發(fā)布時間：2017-09-21 12:07

  本文關(guān)鍵詞：登革熱流行病學(xué)調(diào)查及重癥登革熱病理機制研究

  更多相關(guān)文章： 登革病毒 流行病學(xué)研究 抗體依賴性增強感染 CD46 補體風(fēng)暴

【摘要】：本研究首先對中國的登革熱流行病學(xué)進行系統(tǒng)描繪,并從GenBank數(shù)據(jù)庫中篩查出所有分離自中國的登革基因序列共749條,進行進化發(fā)育分析。結(jié)果顯示,自1978年至2014年間,我國共計報告登革熱感染病例累計達735735例。1978年～1991年間疫情主要集中在廣東省和海南省,自1991年后集中在廣東、云南、浙江和福建四省,占全國感染病例的90%以上。死亡人數(shù)有507人,多數(shù)在1988年以前。感染人群的年齡分布呈扇形,集中在20～45歲之間。流行的登革毒株主要為Ⅰ型和Ⅱ型,呈交叉循環(huán)或共同感染模式。存在本地循環(huán)傳播和各省跨時空循環(huán)傳播交替出現(xiàn)的特點,也存在同一毒株的本地延續(xù)性傳播。將2013年云南登革流行株全基因序列與Ⅲ型登革病毒標(biāo)準(zhǔn)株對比,確定共有62個氨基酸突變,與其親緣關(guān)系最近的為2013年海南流行株及2002年孟加拉國流行株。2015年獲得的17個登革全基因序列經(jīng)內(nèi)部比對,共找到217處堿基突變位點,其中非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)域共有213處。將42個結(jié)構(gòu)蛋白基因序列與Ⅱ型標(biāo)準(zhǔn)株進行比對,共發(fā)現(xiàn)36個氨基酸突變產(chǎn)生。進化分析顯示,該流行株與2004年斯里蘭卡流行株及2001年印度流行株屬于同一進化分支。對375例登革熱患者進行臨床病理分析,發(fā)現(xiàn)患者普遍存在不同程度的炎癥反應(yīng)、血管滲漏和肝損傷。血清中病毒載量并不是導(dǎo)致重癥登革熱的唯一原因,NSl含量、補體的合成和消耗與重癥登革熱具有相關(guān)性。利用Ⅱ登革病毒及其同型別前膜蛋白prM抗體建立人全血ADE模型,發(fā)現(xiàn)ADE感染組病毒拷貝數(shù)高于普通感染組2.94倍,補體C3水平降低61.5%。兩個登革感染組上清中均有大量C3a、C5a產(chǎn)生,補體C3bBb含量也明顯升高,其中ADE組高于普通感染組2.6倍,而C1q含量變化不大,證明補體旁路途徑過度激活是ADE感染過程中的效應(yīng)機制之一。最后利用陰性分離的單核細胞建立抗體依賴增強感染體外模型。兩個登革感染組上清中均有大量C3a、C5a產(chǎn)生,伴隨IL-10的表達升高。經(jīng)免疫共沉淀、質(zhì)譜鑒定及Western Blot驗證,證明膜輔助蛋白CD46與NS1具有相互作用。與單核細胞ADE模型共培養(yǎng)后免疫熒光染色檢測HuVEC表面C5b-9的形成,伊紅染色觀察細胞骨架改變。結(jié)果ADE組HuVEC有明顯的病理損傷,提示補體過度激活可能是導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞損傷和血管滲漏的原因之一。綜合上述研究結(jié)果,我們提出了“補體風(fēng)暴”假說。即登革病毒NS1在細胞中大量復(fù)制并游離至血液中,循環(huán)遷移到全身各處。通過競爭結(jié)合補體調(diào)控因子CD46,使CD46散失或部分抑制對補體的調(diào)控作用,引起補體旁路途徑過度活化,產(chǎn)生大量補體裂解片段,導(dǎo)致類似超敏反應(yīng)的全身性臨床癥狀。
【關(guān)鍵詞】：登革病毒 流行病學(xué)研究 抗體依賴性增強感染 CD46 補體風(fēng)暴
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R512.8;R181.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 第一部分 登革熱分子流行病學(xué)研究10-55
• 前言10-11
• 1 登革病毒的生物學(xué)特征11-14
• 1.1 登革病毒的分子結(jié)構(gòu)和基因組11-12
• 1.2 登革病毒的復(fù)制和傳播途徑12-14
• 1.3 世界范圍內(nèi)登革熱的流行概況14
• 2 中國歷年登革熱流行情況的回顧性研究14-27
• 2.1 研究方法概述14-17
• 2.2 中國歷年登革熱的地理分布17-20
