目的:汽化過氧化氫（VHP）是一種高效、無毒、無殘留的化學(xué)消毒劑,隨著越來越多的人對綠色消毒劑的關(guān)注,VHP消毒凈化系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)院、微生物實驗室、制藥行業(yè)、食品制造生產(chǎn)等領(lǐng)域。對消毒效果的快速、準(zhǔn)確評價在提高生物安全水平,降低病原微生物污染的風(fēng)險,控制微生物污染等方面都具有重要意義。殺滅率是評價消毒效果的唯一指標(biāo),當(dāng)前許多可用實現(xiàn)活/死菌區(qū)分鑒定的方法都可用于對消毒效果的定量評價,包括平板培養(yǎng)法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、顯微熒光計數(shù)法、流式細(xì)胞檢測法等。其中平板培養(yǎng)計數(shù)法是檢測消毒效率的標(biāo)準(zhǔn)方法,該方法通過測量生物指示劑中的活菌含量實現(xiàn)對消毒效果的評價,對實驗器材的要求低、檢測成本低,然而檢測過程耗時長,不適用于對消毒效果的即現(xiàn)場評價;PCR檢測法技術(shù)成熟、靈敏度高、特異性強(qiáng),但是對檢測環(huán)境要求高,儀器價格昂貴;顯微熒光計數(shù)法可以直觀地給出檢測結(jié)果,但是操作繁瑣,需要專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作;流式細(xì)胞檢測法敏感性高、分析全面,然而檢測通量較小,且檢出限一般在10³～10⁴cfu/ml。因此,建立一種快速、準(zhǔn)確的消毒效果評價方法對指導(dǎo)消毒工... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

SYTO9、AO、DAPI及PI的熒光光譜圖

軍事科學(xué)院碩士學(xué)位論文第9頁1.1.2結(jié)果與分析1.1.2.1結(jié)果不同熒光染料對活菌和死菌的染色效果：如圖1.2所示為四種核酸染料對枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC9372）活細(xì)胞和死細(xì)胞的染色結(jié)果。結(jié)果顯示，SYTO9、AO和DAPI均可對死菌和活菌細(xì)胞無差別染色，而PI只能對死菌染色。然而，AO和DAPI染色后細(xì)胞的熒光強(qiáng)度明顯弱于SYTO9的染色結(jié)果，而且相同濃度的菌懸液SYTO9對其的染色效果要優(yōu)于AO和DAPI，具體表現(xiàn)為熒光信號多且發(fā)出區(qū)別于背景的明亮的綠色熒光。PI染色的活菌樣本在熒光顯微鏡下視野內(nèi)無明顯可見熒光信號，但是PI染色的死菌在綠色激光激發(fā)下發(fā)出明亮的紅色熒光。因此，研究初步選取SYTO9和PI作為死/活菌雙重染色的熒光染料。圖1.2枯草芽孢桿菌黑色變種的熒光染色結(jié)果。（a-d）分別為SYTO9、AO、DAPI和PI對活菌的染色結(jié)果；（e-h）分別為SYTO9、AO、DAPI和PI對死菌的染色結(jié)果。熒光染料對不同細(xì)菌的染色效果：為驗證SYTO9和PI對不同菌種細(xì)菌細(xì)胞的染色效果，我們比較了SYTO9和PI對枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC9372），白色葡萄球菌（ATCC8032）和大腸桿菌（ATCC8099）的染色效果，如圖1.3所示。熒光顯微鏡檢測結(jié)果顯示，SYTO9和PI對三種細(xì)菌的死/活菌染色效果良好，無顯著差別，說明SYTO9和PI具有良好的穩(wěn)定性，可對不同菌種進(jìn)行無差別熒光標(biāo)記。

軍事科學(xué)院碩士學(xué)位論文第10頁圖1.3SYTO9和PI對不同細(xì)菌的熒光染色結(jié)果。（a-c）分別為SYTO9對枯草芽孢桿菌黑色變種，白色葡萄球菌和大腸桿菌活菌樣本的染色結(jié)果；（d-f）分別為PI對枯草芽孢桿菌黑色變種，白色葡萄球菌和大腸桿菌死菌樣本的染色結(jié)果。混合染料對死/活菌混合樣本染色效果：由于不同熒光信號或來自染料的干擾，雙重?zé)晒馊旧c單一的熒光染色在實際應(yīng)用中可能會存在差異。為獲得最佳的混合染色效果，需要根據(jù)實際需求調(diào)整熒光染料的添加量，如圖1.4所示為不同比例混合的SYTO9和PI的混合染料對死/活菌樣本的染色結(jié)果，SYTO9和PI的光譜分離度好，聯(lián)合使用能明顯區(qū)分被測樣本中的活菌和死菌細(xì)胞。實驗結(jié)果顯示，SYTO9染色后發(fā)出的高亮度綠色熒光會在抑制PI染色后發(fā)出的紅色熒光，因此在進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧珪r需要補(bǔ)償PI的劑量，當(dāng)SYTO9:PI=3:4時對死/活菌混合樣本的染色效果最佳。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于裸磁珠的金黃色葡萄球菌富集優(yōu)化[J]. 吳俊,陸利霞,劉元建,林麗軍,熊曉輝.  現(xiàn)代食品科技. 2019(02)
[2]基于反轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測沙門氏菌[J]. 梁玉林,劉秀,周振森,周鵬飛,尹建軍.  微生物學(xué)通報. 2018(10)
[3]醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)療器械消毒滅菌監(jiān)測結(jié)果分析[J]. 帖金鳳,韓杰,武雪冰,張哲,魏秋華.  中國消毒學(xué)雜志. 2018(05)
[4]食品中致病性微生物污染狀況分析以及危險性評估的應(yīng)用[J]. 王晶暉.  現(xiàn)代食品. 2018(03)
[5]Applicability of LIVE/DEAD BacLight stain with glutaraldehyde fixation for the measurement of bacterial abundance and viability in rainwater[J]. Wei Hu,Kotaro Murata,Daizhou Zhang.  Journal of Environmental Sciences. 2017(01)
[6]采用ATP生物發(fā)光法分析6株常見細(xì)菌ATP含量差異[J]. 田雨,侯玉柱,柯潤輝,尹建軍,宋全厚.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2015(01)
[7]醫(yī)院消毒滅菌效果的監(jiān)測與分析[J]. 胡瑋,應(yīng)瑤蓉,占利.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2014(12)
[8]常用消毒滅菌法效果評價[J]. 李晶.  北方藥學(xué). 2014(02)
[9]食源性病原微生物快速檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J]. 陳愛亮.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報. 2014(01)
[10]致病微生物應(yīng)對環(huán)境脅迫形成的VBNC狀態(tài)及其對風(fēng)險評估的潛在影響[J]. 高鶴,趙勇,劉承初.  微生物學(xué)通報. 2014(01)

碩士論文
[1]ATP生物熒光法對消毒效果快速評價方法研究[D]. 陸燁.浙江大學(xué) 2016
[2]二維激光振鏡掃描控制系統(tǒng)設(shè)計[D]. 徐亮亮.長春理工大學(xué) 2012
[3]PMA-qPCR選擇性檢測水中活性菌方法的研究與應(yīng)用[D]. 仝鐵錚.清華大學(xué) 2010
[4]雙光子熒光顯微鏡的研究[D]. 王盛滿.浙江大學(xué) 2006



本文編號：3398268