮喘動物模型有治療作用。肺功能檢測結(jié)果表明麻芥平喘巴布劑對于Ach引起的氣道平滑肌痙攣有很好的拮抗作用；WBC分類計數(shù)可見其能顯著降低EOS及中性粒細胞等多種炎癥細胞的數(shù)目；HE染色表明其能減少哮喘動物的肺組織病理損傷。2.麻芥平喘巴布劑對BN大鼠哮喘的免疫調(diào)節(jié)是通過改善Th1/Th2、Th17/Treg失衡而實現(xiàn)的。脾臟流式細胞分類計數(shù)、肺組織免疫組化檢測及血清、BALF和肺勻漿相關(guān)細胞因子的Elisa檢測結(jié)果均表明,麻芥平喘巴布劑治療組Th2、Th17低表達和Th1、Treg高表達,而模型組Th2、Th17高表達和Th1、Treg低表達,可見麻芥平喘巴布劑可以通過改善Th1/Th2失衡和Th17/Treg失衡進而對哮喘動物進行免疫調(diào)節(jié)�？梢�,麻芥平喘巴布劑對BN大鼠哮喘動物模型有較好的治療作用,并通過改善Th1/Th2、Th17/Treg失衡而對哮喘模型進行免疫調(diào)節(jié),其對哮喘的治療作用及其他調(diào)節(jié)機制有待于臨床進一步證實。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5

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本文編號：1275882