• 2.3 中國歷年登革熱的時間分布20-21
• 2.4 中國歷年登革熱的人口分布21-23
• 2.5 中國歷年登革熱的型別分布23
• 2.6 中國歷年登革熱流行株的進化發(fā)育研究23-27
• 3 云南省西雙版納州登革熱分子流行病學(xué)研究27-50
• 3.1 概述27-29
• 3.2 材料與方法29-34
• 3.3 2013年西雙版納州登革熱流行病學(xué)研究34-42
• 3.4 2015年西雙版納州登革熱流行病學(xué)研究42-50
• 討論50-55
• 第二部分 重癥登革熱臨床病理觀察55-71
• 前言55-56
• 1 研究背景及實驗思路56-58
• 2 材料與方法58-63
• 2.1 臨床研究設(shè)計及參與者招募58
• 2.2 實驗材料58-59
• 2.3 實驗方法59-63
• 3 結(jié)果63-68
• 3.1 登革熱血清中非結(jié)構(gòu)蛋白NS1含量檢測63-64
• 3.2 登革熱血清樣本的常規(guī)血液指標(biāo)檢測結(jié)果64
• 3.3 登革熱血清中登革熱病毒載量檢測64-66
• 3.4 登革熱血清中免疫球蛋白IgG/IgM/IgA水平檢測66-67
• 3.5 登革熱血清中補體C3/C4水平檢測67-68
• 討論68-71
• 第三部分 補體與重癥登革熱的相關(guān)性研究71-84
• 前言71-75
• 1 材料與方法75-78
• 1.1 白紋伊蚊細胞培養(yǎng)75
• 1.2 登革病毒毒株擴增及鑒定75
• 1.3 收獲病毒液的滴度測定75-76
• 1.4 人血清抗體依賴增強補體裂解模型的建立76
• 1.5 人全血抗體依賴增強感染模型的建立76
• 1.6 免疫比濁法測定補體C376-77
• 1.7 C3裂解產(chǎn)物(C3SP)C3a的定量檢測77-78
• 1.8 補體裂解產(chǎn)物C5a、C3bBb、C1q的定量檢測78
• 2 結(jié)果78-82
• 2.1 登革病毒的型別鑒定78-79
• 2.2 利用人血清建立抗體依賴增強補體裂解模型79
• 2.3 利用人全血建立ADE模型79-80
• 2.4 利用人全血ADE模型研究補體活化途徑80-82
• 討論82-84
• 第四部分 補體旁路途徑過度激活導(dǎo)致重癥登革熱的病理機制研究84-103
• 前言84
• 1 材料與方法84-92
• 1.1 人外周血淋巴細胞（PBMC）分離及培養(yǎng)84-85
• 1.2 人外周血單核細胞初步純化（Monocytes）85
• 1.3 美天旎MAC陰性磁珠分選人外周血單核細胞85-86
• 1.4 陰性磁珠分選的人外周血單核細胞純度鑒定86
• 1.5 人外周血單核細胞培養(yǎng)條件摸索86-87
• 1.6 人外周血單核細胞抗體依賴增強感染（ADE）模型的建立87
• 1.7 C3a、C5a含量檢測87
• 1.8 ELISA法定量檢測登革熱血清中細胞因子IL-10含量87-88
• 1.9 免疫共沉淀（Co-Immunopredpitation, Co-IP）88-89
• 1.10 SDS-PAGE鑒定免疫共沉淀收獲液89
• 1.11 質(zhì)譜鑒定SDS-PAGE中的目標(biāo)蛋白89
• 1.12 Western Blot定性驗證質(zhì)譜結(jié)果89-90
• 1.13 利用Transwell細胞培養(yǎng)皿進行單核細胞ADE模型-HuVEC共培養(yǎng)90-91
• 1.14 免疫熒光染色檢測HuVEC表面的補體膜攻擊復(fù)合物C5b-991
• 1.15 伊紅染色顯示與單核細胞ADE模型共培養(yǎng)后HuVEC細胞骨架改變91-92
• 2 結(jié)果92-100
• 2.1 流式細胞術(shù)鑒定磁珠陰性分選的單核細胞純度92
• 2.2 單核細胞最適培養(yǎng)條件92-94
• 2.3 利用人外周血單核細胞建立抗體依賴增強感染模型94-96
• 2.4 C3a、C5a、IL-10含量檢測96-97
• 2.5 利用單核細胞ADE模型進行免疫共沉淀97-98
• 2.6 目標(biāo)蛋白的質(zhì)譜鑒定98-99
• 2.7 Western Blot驗證質(zhì)譜鑒定結(jié)果99
• 2.8 免疫熒光染色檢測HuVEC表面的補體膜攻擊復(fù)合物C5b-999-100
• 2.9 伊紅染色檢測HuVEC的細胞骨架改變100
• 討論100-103
• 全文總結(jié)103-112
• 參考文獻112-119
• 附錄119-125
• 致謝125-126
• 個人簡歷126-129

