本文關(guān)鍵詞：水林佳對(duì)硫代乙酰胺所致的比格犬肝纖維化的保護(hù)作用及對(duì)Smad3信號(hào)通路的影響

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【摘要】：研究背景:肝纖維化是由于內(nèi)源和外源性的致病因素長(zhǎng)期作用于肝臟導(dǎo)致的結(jié)果,如病毒、細(xì)菌及寄生蟲(chóng)感染;膽管阻塞;某些化學(xué)藥物、毒物以及脂滴的沉積等,這些都可導(dǎo)致肝纖維化。活化的肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)能夠產(chǎn)生遠(yuǎn)超出處于穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)的大量的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM),這是導(dǎo)致肝纖維化的最直接途徑,其導(dǎo)致肝臟瘢痕形成,最終形成肝硬化甚至肝癌,危害人類健康。影響HSC活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中與之關(guān)系最為密切的是Smad信號(hào)通路,而Smad3是該通路承上啟下的關(guān)鍵分子,在HSC活化過(guò)程中起著重要作用。導(dǎo)師前期研究發(fā)現(xiàn)Smad3介導(dǎo)的信號(hào)通路在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大鼠肝纖維化形成過(guò)程中起重要作用;下調(diào)Smad3的表達(dá),在肝組織中的ECM沉積量顯著降低。目前研究認(rèn)為抑制HSC的活化,能夠逆轉(zhuǎn)肝纖維化。水林佳是一種經(jīng)典的肝損傷修復(fù)藥物,它的主要成分是水飛薊賓(silybin),該物質(zhì)具有很強(qiáng)的清除氧自由基、減輕過(guò)氧化反應(yīng)的作用,提高肝臟解毒能力,穩(wěn)定、保護(hù)肝細(xì)胞膜,加快肝細(xì)胞修復(fù)、再生及具有抗肝纖維化的作用。但是水林佳對(duì)于肝纖維化的作用機(jī)制是否有Smad3信號(hào)通路參與的報(bào)道少見(jiàn)。為此本課題以硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)構(gòu)建比格犬肝纖維化模型,再給予水林佳懸液灌胃治療,探討水林佳對(duì)肝纖維化的保護(hù)作用及是否通過(guò)Smad3信號(hào)通路發(fā)揮作用。目的:明確水林佳對(duì)TAA所致的比格犬肝纖維化是否具有保護(hù)作用,且該作用是否通過(guò)Smad3信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。方法:健康、雄性比格犬18只,隨機(jī)分成3組,每組6只。正常組:正常飼養(yǎng)12周。模型組:TAA皮下注射12mg/kg,2次/周,持續(xù)12周。TAA+水林佳組:TAA皮下注射12mg/kg,2次/周,持續(xù)12周,從第5周開(kāi)始同時(shí)水林佳懸液灌胃每只28mg/kg/d。12周末,三組動(dòng)物均靜脈注射戊巴比妥鈉麻醉后,取各只犬相同肝葉的肝組織用中性甲醛保存。選HE染色觀察三組比格犬肝組織的病變程度;Masson染色觀察比較三組的纖維膠原含量變化;選免疫組織化學(xué)染色方法用于觀察比較三組比格犬肝組織的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、I型膠原(Collagen I)及Smad3的表達(dá)和分布。結(jié)果:1.HE染色結(jié)果在正常組肝組織中可見(jiàn)有完整的肝小葉結(jié)構(gòu),肝細(xì)胞整齊有序的排列,細(xì)胞的大小均一,胞漿飽滿。模型組的肝組織中則觀察到肝小葉結(jié)構(gòu)不清,肝索結(jié)構(gòu)紊亂,呈不規(guī)則排列,肝細(xì)胞變性壞死,可見(jiàn)大量粗壯的膠原纖維延伸,周圍充滿大量的炎性細(xì)胞。TAA+水林佳組病變明顯比模型組減輕,但仍比正常組嚴(yán)重。2.Masson染色結(jié)果模型組與正常組相比膠原纖維明顯增粗變多,染色呈藍(lán)色,伸入肝小葉中,膠原面積百分比明顯增高(12.77±0.43 vs 0.30±0.02,P0.01);TAA+水林佳組中膠原纖維明顯減少,膠原面積百分比低于模型組(4.68±0.22 vs 12.77±0.43,P0.01),但高于正常組(4.68±0.22 vs 0.30±0.02,P0.01),以上差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.肝臟組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定:以圖像中棕黃色、黃色染色部分為陽(yáng)性表達(dá)。3.1α-SMA的表達(dá):正常組僅在肝組織匯管區(qū)少量表達(dá);模型組在匯管區(qū)及纖維條索處可見(jiàn)其表達(dá)增多,呈棕黃色;TAA+水林佳組表達(dá)減少,呈淺黃色,比正常組病變加重。3.2 Collagen I的表達(dá):正常組僅表達(dá)在血管壁、膽管壁,呈淺黃的細(xì)絲狀;模型組在匯管區(qū)、纖維條索等部位可見(jiàn)大量棕黃色的粗條狀纖維;TAA+水林佳組陽(yáng)性表達(dá)較模型組少,但比正常組表達(dá)增多。3.3 Smad3的表達(dá):正常組中僅在肝竇及其周圍的肝細(xì)胞胞漿中表達(dá),呈淺黃色;模型組在匯管區(qū)、肝竇和肝細(xì)胞中有大量的棕黃色顆粒;TAA+水林佳組較模型組表達(dá)明顯減少、染色減弱,但仍比正常組的染色部分增多。對(duì)以上圖像做半定量分析,結(jié)果顯示:模型組中的α-SMA、Collagen I及Smad3的表達(dá)量均明顯高于正常組(15.93±1.59vs1.52±0.17;20.19±0.15 vs 0.41±0.02;6.69±0.23 vs 0.90±0.09,P0.01);在TAA+水林佳組中,以上指標(biāo)的表達(dá)量均低于模型組(5.39±0.31 vs 15.93±1.59;5.04±0.09 vs 20.19±0.15;2.34±0.31 vs6.69±0.23,P0.01),但高于正常組(5.39±0.31 vs 1.52±0.17;5.04±0.09 vs0.41±0.02,P0.01;2.34±0.31 vs 0.90±0.09,P0.05),以上差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:水林佳可以通過(guò)抑制HSC激活,減少Collagen I產(chǎn)生而改善TAA誘導(dǎo)的比格犬肝纖維化,且該作用可能與Smad3信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化 水林佳 Smad3 比格犬
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 常見(jiàn)縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表12-13
• 前言13-15
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 材料15-16
• 1.2 方法16-19
• 2 結(jié)果19-23
• 2.1 動(dòng)物一般情況19
• 2.2 HE染色結(jié)果19
• 2.3 Masson染色結(jié)果19-21
• 2.4 組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果21-23
• 3 討論23-26
• 4 結(jié)論26-27
• 5 創(chuàng)新之處27-28
• 6 存在的問(wèn)題及今后研究方向28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述32-43
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-45
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)介46

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 潘勤;謝渭芬;張忠兵;;肝纖維化自發(fā)逆轉(zhuǎn)的相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年04期

2 Yun Zhang;Qian-Qian Zhang;Xiao-Hong Guo;Hai-Yan Zhang;Li-Xin Liu;;IGFBPrP1 induces liver fibrosis by inducing hepatic stellate cell activation and hepatocyte apoptosis via Smad2/3 signaling[J];World Journal of Gastroenterology;2014年21期

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本文編號(hào)：1017401