發(fā)布時(shí)間：2017-07-28 15:04

  本文關(guān)鍵詞：昆明地區(qū)無(wú)菌性腦膜炎埃可病毒9型的分子流行病學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 無(wú)菌性腦膜炎 �？刹《�9型 分子流行病學(xué) VP1基因 序列分析

【摘要】：無(wú)菌性腦膜炎是兒童常見(jiàn)的重大疾病,腸道病毒是引起該疾病的重要病因。�？刹《�9型(ECHO9)是從無(wú)菌性腦炎患者檢測(cè)到的最常見(jiàn)的腸道病毒型別,常以散發(fā)或流行的形式出現(xiàn)。 本研究目的是對(duì)云南昆明地區(qū)5歲以下住院無(wú)菌性腦膜炎兒童進(jìn)行ECH09分子流行病學(xué)調(diào)查。收集臨床病例資料和采集糞便標(biāo)本,通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)、分子生物學(xué)和細(xì)胞培養(yǎng)等方法進(jìn)行研究。腸道病毒型別(基因型)以及抗原變異主要由腸道病毒的VP1基因決定,因此對(duì)VP1基因分析,可確定病原體為ECHO9病毒以及其抗原變異情況。該研究對(duì)于無(wú)菌性腦膜的預(yù)防、控制和研究均具有重要意義。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)2009-2010年收集到的510份標(biāo)本中提取病毒RNA,采用RT-PCR和測(cè)序的方法分析VP1基因,借助Omiga, Mega5.05等軟件進(jìn)行結(jié)果分析以及利用SPSS17.0軟件包對(duì)臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。病毒分離嚴(yán)格按照WHO《脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》規(guī)定的方法進(jìn)行。 臨床特征分析結(jié)果表明：感染ECHO9的患者與未感染ECHO9的患者在年齡、性別的分布及癥狀與檢查沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示臨床特征分析不能直接鑒別是否為ECH09感染。 序列分析結(jié)果表明：(1)ECHO9陽(yáng)性檢出率達(dá)到了8.82%,但相較于原型株(DM株),本次收集的樣品的部分VP1區(qū)出現(xiàn)了核苷酸序列的變異,進(jìn)化樹(shù)顯示A236,A238,F50與2000年云南株形成一支,其余各樣品形成另外一支。(2)通過(guò)對(duì)BC-環(huán)的氨基酸比較發(fā)現(xiàn)：與ECHO9原型株(DM株)相比,除USA-10606, ES23-Bb-ED-07, France258066-05, IS02-ns-EW-04, GB24-Br-EA-08, E9-TS-1482-Kras-RU-2008,183-00-YN-CHN-2000,A271之外均發(fā)生了替代。 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果表明：將45份鑒定為ECHO9的標(biāo)本經(jīng)過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)后分離出1株ECHO9病毒株。 綜上所述,患兒的臨床表現(xiàn)與是否為ECHO9感染無(wú)明顯相關(guān)性；ECHO9病毒株存在明顯的地域分布性,而且同一地區(qū)也存在差異,表明可能存在不同的傳播途徑；序列分析結(jié)果表明ECHO9出現(xiàn)一定變異；對(duì)于病毒型別鑒定,PCR的靈敏度高于細(xì)胞分離。這些變化是否會(huì)影響到其免疫原性和其他功能,有待進(jìn)一步研究來(lái)確定。
【關(guān)鍵詞】：無(wú)菌性腦膜炎 �？刹《�9型 分子流行病學(xué) VP1基因 序列分析
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R742.9;R181.3
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 英文縮寫(xiě)表11-12
• 第一部分 前言12-20
• 1.1 概述12-17
• 1.1.1 無(wú)菌性腦膜炎簡(jiǎn)介12
• 1.1.2 腸道病毒簡(jiǎn)介12-13
• 1.1.3 ECHO9的生物學(xué)特性13-14
• 1.1.4 ECHO9的流行病學(xué)14-15
• 1.1.5 ECHO9實(shí)驗(yàn)室診斷15-17
• 1.2 立題分析17-18
• 1.2.1 立題背景17
• 1.2.2 立題目的17
• 1.2.3 立題意義17-18
• 1.3 試驗(yàn)內(nèi)容設(shè)計(jì)18-20
• 1.3.1 試驗(yàn)內(nèi)容18-19
• 1.3.2 技術(shù)路線19-20
• 第二部分 ECHO9病毒VP1區(qū)部分核苷酸序列分析20-43
• 2.1 引言20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 2.2.1 標(biāo)本20-21
• 2.2.2 標(biāo)本收集、儲(chǔ)存21
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑21-22
• 2.2.4 引物設(shè)計(jì)22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 2.3.1 糞便標(biāo)本的處理22
• 2.3.2 提取病毒RNA22-23
• 2.3.3 巢式PCR23-24
• 2.3.4 結(jié)果檢測(cè)24
• 2.3.5 核苷酸序列測(cè)定24
• 2.3.6 序列分析24-25
• 2.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25
• 2.4 結(jié)果與分析25-40
• 2.4.1 一般情況25
• 2.4.2 臨床癥狀25-26
• 2.4.3 核苷酸序列測(cè)定結(jié)果及分析26-40
• 2.5 討論40-41
• 2.6 結(jié)論41-43
• 第三部分 病毒分離43-48
• 3.1 引言43
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 3.2.1 病毒株43
• 3.2.2 細(xì)胞株43
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)所需儀器及試劑43-44
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 3.3.1 試劑配制(見(jiàn)表3.1)44
• 3.3.2 接種和觀察(病毒分離)44-45
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-47
• 3.5 討論47
• 3.6 結(jié)論47-48
• 第四部分 結(jié)論與展望48-50
• 4.1 結(jié)論48
• 4.2 創(chuàng)新點(diǎn)48-49
• 4.3 展望49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 文獻(xiàn)綜述：ECH09的研究進(jìn)展55-64
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：584613