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳澤燕;118例登革熱個案調(diào)查分析[J];廣東衛(wèi)生防疫;2001年01期

2 ;臺灣地區(qū)登革熱的流行情況與防治[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

3 謝敏,王彤,譚秀蓮,余濤,徐改鳳;登革熱147例臨床特點分析[J];嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志;2003年01期

4 陳如花,徐瑩,王玉;登革熱83例臨床分析[J];福建醫(yī)藥雜志;2005年05期

5 陳建軍;2001～2004年美國旅行引起的登革熱感染[J];疾病監(jiān)測;2005年09期

6 徐建榮;登革熱及其防治的研究進展[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2005年04期

7 袁榮寶,王海明;登革熱的研究進展[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

8 Domingues R.B.;Kuster G.W.;Onuki De Castro F.L. ;劉凱;;登革熱病毒感染患者的頭痛特征[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊);2006年10期

9 赫兢;趙敏;;登革熱防治研究進展[J];國際病毒學(xué)雜志;2006年06期

10 葉建杰;胡利明;褚邵杰;胡向前;;登革熱流行病學(xué)概況[J];中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2007年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 董紅軍;;登革熱防治研究進展[A];2005年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

2 洪文昕;張復(fù)春;陳燕清;王建;;廣州市三種血清型登革熱患者的臨床特點對比分析[A];第七次全國腎綜合征出血熱學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

3 鮑曉偉;黃勇;李乙江;洪雪花;張泉鵬;王意銀;杜強;王偉;李剛山;邱薇;鄭穎;張富強;范泉水;李作生;;登革熱病毒的實驗室診斷研究進展[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

4 丁壯;;登革熱研究進展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

5 蔣麗亞;;盧灣區(qū)2001～2002年危害登革熱傳入危險程度現(xiàn)狀監(jiān)測[A];上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)會第二屆學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

6 羅會明;何劍峰;梁文佳;鄭夔;劉禮平;;登革熱流行病學(xué)與控制[A];第七次全國腎綜合征出血熱學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 王彤;謝敏;譚秀蓮;吳海東;施旖旎;;2002年廣州市登革熱流行的臨床特征分析[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十次全國復(fù)蘇中毒學(xué)術(shù)論文交流會論文匯編[C];2004年

