本文關(guān)鍵詞：芪黃保腎方對腎衰竭幼鼠PAX2表達的影響

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【摘要】：目的:觀察芪黃保腎方對腎衰竭幼鼠腎臟組織配對盒基因2(Paired box2,PAX2)的表達的影響,探討芪黃保腎方保護腎功能,延緩兒童腎衰竭的作用機制。對象:65只體重范圍在80至120g的四周齡SD幼鼠,購置于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院動物實驗中心。實驗期間,所有幼鼠均在黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心飼養(yǎng)。室溫維持在22-24℃,相對濕度保持在(50-70)%,人工12h晝/夜循環(huán)照明。保持通風(fēng)、安靜,定期更換墊料,消毒實驗動物籠具。動物自由飲水,普通飲食。所有食物及飲用水都由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供,所有食物都經(jīng)過了嚴(yán)格的消毒。方法:按照隨機分組法將這65只幼鼠隨機分在5組:假手術(shù)組、模型組、蟲草組、芪黃保腎方組(簡稱芪黃組)、芪黃保腎方+蟲草組(即聯(lián)合組)。每組單獨飼養(yǎng),采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)制作腎衰竭幼鼠模型,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,在左側(cè)恥骨上切口,鈍性剝離左腎下極尋到左輸尿管,用4-0號絲線在左腎的輸尿管上上下結(jié)扎兩道,上一道絲線結(jié)扎在左腎下極,從兩道結(jié)扎點中間剪斷輸尿管,造成輸尿管的梗阻,然后給予逐層縫合關(guān)閉幼鼠腹腔。假手術(shù)組同期也進行兩次手術(shù),手術(shù)環(huán)境和方法同其余4個手術(shù)組,但每次打開腹腔后僅剝離臟被膜,關(guān)腹。第一次手術(shù)后第2天,對所有幼鼠進行灌胃:蟲草組(1.2mg/g/d溶于等體積蒸溜水灌胃)。假手術(shù)組(等體積蒸溜水灌胃),模型組(等體積蒸溜水灌胃),芪黃保腎方組按芪黃保腎方4mg/g/d溶于等體積蒸餾水灌胃,聯(lián)合組為4mg/g/d芪黃保腎方+1.2mg/g/d蟲草菌絲粉溶于等體積蒸餾水灌胃。每天06:00和18:00各灌胃一次。每周據(jù)新測體重計算一次藥量。在術(shù)后21天后每組處死10只,麻醉剖腹后用采血針在腹主動脈采血2-3ml,測血清中肌酐、尿素氮的含量,迅速摘下梗阻側(cè)腎臟,觀察其外觀,生理鹽水清洗干凈后,取一半腎臟組織浸于10%福爾馬林中固化,光鏡觀察病理學(xué)改變,免疫組化檢測PAX2的表達。結(jié)果:1.與模型組比較,芪黃組、聯(lián)合組及蟲草組幼鼠一般狀態(tài)較好,幼鼠體征均優(yōu)于模型組。2.與模型組比較,芪黃組、聯(lián)合組及蟲草組幼鼠血清肌酐及尿素氮含量均低于模型組。其中聯(lián)合組血清肌酐及尿素氮含量均優(yōu)于其他各組。3.對梗阻側(cè)腎組織的光學(xué)顯微鏡觀察:假手術(shù)組可見小球、腎小管間質(zhì)未見增生。模型組(圖2)可見部分腎組織腎小球呈現(xiàn)局灶性或全部硬化,本次實驗以小球系膜細胞及基質(zhì)重度增生,球基底膜增厚,管擴張、萎縮,間質(zhì)有大量炎性細胞浸潤,同時伴有纖維組織增多,間質(zhì)呈現(xiàn)纖維化。蟲草組(圖3)及芪黃組(圖5)小部分腎小球局灶性硬化,部分腎組織小管有擴張、系膜輕度增生,輕度間質(zhì)纖維化,伴炎癥細胞浸潤。聯(lián)合組(圖4)表現(xiàn)在間質(zhì)細胞輕度增生,部分小管擴張,管壁變薄,少量炎癥細胞浸潤。4.與模型組比較,免疫組化半定量分析顯示芪黃組及蟲草組、聯(lián)合組腎小管PAX2的表達均少于模型組。且聯(lián)合組(圖10)下調(diào)PAX2蛋白的表達最明顯。結(jié)論:1.芪黃保腎方能夠改善腎衰竭幼鼠的生存狀態(tài)。2.芪黃保腎方能夠改善腎衰竭幼鼠的腎功能。3.芪黃保腎方能夠減輕腎衰竭幼鼠腎臟病理損害,降低腎小管的損害,起到拮抗腎間質(zhì)纖維化的作用。4.芪黃保腎方能夠下調(diào)腎衰竭幼鼠腎組織PAX2的表達,使細胞外基質(zhì)成分合成減少,減緩腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展,推測其可能為芪黃保腎方防治腎衰竭的作用機制之一,可為臨床治療兒童腎衰竭提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R277.5

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本文編號：1215581