本文關鍵詞：鹽酸小檗堿對T2DM大鼠腸道菌群及血內(nèi)毒素水平的影響

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【摘要】：目的:觀察2型糖尿病(T2DM)大鼠成模過程中血漿內(nèi)毒素水平與胰島素抵抗的關系;觀察鹽酸小檗堿干預T2DM大鼠的療效,及其對宿主腸道菌群結構和血漿內(nèi)毒素水平的影響,探討鹽酸小檗堿治療T2DM大鼠的作用機制。方法:選擇健康的雄性SD大鼠66只,出生年齡均為6-8周,體重180g-200g,隨機分為兩組:正常對照組(簡稱NC組,n=24)和T2DM組(簡稱T2DM組,n=42)。NC組大鼠普通飼料喂養(yǎng)。T2DM組大鼠經(jīng)高糖高脂膳食喂養(yǎng)12周后,隔夜禁食8小時后于腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(STZ),劑量為30mg/kg,每隔2日于鼠尾處取血測大鼠的空腹血糖(FBG),FBG7.8mmol/L則認為造模成功,如連續(xù)2次以上FBG7.8mmol/L則認為造模失敗。高糖高脂飼料配方:基礎飼料65%、豬油10%、蔗糖15%、干蛋黃10%。于T2DM大鼠成模過程中,即高糖高脂飼料喂養(yǎng)第4、8周時,以及成模后,分別隨機選取NC組和T2DM組各6只大鼠,禁食8小時后給予20%烏拉坦0.4ml/100g麻醉大鼠后,測定大鼠體重,并經(jīng)腹主動脈采血,無菌條件下分離血漿2ml分裝于無菌EP管內(nèi),同時分離血清,上述標本均于-80℃凍存,留取部分肝臟右葉組織,置于包埋盒內(nèi)迅速投入10%中性福爾馬林液24小時后制備臘塊。T2DM組成功獲得T2DM大鼠20只,取其中體重相近的18只大鼠隨機分為持續(xù)高糖高脂對照組(簡稱HSHF組,n=6,繼續(xù)高糖高脂飼料喂養(yǎng))、單純飲食干預組(簡稱干預I組,n=6,改為普通飼料喂養(yǎng))、鹽酸小檗堿干預組(簡稱干預II組,n=6,改為普通飼料喂養(yǎng)的基礎上給予鹽酸小檗堿200mg/kg/d灌胃)。干預8周后,與正常對照組大鼠一起同上處理,測定大鼠體重,留取血漿、血清凍存于-80℃冰箱,制備肝臟右葉組織臘塊。同時留取少量結腸內(nèi)糞便,取2ml置于Rnase EP管內(nèi)液氮冷凍30分鐘后移置-80℃冰箱保存。上述血標本同批測定以下指標,鱟試劑顯色基質(zhì)法測血漿內(nèi)毒素(LPS),免疫濁度法測血清C反應蛋白(CRP)、谷丙轉氨酶(ALT)、血甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG),放免法測空腹胰島素(FINS),計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMAIR),計算公式:FPG(mmol/L)×FINs(m IU/L)/22.5。RT-PCR測定糞便中雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌的含量。肝臟蠟塊行HE染色,觀察肝組織病理學變化。結果:1高糖高脂飲食聯(lián)合STZ誘發(fā)大鼠T2DM形成過程中胰島素抵抗程度與血內(nèi)毒素水平之間的關系:1.1第4周末,與NC組相比,T2DM組大鼠體重增加,ALT、TG、CRP、LPS水平升高,FPG、FINS及HOMA-IR無明顯變化,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);T2DM組大鼠的肝臟病理切片可見以小泡性脂滴為主的肝細胞脂肪變性,氣球樣變。1.2第8周末,與NC組相比,T2DM組大鼠體重增加,ALT、TG、CRP、LPS水平均升高,FPG、FINS及HOMA-IR水平輕度增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);T2DM組大鼠肝臟病理切片觀察見以大泡性脂滴為主的肝細胞脂肪變性,氣球樣變。1.3第14周末,與NC組相比,T2DM組大鼠毛色無光澤,活動少,體重增加較為顯著,ALT、TG、CRP、LPS水平顯著升高,FPG、FINS顯著升高,HOMAIR增大,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);T2DM組大鼠肝臟組織病理切片觀察見肝細胞呈彌漫性空泡樣脂肪變性,肝細胞脂肪變性,氣球樣變,炎性細胞浸潤,炎癥程度加重。