本文關鍵詞：大腸桿菌O157的分子流行病學調(diào)查和毒力因子研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：大腸桿菌O157：H7是腸出血性大腸桿菌(EHEC)的主要血清型,是一種重要的食源性致病菌,人類感染后會引起輕度腹瀉、出血性腸炎(HC)、溶血性尿毒綜合癥(HUS)和血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)等病癥,嚴重時會導致死亡。自從1982年首次在美國發(fā)現(xiàn)該菌以來,國內(nèi)外多個國家和省市都有過EHEC O157:H7流行和爆發(fā),目前已成為世界公共衛(wèi)生組織和食品安全組織關注的熱點問題。為了更加清楚的了解上海及周邊地區(qū)EHEC O157:H7的流行情況,也為了給本實驗室在研究EHEC O157:H7方面建立平臺,為今后的應用研究和致病機理研究奠定基礎,本人在碩士期間做了如下研究： 1為了了解上海及周邊地區(qū)EHEC O157的流行情況,2009.1-2011.12期間采集上海及周邊地區(qū)豬場、牛場、雞場的糞便樣品以及菜市場和超級市場的肉類食品等,采用山梨醇麥康凱(SMAC)平板分離法和PCR鑒定其特異性基因rfbE的方法來分離和鑒定,同時結(jié)合血清凝集法和測序法進一步確定菌株的正確性；然后利用PCR擴增法對收集到的菌株進行毒力基因檢測,利用結(jié)晶紫染色法測定它們形成生物被膜的能力,最后還運用多位點序列分析法(MLST)和隨機引物多態(tài)性分析法(RAPD)對菌株進行分子分型,運用三重PCR法對其進行系統(tǒng)進化分群,分析它們的親緣關系。 2010.7-2011.12期間分離到10株EHEC O157,綜合本實驗室前期收集并保存的菌株共22株,PCR法檢測H7鞭毛基因fliC發(fā)現(xiàn),其中有12株為EHEC O157:H7,而其余10株為EHEC O157:NM;22株菌株中四種毒力基因都含有的菌株有6株,含有其中三種毒力基因的菌株有2株,含有其中兩種毒力基因的菌株有5株,只含其中一種毒力基因的菌株有7株,而不含毒力基因的菌株有2株；22株EHEC O157中只有EHEC26、EHEC27和EHEC40有較強的生物被膜形成能力；而EHEC001和EHEC028形成生物被膜能力中等；EHEC002、EHEC008和EHEC030僅有微弱的形成生物被膜能力；而其余14株菌都不能形成生物被膜。 22株EHEC0157經(jīng)RAPD分型后分為五類,Ⅰ類菌株包括EHEC036、037、038、039、041和042,Ⅱ類菌株包括EHEC026、027、040和044,Ⅲ類菌株包括EHEC001、025、030、043和045,Ⅳ類菌株包括EHEC002、005、015、046和047,Ⅴ類菌株包括EHEC008和028；對22株EHEC0157進行系統(tǒng)進化分群發(fā)現(xiàn),它們屬于D群的菌株比較多,占59.1%,A、B2、B1群依次減少,分別占22.72%、13.64%和4.55%。22株EHECO157經(jīng)過MLST法分型后,得到13個型別,以ST11、ST88和ST641這三個型別為主,其余型別菌株較少,本次研究中還發(fā)現(xiàn)了三株新的菌株,未在數(shù)據(jù)庫中找到與之相同的型別。 2為進一步研究EHEC O157的更為簡便的檢測方法和應用,本文采用基因的原核克隆表達技術,將其特異性基因rfbE成功的克隆表達并純化出該基因編碼的蛋白。 3為了研究Z1965基因是否影響EHEC O157的毒力和功能,本文運用Red同源重組系統(tǒng),成功的構建了EHEC O157:H7的Z1965基因缺失株,為進一步的研究工作奠定了堅實的基礎。
【關鍵詞】：大腸桿菌O157 分子流行病學調(diào)查 MLST rfbE Z1965
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R181.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 前言10-19
• 1.1 大腸桿菌O157：H7的主要毒力因子10-13
• 1.2 大腸桿菌O157：H7的檢測方法研究現(xiàn)狀13-14
• 1.3 大腸桿菌O157：H7分子分型方法研究現(xiàn)狀14-16
• 1.4 RED同源重組系統(tǒng)的研究進展16-18
• 1.5 研究目的與意義18
• 1.6 研究內(nèi)容和創(chuàng)新點18-19
• 第二章 腸出血性大腸桿菌O157菌株的分離鑒定19-24
• 引言19
• 2.1 材料和方法19-20
• 2.2 結(jié)果與分析20-22
• 2.3 討論22-23
• 2.4 小結(jié)23-24
• 第三章 大腸桿菌0157分子流行病學調(diào)查24-37
• 引言24
• 3.1 材料和方法24-29
• 3.2 結(jié)果與分析29-34
• 3.3 討論34-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 第四章 大腸桿菌O157的基因RFBE的克隆、表達及蛋白純化37-43
• 引言37
• 4.1 材料和方法37-40
• 4.2 結(jié)果與分析40-42
• 4.3 討論42
• 4.4 小結(jié)42-43
• 第五章 大腸桿菌O157的Z1965基因缺失株的構建43-47
• 引言43
• 5.1 材料與方法43-45
• 5.2 結(jié)果與分析45-46
• 5.3 討論46
• 5.4 小結(jié)46-47
• 第六章 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 附錄52-54
• 致謝54-55
• 作者簡介55-56
• 附件56

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