發(fā)布時(shí)間：2017-11-19 20:27

  本文關(guān)鍵詞：銀翹散調(diào)節(jié)上呼吸道黏膜免疫作用及機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:項(xiàng)目組前期研究表明銀翹散能提高寒冷致上呼吸道黏膜免疫功能低下模型(upper airway immunity dysfunction model,UAID model)小鼠上呼吸道黏膜免疫功能,并證實(shí)銀翹散對(duì)UAID model合并鼻腔接種肺炎鏈球菌感染小鼠有生存保護(hù)作用。本研究從SIg A的合成和分泌過(guò)程著手進(jìn)一步研究銀翹散防治急性上呼吸道感染(Acute upper respiratory tract infection,AURI)的作用機(jī)制。方法:1.寒冷致上呼吸道黏膜免疫功能低下模型的復(fù)制以小鼠唾液中SIgA的含量為指標(biāo)評(píng)價(jià)UAID model的復(fù)制是否成功;并采用Western Blot技術(shù)、Real-Time PCR技術(shù)分別檢測(cè)UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,Ig A)和多聚體免疫球蛋白受體(polymeric immunoglobulin receptor,p Ig R)的蛋白表達(dá)及p Ig R的m RNA表達(dá)水平的變化,為后期研究銀翹散對(duì)上呼吸道黏膜免疫作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。2.銀翹散調(diào)節(jié)上呼吸道黏膜免疫作用機(jī)制的研究2.1 IgA蛋白及相關(guān)細(xì)胞因子的測(cè)定:復(fù)制UAID model后,處死小鼠,取小鼠口腔及咽喉部黏膜組織,采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)銀翹散對(duì)UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中Ig A蛋白表達(dá)的影響,并采用ELISA法檢測(cè)銀翹散對(duì)UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中細(xì)胞因子IL-4、IL-6和TGF-β含量的影響;2.2 pIgR的蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)和相關(guān)細(xì)胞因子的測(cè)定:模型復(fù)制及取材同2.1,之后采用Western Blot技術(shù)、Real-Time PCR技術(shù)分別檢測(cè)銀翹散對(duì)UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中p Ig R的蛋白表達(dá)及m RNA表達(dá)的影響,并采用ELISA法檢測(cè)銀翹散對(duì)UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α含量的影響。通過(guò)對(duì)小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中Ig A和p Ig R的蛋白表達(dá)及p Ig R的m RNA表達(dá)水平,以及相關(guān)細(xì)胞因子含量的檢測(cè),探討銀翹散調(diào)節(jié)上呼吸道黏膜免疫作用的可能機(jī)制。3.銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠的保護(hù)作用研究3.1流感病毒對(duì)UAID model小鼠半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定:取凍存的流感病毒液,復(fù)融后用生理鹽水10倍比連續(xù)稀釋為10-1~10-6 6個(gè)濃度組備用。復(fù)制UAID model[1]后,采用乙醚輕度麻醉小鼠,用移液槍經(jīng)小鼠鼻腔接種10-1~10-6流感病毒液,0.05 ml/只,連續(xù)觀察14 d,記錄小鼠的死亡數(shù),并計(jì)算死亡率,按Reed-Meunch法[4]計(jì)算流感病毒對(duì)小鼠的半數(shù)致死量(LD50)。以LD50濃度的病毒作為藥效學(xué)研究中流感病毒的感染濃度。3.2銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠死亡率、存活時(shí)間的影響復(fù)制UAID model,采用乙醚輕度麻醉小鼠,用移液槍經(jīng)小鼠鼻腔接種引起小鼠LD50濃度的流感病毒,0.05 m L/只,記錄14 d各組小鼠的死亡數(shù)、存活時(shí)間,并計(jì)算死亡率、生命延長(zhǎng)率,以評(píng)價(jià)銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠的生存保護(hù)作用。3.3銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠肺指數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、給藥劑量、復(fù)制UAID model及接種病毒的方法同3.2,于小鼠感染病毒后第6 d稱小鼠體重后摘眼球放血處死動(dòng)物,取全肺稱重,計(jì)算肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率。通過(guò)對(duì)肺指數(shù)的觀察,評(píng)價(jià)銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠肺臟的保護(hù)作用。結(jié)果:1.UAID model的復(fù)制與評(píng)價(jià)-20℃的寒冷刺激15 min能降低小鼠唾液中SIgA的含量(P0.05),同時(shí)也能下調(diào)小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中p Ig R的m RNA水平(P0.05)和蛋白表達(dá)水平(P0.05),而對(duì)Ig A的蛋白表達(dá)僅有降低趨勢(shì),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示-20℃的寒冷刺激15 min可能是通過(guò)下調(diào)小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中p Ig R的表達(dá),致使SIg A的分泌減少,從而降低了小鼠上呼吸道黏膜免疫功能。2.銀翹散調(diào)節(jié)上呼吸道黏膜免疫作用機(jī)制的研究:2.1銀翹散對(duì)Ig A的蛋白表達(dá)及相關(guān)細(xì)胞因子的影響:銀翹散能增加UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中細(xì)胞因子IL-6的含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而對(duì)Ig A的蛋白表達(dá)以及IL-4、TGF-β僅有增高趨勢(shì),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.05)。2.2銀翹散對(duì)pIgR的蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)和相關(guān)細(xì)胞因子的影響:銀翹散能上調(diào)UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中pIgR的mRNA及蛋白表達(dá)水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01);還能增加UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α的含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001,P0.001)。3.銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠的保護(hù)作用研究:3.1流感病毒對(duì)UAID model小鼠LD50的測(cè)定:本室保存的甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株H1N1感染小鼠的LD50值為3.33,將10-3.33濃度的流感病毒作為感染UAID model小鼠的病毒濃度做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.2銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠的保護(hù)作用:銀翹散能明顯降低UAID合并病毒感染模型小鼠的死亡率(P0.05),延長(zhǎng)其生存時(shí)間(P0.05),對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠的肺指數(shù)有抑制作用(P0.05)。結(jié)論:1.寒冷可能是通過(guò)下調(diào)小鼠口腔及咽喉部黏膜組織中pIg R的mRNA水平及蛋白表達(dá)水平抑制了SIg A的分泌,從而降低了小鼠上呼吸道黏膜免疫功能。2.銀翹散提高上呼吸道黏膜免疫的作用可能與其提高口腔及咽喉部黏膜組織中細(xì)胞因子INF-γ和TNF-α的含量,上調(diào)p Ig R的基因和蛋白的表達(dá),從而增加上呼吸道SIg A的含量有關(guān)。3、銀翹散對(duì)UAID合并病毒感染模型小鼠有保護(hù)作用,其作用可能與其提高UAID model小鼠口腔及咽喉部黏膜中細(xì)胞因子INF-γ和TNF-α的含量,上調(diào)p Ig R基因和蛋白的表達(dá),從而增加了上呼吸道SIg A的含量,提高上呼吸道黏膜免疫功能有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：1204828