8 劉健毅;董紅軍;張姝;;兩種檢測方法在登革熱疫情中的應(yīng)用研究[A];2005年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

9 魏新榮;;傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)辨治登革熱[A];中國中醫(yī)藥學(xué)會建會20周年學(xué)術(shù)年會專輯(下)[C];1999年

10 張明江;陸永昌;張家祝;丁永健;陸永貴;;登革熱流行現(xiàn)狀及防治對策[A];全國EID研討班資料匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報駐伊斯蘭堡記者　 周戎;巴基斯坦研究抗擊登革熱[N];光明日報;2006年

2 記者 劉海英;抗體會助長登革熱病毒感染更多細胞[N];科技日報;2010年

3 記者 王昭;瑞士成功分離出登革熱病毒抗體[N];人民日報;2010年

4 記者 張奇鋒 通訊員 黃愛成 劉李云;中大將利用新方法防控登革熱[N];廣東科技報;2011年

5 劉國信;登革熱，又到流行季[N];21世紀(jì)藥店;2013年

6 戴欣 本報記者 羅朝淑;預(yù)防登革熱：防蚊控蚊是關(guān)鍵[N];科技日報;2014年

7 無錫市人民醫(yī)院主任藥師 陸基宗;出游謹防染上“登革熱”[N];中國醫(yī)藥報;2014年

8 記者 柴玉;發(fā)揮中醫(yī)藥防控登革熱優(yōu)勢[N];中國中醫(yī)藥報;2014年

9 中山大學(xué)藥學(xué)院新藥研究與開發(fā)中心常務(wù)副主任 秦衛(wèi)華;圍剿登革熱并非觸不可及[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

10 天津市衛(wèi)生防病中心 主任醫(yī)師 于長水;病人→←蚊媒：登革熱的惡性循環(huán)[N];健康報;2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 沈紀(jì)川;媒介和氣象因素對廣州登革熱流行的影響及其預(yù)測模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張浩;登革病毒全基因序列的時空特點和登革熱以及重癥登革的病原學(xué)診斷、臨床特點和預(yù)后預(yù)測分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 桑少偉;廣州登革熱溯源、預(yù)警模型及決策支持系統(tǒng)框架研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2015年

4 胡永新;LE-PolyICLC在小鼠感染模型抗登革熱Ⅱ型病毒的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 趙玉嬌;登革熱流行病學(xué)調(diào)查及重癥登革熱病理機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

6 黃新偉;登革熱病毒抗體依賴增強感染分子機制的體外模型研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

7 林立豐;新型登革熱傳播媒介監(jiān)測誘蚊誘卵器開發(fā)應(yīng)用研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何江;登革熱病毒分型及患者細胞因子mRNA水平研究[D];安徽理工大學(xué);2016年

2 鄭秀君;珠海市2007~2013年登革熱患者臨床特征與基因分型研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

3 張立安;新加坡登革熱綜合防控管理對廣州的啟示[D];吉林大學(xué);2016年

4 唐麗娟;登革熱中醫(yī)臨床實踐指南制定的關(guān)鍵技術(shù)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

5 王艷;基于中醫(yī)學(xué)因人制宜理論探討登革熱臨床特征[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 孔秀娟;2014年廣州登革熱的分子流行病學(xué)與中藥對其患者炎癥因子的調(diào)節(jié)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 劉嬌;中藥治療登革熱的臨床和實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

8 謝暉;云南中緬邊境孟連和瀾滄縣登革熱流行狀況調(diào)查[D];大理學(xué)院;2011年

9 易彬樘;地理信息系統(tǒng)及衛(wèi)星遙感圖像在廣東省登革熱監(jiān)測中的應(yīng)用[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

10 譚俊;云南省邊境地區(qū)西雙版納州關(guān)累口岸登革熱流行的潛在風(fēng)險因素調(diào)查[D];大理學(xué)院;2012年

，

本文編號：894434