發(fā)布時間：2017-12-02 18:10

  本文關(guān)鍵詞：電針對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子和皮質(zhì)醇基因表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：通過研究腦缺血再灌注損傷大鼠海馬中內(nèi)分泌的相關(guān)激素[腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)和皮質(zhì)醇(CORT)]的變化探討電針經(jīng)穴早期干預(yù)治療對腦缺血再灌注損傷大鼠的療效及可能的機(jī)制。方法：采用改良線栓法制備大鼠MCAO再灌注損傷模型。將240只大鼠分5批購進(jìn),5批所做實驗的時間點分別為6h、12h、1d、3d、7d。每批大鼠48只,采用完全隨機(jī)設(shè)計的方法,將每批大鼠隨機(jī)分為4組,每組12只。4組分別為假手術(shù)組、模型組、電針非經(jīng)穴組、電針經(jīng)穴組。其中,模型組、電針非經(jīng)穴組、電針經(jīng)穴組予以造模,假手術(shù)組造模過程同模型組只是不插入線栓。電針經(jīng)穴組取穴為雙側(cè)“曲池”(橈骨近端的關(guān)節(jié)外側(cè)前方凹陷中)、雙側(cè)“足三里”(膝關(guān)節(jié)后外側(cè),腓骨小頭下約5 mm)、“百會”(頂骨正中)、“風(fēng)府”穴(枕骨頂嵴后枕寰關(guān)節(jié)背凹陷處)。電針刺激參數(shù)：疏密波,頻率2/30 Hz,電流強(qiáng)度1 mA,以大鼠觸須、耳朵微動為度,30 min／次。電針非經(jīng)穴組大鼠腹部消毒后,選取腹部的6個非經(jīng)穴點進(jìn)行針刺,其他同電針經(jīng)穴組。假手術(shù)組、模型組大鼠只固定不針刺。各個時間點的電針經(jīng)穴組和非經(jīng)穴組分別于未次針刺2h后隨機(jī)抽取6只大鼠,按照Zea-Longa判斷神經(jīng)功能缺損的評分,評分結(jié)束后開始取材。以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,斷頭處死,取出腦組織,冰皿上快速分離海馬組織,以錫紙包裹放入試劑管中,最后存放入液氮中暫時保存,后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存待測。PCR檢測：用超純RNA提取試劑盒提取大鼠海馬組織總RNA,以每種總RNA樣品2μg為模板,隨機(jī)引物0.5 u g為引物,42℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)2 h,70℃5 min終止反應(yīng)進(jìn)行cDNA反轉(zhuǎn)錄。目的基因序列通過基因庫獲得,引物采用Primer Premier5.0軟件設(shè)計,最后采用2-ΔΔCt法對實時熒光PCR結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行相對定量分析,以每組樣品β-actin表達(dá)為內(nèi)參。結(jié)果：1)腦缺血再灌注后,大鼠海馬CRF mRNA和CORT mRNA表達(dá)含量明顯增高。2)模型組和電針非經(jīng)穴組中海馬CRF mRNA的表達(dá)在最初的十二個小時內(nèi)持續(xù)增高而達(dá)到峰值,從1d后起不論是模型組、電針非經(jīng)穴組和電針經(jīng)穴組,其海馬中CRF mRNA的表達(dá)含量均開始下降。電針干預(yù)治療在1d后能顯著降低海馬CRF mRNA的表達(dá)的含量。3)模型組、電針非經(jīng)穴組、電針經(jīng)穴組大鼠在腦缺血再灌注損傷6h后,海馬內(nèi)CORT mRNA都呈高表達(dá)狀態(tài)。電針經(jīng)穴組較模型組和電針非經(jīng)穴組,6h的CORT mRNA表達(dá)含量明顯降低。電針經(jīng)穴組和電針非經(jīng)穴組在1d以后都能顯著的降低大鼠海馬CORT mRNA的表達(dá)含量,1d至3d時電針經(jīng)穴較電針非經(jīng)穴下降更顯著,7d后二者的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。非經(jīng)穴都能發(fā)揮降低海馬CORT mRNA表達(dá)含量的作用,但電針經(jīng)穴較非經(jīng)穴能更早更顯著的發(fā)揮作用。4)電針經(jīng)穴組與電針非經(jīng)穴組比較,能顯著的改善神經(jīng)功能評分。結(jié)論：腦缺血再灌注損傷后海馬內(nèi)分泌相關(guān)激素[腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)和皮質(zhì)醇(CORT)]表達(dá)升高,可能加重腦組織和海馬神經(jīng)元的損傷,本實驗中電針經(jīng)穴可降低CRF和CORT mRNA的表達(dá),對腦缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能有良好的恢復(fù)作用以及對海馬神經(jīng)元有保護(hù)作用。因而,認(rèn)為電針保護(hù)腦缺血再灌注損傷的機(jī)制可能與降低海馬中CRF和CORT mRNA的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R245

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本文編號：1245802