【摘要】：日的：通過本研究了解我國黑龍江林區(qū)蜱中巴貝西蟲的感染情況及遺傳多樣性特征,從黑龍江林區(qū)蜱中分離培養(yǎng)到巴貝西蟲,并進(jìn)行鑒定。 方法：本研究選取我國黑龍江省牡丹江市大石溝林場和黑牛背林場為調(diào)查點(diǎn),2010年-2012年連續(xù)三年在蜱活動(dòng)高峰期4-8月用布旗法在調(diào)查點(diǎn)采集游離蜱,分類鑒定后提取DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)方法用PRIO-A/PRIO-B引物擴(kuò)增蜱中巴貝西蟲18S rRNA基因,將陽性樣本送測序,并進(jìn)行同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析,以分析我國黑龍江林區(qū)蜱中巴貝西蟲的感染情況以及該地區(qū)蜱中巴貝西蟲的基因型。 采用2011年5-7月在上述地區(qū)采集到的游離全溝硬蜱叮咬SCID小鼠,定期對叮咬后的SCID小鼠用PRIO-A/PRIO-B引物進(jìn)行PCR檢測以及形態(tài)學(xué)鑒定,對檢測陽性SCID小鼠進(jìn)行定期觀察及傳代培養(yǎng)�；蛐蛄蟹矫骅b定：用PRIO-A/PRIO-B引物擴(kuò)增巴貝西蟲18SrRNA基因,進(jìn)行同源比較和Neighbor-Joining (NJ)建樹分析。形態(tài)學(xué)方面的鑒定：包括吉姆薩染色后光學(xué)顯微鏡觀察和電子顯微鏡觀察。保存：采用持續(xù)傳代培養(yǎng)和液氮冷凍保存。 數(shù)據(jù)處理運(yùn)用SPSS16.0軟件完成,采用到的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法有χ2檢驗(yàn)和Fisher's確切概率法。 結(jié)果：2010-2012年在蜱流行季節(jié)期間采集到2841只蜱,包括全溝硬蜱(2380只)和嗜群血蜱(461只),進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)巴貝西蟲陽性共有36只,感染為1.27%。嗜群血蜱和全溝硬蜱中巴貝西蟲的感染率分別為2.82%(13/461)和0.97%(23/2380),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大石溝林場和黑牛背林場間蜱種構(gòu)成存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對蜱種構(gòu)成作為混雜因素進(jìn)行調(diào)整后,兩林場間蜱中巴貝西蟲感染率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2010年蜱中巴貝西蟲感染率為1.08%；2011年蜱中巴貝西蟲感染率為1.60%；2012年蜱中巴貝西蟲感染率為1.01%,三年間蜱中巴貝西蟲的感染率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在2010年,不同月份間巴貝西蟲感染率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。不同環(huán)境因素間蜱中巴貝西蟲感染率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。序列分析顯示我國黑龍江林區(qū)蜱中巴貝西蟲存在基因多樣性,包括Babesia sp. EU1、B. microti、B. bigemina、B. divergens、Babesia sp. hlj242-like和Babesiasp. hlj874。 通過蜱叮咬SCID小鼠實(shí)驗(yàn)成功分離到B. divergens,用PCR擴(kuò)增、吉姆薩姬染色后光學(xué)顯微鏡觀察及電子顯微鏡觀察方法進(jìn)行鑒定,證實(shí)B. divergens分離成功。 結(jié)論：通過本次研究獲得了我國黑龍江林區(qū)蜱中巴貝西蟲的感染情況,序列分析顯示該地區(qū)蜱中巴貝西蟲基因型存在多樣性。成功從蜱中分離到B. divergens,為我國巴貝西蟲病的深入研究奠定了基礎(chǔ)：
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R181.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2746004