研究目的:建立可以同時(shí)、快速檢測急性胃腸炎患者糞便中諾如病毒（Norovirus,NOV）、A組輪狀病毒（Rotavirus,RV）、札如病毒（Sapovirus,SaV）、人腺病毒（Huma n Adenovirus,HAdV）、人星狀病毒（Human Astrovirus,HAstV）的多重 qRT-PC R的技術(shù)。探討2018年11至2019年11月鎮(zhèn)江部分地區(qū)主要急性胃腸炎病毒的流行情況,急性病毒性胃腸炎患者臨床特征以及當(dāng)?shù)豊OV GⅡ基因型別分布特征,探討流行的優(yōu)勢毒株及進(jìn)化。研究方法:1、利用NOV GⅠ和GⅡ、A組RV的RNA片段構(gòu)建重組質(zhì)粒pACYC184-NOV-GⅠ、pACYC184-NOV-GⅡ 和 pACYC184-RV。合成質(zhì)粒 pBluescript Ⅱ SK-SaV、pBluescr i-pt Ⅱ SK-HAstV 和 pBluescriptⅡ SK-HAdV。制備上述病毒的標(biāo)準(zhǔn)品。2、以制備的標(biāo)準(zhǔn)品為模板建立二步法qRT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,評價(jià)其各體系的靈敏度、特異性及重復(fù)性。3、在qRT-PCR的基礎(chǔ)上將上述病毒引物和探針分成三組,每組含兩種病毒引物和探... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NOV的電鏡觀察圖和模式圖：A.用掃描電鏡觀察到的糞便中NOV;B.NOV的模式圖

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文3條，故名輪狀病毒（RV）（圖1.3B）[6]。RV基因組由11個(gè)分節(jié)段的dsRNA組成，核酸長約為18.5kb�，F(xiàn)在的研究表明：A組輪狀病毒基因組的每一個(gè)節(jié)段包含一個(gè)ORF第1～4、第6和第9基因節(jié)段分別拷貝RV結(jié)構(gòu)蛋白VPl～VP4、VP6和VP7，第5、第7～8和第10～11基因節(jié)段分別拷貝非結(jié)構(gòu)蛋白NSPl-NSP6[7]。圖1.3RV的電鏡觀察圖和模式圖：A.用掃描電鏡觀察到的糞便中RV；B.RV的模式圖Fig1.3ElectronMicroscopicObservationandIdeographofRV:A.RVinfaecesobservedb-yElectronMicroscopic;B.IdeographofRV根據(jù)VP6區(qū)序列的不同，RV可分為A-G共7個(gè)組，僅A、B和C組可感染人類。A組RV是引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體，年長兒童及成人隱性感染。而B組RV主要引起成人腹瀉。C組輪狀病毒感染多為散發(fā)[6]。RV的中和抗原主要存在在VP4和VP7兩個(gè)外殼結(jié)構(gòu)蛋白上。由于編碼VP7及VP4基因片段存在很大變異性。目前根據(jù)A組RV的G糖蛋白VP7區(qū)序列不同將其分為14個(gè)G血清型和27個(gè)G基因型，其中G1，G2，G3，G4和G9血清型是比較常見的流行株[8]。依據(jù)A組RV的P蛋白酶敏感蛋白VP4區(qū)序列不同，可進(jìn)一步分為15個(gè)P血清型和37個(gè)P基因型，常見的基因型為P4、P6、P8、P9和P10，引起嬰兒腹瀉的多為P8和P4型[8]。1.1.3AstV病原學(xué)特征1975年，Appleton和Higgins首次在急性胃腸炎的兒童糞便中發(fā)現(xiàn)了AstV。同年，Madeley和Cosgrove在電鏡下觀察到上述病毒顆粒表面有5或6個(gè)星尖狀的突起，由此命名為星狀病毒（AstV）（圖1.4）[9]。AstV是+ssRNA，直徑

急性胃腸炎病毒多重qRT-PCR方法的建立及其在鎮(zhèn)江部分地區(qū)的流行病學(xué)研究4約為28～41nm，基因組因長約6.2～7.8kb，主要包含：3個(gè)ORF1a、ORF1b和ORF2和一個(gè)多聚腺苷酸尾。其中，ORF1a和ORF1b區(qū)基因主要編碼非結(jié)構(gòu)蛋白。編碼RdRp的ORF1b是最保守的區(qū)域。主要編碼衣殼蛋白ORF2區(qū)域變異最大[10]，可分為四個(gè)亞區(qū)：I-IV區(qū)。I區(qū)（1～415個(gè)氨基酸）在各血清型之間是高度保守的；II～I(xiàn)II區(qū)（416～771個(gè)氨基酸）是變異性較高的。此外，ORF1b和ORF2的重疊區(qū)是核苷酸置換和片段重組的高發(fā)區(qū)[11]。圖1.4AstV的模式圖Fig1.4IdeographofRV1.1.4SaV病原學(xué)特征SaV最早發(fā)現(xiàn)于日本扎幌市的一次暴發(fā)性腹瀉，電鏡表現(xiàn)具有典型的杯狀結(jié)構(gòu)，與NOV同屬于人杯狀病毒科（humancalicivirus，HuCV），命名為札幌病毒（SapporoVirus，SV）[12]。2002年國際病毒分類委員會(huì)將這一類病毒重命名為札如病毒（Sapovirus，SaV）。SaV在電鏡下有典型的杯狀結(jié)構(gòu)[13]，為+ssRNA，基因組大小為7.1-7.7kb，主要包含：ORF1和ORF2。其中，ORF1編碼RdRp、主要衣殼蛋白（VP1）等7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白；ORF2編碼小分子衣殼蛋白VP2（圖1.5）[13]。某些SaV基因序列還存在ORF3，該區(qū)域與ORF1重疊，編碼未知的功能蛋白。根據(jù)VP1區(qū)序列不同，將SaV分為5個(gè)GI-GV基因組，僅GI、GII、GIV和GV可感染人類。GI、GIV和GV有三個(gè)ORF，而GII和GIII只有兩個(gè)主要的ORF[14]。


本文編號：3492151