本文關鍵詞：肺炎克雷伯菌醫(yī)院血流感染暴發(fā)的分子流行病學研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 醫(yī)院感染暴發(fā)即在醫(yī)療機構或其科室中,短時間內發(fā)生3例以上同種同源醫(yī)院感染事件的現象。醫(yī)院感染暴發(fā),病死率高,易引起公眾的普遍關注。為了有效地控制感染的流行,必須迅速查明感染源,目前公認的查找感染源的方法是分離病原菌并對其同源性進行分析。本研究選取一起近期醫(yī)院血流感染暴發(fā)事件分離的肺炎克雷伯菌株,應用抗生素藥敏試驗,脈沖場凝膠電泳和多位點序列分析的方法對病原體進行同源性分型,為及時有效的控制感染的流行提供依據。 方法 1、菌株來源和藥敏試驗：試驗菌株分離自天津市某醫(yī)院外科病房2010年7月16日至7月28日5名醫(yī)院血流感染患者的8株肺炎克雷伯菌臨床株(Kpl-Kp8)；對照菌株分離自同期天津市另一家醫(yī)院感染科病房的6株肺炎克雷伯菌臨床株(Kp9-Kp13)。采用瓊脂紙片擴散法(K-B法)和微量肉湯稀釋法(MICs)檢測肺炎克雷伯菌臨床株對11種常用抗菌藥物(氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維酸、美羅培能、哌拉西林、復方磺胺甲惡唑、氨曲南)的耐藥性。 2、脈沖場凝膠電泳(PFGE):提取肺炎克雷伯菌全基因組DNA,經限制性內切酶Xbal酶解后進行肺炎克雷伯菌全基因組DNA的脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析。 3、多位點序列分析(MLST):從試驗株中選取菌株Kp1及另2株Kp4,Kp5;從對照株中選取2株Kp9和K13,共5株肺炎克雷伯菌臨床株,分別擴增其7個管家基因(rpoB,gapA,mdh,pgi,phoEinfB,tonB)的核心片段(318bp-501bp),并進行序列分析,將測序結果提交國際數據庫網站http://www.mlst.net,獲得菌株的ST型。 結果 1、藥敏試驗：8株試驗菌株對11種抗菌藥物的藥敏結果顯示：菌株Kp1對氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、阿莫西林/克拉維酸耐藥,對美羅培能、哌拉西林、復方磺胺甲惡唑、氨曲南、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松敏感；菌株Kp2等其他7株肺炎克雷伯菌臨床株的抗生素藥敏譜完全相同,且均為多重耐藥菌,即對氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松耐藥,對阿莫西林/克拉維酸、美羅培能、哌拉西林、復方磺胺甲惡唑、氨曲南敏感。6株對照菌株中：菌株Kp14對11種抗菌藥物均敏感；菌株Kp9和Kp12對哌拉西林、氨芐西林、頭孢嘩林、慶大霉素、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維酸耐藥,對美羅培能、復方磺胺甲惡嘩、氨曲南敏感；其它3株菌的藥敏譜不盡相同。 2、PFGE結果：8株試驗菌株中,共分出2型,菌株Kp2-Kp8共7株肺炎克雷伯菌臨床株的PFGE譜型一致,即均具有11條電泳條帶,且相應條帶大小相同,為PFGE Ⅱ型；菌株Kp1具有12條電泳條帶,與Kp2等其它7株有7條條帶以上的差異,為PFGE I型。6株對照菌株共分出6型,其電泳條帶數9-12條不等,均具有7條以上條帶的差異。 3、MLST的結果：3株試驗菌株中,菌株Kp4,Kp5具有一致的MLST型,即ST133(12,1,1,2,5,1,36),與菌株Kp1(10,1,1,1,9,4,12)有5個基因座不同,為不相關菌株。2株對照菌株中,菌株Kp13的ST型為ST86(9,4,2,1,1,1,27)與菌株Kp9(1,1,1,1,1,1,36)具有6個基因座的不同,為不相關菌株。這一研究結果與PFGE的研究結果一致。菌株Kpl與菌株Kp9均在MLST數據庫中未查詢到相應的ST型。菌株Kp1的ST型與ST23, ST548, ST793, ST808最為接近,菌株Kp9的ST型與ST15, ST132, ST326, ST655, ST709, ST748最為接近。 結論 1、經抗生素藥敏試驗、脈沖場凝膠電泳和多位點序列分析的分型研究,可以判定天津市某醫(yī)院外科病房2010年7月16日至7月28日手術后發(fā)生的5例血流感染患者為肺炎克雷伯菌醫(yī)院血流感染暴發(fā)。分離自患者A的痰和血液中的肺炎克雷伯菌(Kp2,Kp3,Kp6)與分離自患者B(Kp4),C(Kp5),D(Kp7),E(Kp8)4名患者血液中的肺炎克雷伯菌為同一克隆株,根據5名患者感染的先后順序,可能患者A為此次醫(yī)院感染暴發(fā)的感染源,通過交互感染傳給B,C,D,E四名患者。分離自患者A腹腔引流液的菌株Kp1與分離自其痰(Kp2)和血液中(Kp3,Kp6)的肺炎克雷伯菌不具有同源性。菌株Kp6可能是患者A的感染未治愈或為治愈后的二次感染。 2、抗生素藥敏譜分型對初步判斷醫(yī)院血流感染暴發(fā)有一定價值,尤其適合于基層醫(yī)院,但精確性欠缺。 3、脈沖場凝膠電泳分型與多位點序列分析等分子生物學分型方法,均顯示了一致的分型結果,對醫(yī)院感染暴發(fā)的調查及追蹤溯源有重大價值。 PFGE分型結果可靠,能較好反映流行病學相關性。MLST分型結果易于標準化,可進行不同實驗室間的比較,且實驗過程較簡便,更具推廣價值。
【關鍵詞】：醫(yī)院感染暴發(fā) 血流感染 肺炎克雷伯菌 脈沖場凝膠電泳(PFGE) 多位點序列分析(MLST) 基因分型 表型分型
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R181.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文縮略詞表13-15
• 前言15-19
• 研究現狀、成果15-17
• 研究目的、方法17-19
• 一、肺炎克雷伯菌感染菌株的抗生素藥敏譜分析19-27
• 1.1 對象和方法19-23
• 1.1.1 對象19-20
• 1.1.2 方法20-23
• 1.2 結果23-25
• 1.2.1 藥物敏感試驗23-24
• 1.2.2 藥物敏感性分析24-25
• 1.3 討論25-27
• 二、肺炎克雷伯菌感染菌株的脈沖場凝膠電泳(PFGE)分型研究27-33
• 2.1 對象和方法27-30
• 1.1.1 對象27-28
• 1.1.2 方法28-30
• 2.2 結果30-31
• 2.3 討論31-33
• 三、肺炎克雷伯菌感染菌株的多位點序列分析33-45
• 3.1 對象和方法33-36
• 3.1.1 對象33-34
• 3.1.2 方法34-36
• 3.2 結果36-43
• 3.2.1 MLST結果圖36-38
• 3.2.2 MLST結果分析38-43
• 3.3 討論43-45
• 小結45-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-53
• 綜述53-62
• 參考文獻59-62
• 致謝62

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