本文關(guān)鍵詞：家蠅抗性等位基因檢測與頻率分布

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【摘要】：家蠅(Musca domestica)是一種在全世界各地分布極為廣泛的重要的公共衛(wèi)生害蟲,隨著化學(xué)殺蟲劑的廣泛使用,越來越多的家蠅種群產(chǎn)生了抗藥性。家蠅是我國病媒生物控制的重點,調(diào)查表明中國眾多省份的家蠅已對不同的殺蟲劑產(chǎn)生了一定程度的抗性,這已經(jīng)成為對由家蠅傳播的疾病控制的一個主要障礙。由于有機磷類(OP)和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥具有對哺乳動物低毒和對家蠅迅速擊倒的特點而得以廣泛應(yīng)用,致使家蠅的抗藥性問題已成為人們關(guān)注的熱點。因此,開展家蠅抗藥性監(jiān)測對于指導(dǎo)合理使用殺蟲劑及家蠅綜合治理意義重大。本文通過室內(nèi)生物測定,在探明當前中國各地家蠅對有機磷類和菊酯類殺蟲劑的抗性現(xiàn)狀的基礎(chǔ)上,利用分子生物學(xué)技術(shù)從基因水平對家蠅kdr抗性特性進行研究,進一步揭示家蠅的擊倒抗性機制(kdr)以及建立和改進家蠅抗性的分子檢測方法,旨在為有效快速檢測害蟲抗藥性的分子檢測方法,延長農(nóng)藥的使用壽命提供理論依據(jù)。結(jié)果如下： 1.2010年測定了上海、北京、廣東、吉林、山東、天津等多個省份的家蠅對馬拉硫磷、二嗪磷、氯菊酯、溴氰菊酯的敏感性。結(jié)果表明,家蠅對馬拉硫磷的抗性己達較高水平�？剐宰罡叩臑楸本┨焱ㄔ菲废�(TTY), LD50值達280.81(219.85-377.51)μg/頭,抗性倍數(shù)達305倍。所有被檢測的品系對二嗪磷均未產(chǎn)生明顯抗性,ZYH品系對氯菊酯與溴氰菊酯存在交互抗性。 2.用馬拉硫磷、二嗪磷、氯菊酯、溴氰菊酯等4種殺蟲劑對ZYH品系進行篩選,得到ZYH-M、ZYH-Di、ZYH-P和ZYH-De等4個不同的品系。經(jīng)過多代篩選后,除ZYH-Di品系外,其它3個品系抗藥性皆明顯上升。 3.用等位基因特異性擴增(AS-PCR)方法擴增出500bp長片段,并用酶切法檢測ZYH品系F0代的CYP6D1V1基因型,得到敏感純合(SS)、雜合(RS)和抗性純合RR等3種基因型,其頻率分別為90.43%、7.45%和2.18%。 4.設(shè)計合成特異引物并建立等位基因特異性擴增方法(AS-PCR法),成功檢測出ZYH品系中存在6種基因型,分別為L/L、L/F、F/F、L/H、H/H、F/H基因型。
【關(guān)鍵詞】：家蠅 擊倒抗性 等位基因特異性擴增 基因型
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R184;S852.743
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章 文獻綜述7-16
• 1.1 化學(xué)農(nóng)藥的應(yīng)用7-8
• 1.2 昆蟲抗藥性的產(chǎn)生8
• 1.3 家蠅抗藥性8-9
• 1.4 家蠅抗性形成機制9-13
• 1.4.1 行為抗性9
• 1.4.2 生理抗性9
• 1.4.3 代謝抗性9-11
• 1.4.4 靶標抗性11-13
• 1.5 抗藥性的檢測技術(shù)13-15
• 1.5.1 生物測定法13-14
• 1.5.2 區(qū)分劑量法14
• 1.5.3 生物化學(xué)法14
• 1.5.4 分子檢測法14-15
• 1.6 本研究的目的及意義15-16
• 第二章 中國各地家蠅抗藥性調(diào)查16-25
• 2.1 材料與方法16-18
• 2.1.1 主要儀器16
• 2.1.2 供試試劑16
• 2.1.3 供試蟲源及飼養(yǎng)條件16-17
• 2.1.4 實驗方法17-18
• 2.2 結(jié)果與分析18-23
• 2.2.1 馬拉硫磷的生物測定18-20
• 2.2.2 二嗪磷的生物測定20-21
• 2.2.3 氯菊酯的生物測定21
• 2.2.4 溴氰菊酯的生物測定結(jié)果及分析21-22
• 2.2.5 PBO增效劑對澳氰菊酯增效結(jié)果22-23
• 2.3 討論與結(jié)論23-25
• 第三章 家蠅品系的建立及篩選25-28
• 3.1 材料與方法25
• 3.1.1 主要儀器25
• 3.1.2 供試試劑25
• 3.1.3 實驗方法25
• 3.2 結(jié)果與分析25-27
• 3.3 討論與結(jié)論27-28
• 第四章 家蠅抗藥性等位基因檢測與頻率分布28-55
• 4.1 實驗材料28-30
• 4.1.1 主要儀器28
• 4.1.2 供試試劑28-29
• 4.1.3 培養(yǎng)基及各種溶液的配制29-30
• 4.2 實驗方法30-39
• 4.2.1 家蠅基因組DNA的提取30-31
• 4.2.2 家蠅CYP6D1基因擴增及PCR產(chǎn)物純化31-32
• 4.2.3 連接反應(yīng)32
• 4.2.4 轉(zhuǎn)化反應(yīng)32-34
• 4.2.5 家蠅CYP6D1v1抗性等位基因型檢測34-35
• 4.2.6 家蠅Kdr抗性等位基因突變位點檢測35-36
• 4.2.7 家蠅鈉離子通道Kdr突變位點檢測36-39
• 4.3 結(jié)果與分析39-53
• 4.3.1 家蠅基因組電泳圖39-40
• 4.3.2 家蠅CYP6D1基因PCR擴增40-42
• 4.3.3 家蠅CYP6D1v1抗性等位基因檢測結(jié)果42-44
• 4.3.4 家蠅Kdr抗性等位基因突變位點檢測PCR條件的優(yōu)化44-49
• 4.3.5 家蠅kdr抗性等位基因克隆測序及序列分析49-53
• 4.4 討論與結(jié)論53-55
• 參考文獻55-58
• 致謝58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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4 姚洪渭,葉恭銀,程家安;害蟲抗藥性適合度與內(nèi)分泌調(diào)控研究進展[J];昆蟲知識;2002年03期

5 俞曉平,呂仲賢,陳建明,徐紅星,鄭許松,陳列忠,張玨峰,申屠旭平;我國植物源農(nóng)藥的研究進展[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報;2005年01期

6 杜克久;農(nóng)藥與環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展[J];自然辯證法通訊;1999年03期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王晨;家蠅的抗性選育及溴氰菊酯抗性品系適合度的相關(guān)研究[D];首都師范大學(xué);2009年

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本文編號：849370