1.4血LPS水平與IR程度之間呈正相關,r=0.740,P0.01。2.鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM可能的作用機制:2.1鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠的療效:與正常對照組(NC組)相比,干預I組、干預II組大鼠體重、FPG、FINS、ALT、TG均高于NC組(P0.05);肝臟病理切片可見:肝細胞脂肪變性程度明顯于NC組。與持續(xù)高糖高脂對照組(HSHF組)比較,干預I組、干預II組大鼠體重、FPG、FINS、ALT、TG均低于HSHF組(P0.05);肝組織病理切片示:肝細胞脂肪變性,氣球樣變,少量炎性細胞浸潤病變較HSHF組減輕。與干預I組相比,干預II組HOMA-IR、CRP、LPS減少顯著(P0.05);肝細胞脂肪變性程度明顯改善于干預I組,炎癥浸潤顯著減少。2.2鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后內(nèi)毒素水平的變化:與NC組相比,干預I組、干預II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS均高于NC組(P0.05);與HSHF組比較,干預I組、干預II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS均低于HSHF組(P0.05);與干預I組相比,干預II組大鼠HOMA-IR、CRP、LPS顯著減少(P0.05)。2.3鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后腸道菌群的變化2.3.1鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后革蘭氏陰性菌大腸桿菌屬的變化:與NC組相比,干預Ⅰ組、干預Ⅱ組大腸桿菌屬豐度減少(P0.05);與HSHF組相比,干預Ⅰ組、干預Ⅱ組大腸桿菌屬豐度減少(P0.05);與干預Ⅰ組相比,干預Ⅱ組大腸桿菌屬減少顯著(P0.05)。2.3.2鹽酸小檗堿、單純飲食治療T2DM大鼠后益生菌乳桿菌屬和雙歧桿菌屬的變化:與NC組相比,干預Ⅰ組、干預Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加(P0.05);與HSHF組相比,干預Ⅰ組、干預Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加(P0.05);與干預Ⅰ組相比,干預Ⅱ組乳酸菌屬、雙歧菌屬豐度增加顯著(P0.05)。結論:1長期高糖高脂飲食引起大鼠體內(nèi)血LPS水平輕度升高,誘發(fā)體內(nèi)慢性低度炎癥,并至肥胖、IR,STZ注射后,胰島素分泌相對不足,T2DM產(chǎn)生。2鹽酸小檗堿治療T2DM大鼠有效,其可能的部分作用機制是通過改善腸道菌群結構,減少血LPS水平進入機體,從而緩解內(nèi)毒素血癥,進而達到治療T2DM的目的。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 許霖水,俞志海,王占科,李強;內(nèi)毒素血癥胰島素受體信號異常研究[J];第二軍醫(yī)大學學報;2003年05期

2 王竹;楊月欣;向雪松;祝宇銘;門建華;何梅;;實驗大鼠血糖正常范圍的估算[J];衛(wèi)生研究;2010年02期

3 楊曉慶;李琳琳;王燁;;小鼠腸道菌群代謝產(chǎn)物與糖尿病的相關性研究[J];中國微生態(tài)學雜志;2011年02期

4 曾民德;重視非酒精性脂肪性肝病的研究[J];中華肝臟病雜志;2003年02期

5 華靜，，李繼強，曾民德，張達榮，董曉旭;肝硬化患者腸道菌群的研究[J];中華肝臟病雜志;1998年02期

6 劉鐘梅;李綏晶;李欣;李輝;李光;金旭偉;舒鵬;;遼寧省成年居民糖尿病患病現(xiàn)狀及其相關因素分析[J];中國慢性病預防與控制;2006年04期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周鑫;腸源性內(nèi)毒素血癥在NAFLD、T2DM發(fā)病中的作用及其分子機制的研究[D];山西醫(yī)科大學;2012年

本文編號：1250033