【摘要】： 目的: 建立HPeV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法,在住院腹瀉患兒和無(wú)癥狀兒童中開(kāi)展HPeV的檢測(cè)工作,初步掌握HPeV在蘭州地區(qū)住院腹瀉患兒和無(wú)癥狀兒童中的流行特征;探討不同HPeV基因型與急性胃腸炎之間的關(guān)系,為進(jìn)一步揭示和闡明嬰幼兒重癥腹瀉的病因構(gòu)成及HPeV的病原學(xué)特點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。 方法: 研究對(duì)象選自2006年7月至2007年6月間,蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科因重癥腹瀉而住院的286名5歲以下兒童作為病例組;以及蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒童體檢中心同期進(jìn)行例行體檢的98名無(wú)臨床癥狀的5歲以下兒童作為對(duì)照組,進(jìn)行病例對(duì)照研究。蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科負(fù)責(zé)收集每位研究對(duì)象的糞便標(biāo)本并填寫相關(guān)標(biāo)本采集表后低溫運(yùn)送至中國(guó)CDC病毒所。糞便標(biāo)本經(jīng)提取核酸后通過(guò)Real-time RT-PCR檢測(cè)HPeV。從中選取一例HPeV陽(yáng)性標(biāo)本的Real-time RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄成RNA標(biāo)準(zhǔn)品,用以對(duì)HPeV核酸濃度進(jìn)行定量。使用基于VP3/VP1基因連接區(qū)的兩對(duì)引物進(jìn)行巢式RT-PCR擴(kuò)增,通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分型。使用MEGA3.1序列分析軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析和繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù);采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)研究結(jié)果和臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 在本研究中,共檢出HPeV陽(yáng)性標(biāo)本99例,其中病例組檢出84例,檢出率為29.4%(84/286);對(duì)照組檢出15例,檢出率為15.3%(15/98)。在病例組84例HPeV陽(yáng)性標(biāo)本中,HPeV1共發(fā)現(xiàn)43例,占51.2%,其余分別為HPeV3,25例(29.8%),HPeV4,4例(4.8%), HPeV6,2例(2.4%),HPeV8,1例(1.2%),未分型標(biāo)本,9例(10.7%);在對(duì)照組15例HPeV陽(yáng)性標(biāo)本中,HPeV1共發(fā)現(xiàn)8例,占53.3%,其余分別為HPeV3,3例(20.0%),HPeV4,3例(20.0%),HPeV5,1例(6.7%)。HPeV2和HPeV7均未檢測(cè)到。HPeV1感染好發(fā)于秋冬季節(jié),HPeV3感染好發(fā)于秋季;與HPeV1和HPeV3感染患兒年齡相比,HPeV4感染患兒年齡較小。病例組中71.4%(60/84)的HPeV感染患兒為混合感染,對(duì)照組中HPeV感染患兒混合感染率為13.3%(2/15),二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),輪狀病毒和人杯狀病毒為最常見(jiàn)的混合感染病毒。病毒載量最高的兩份HPeV陽(yáng)性標(biāo)本均為對(duì)照組兒童,病例組和對(duì)照組間HPeV1、3、4基因型病毒載量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。VP3/VP1基因進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn),有一份毒株(No.49330)無(wú)法被分型,它與相臨參考株的氨基酸同源性分別為89.41%和67.44%。對(duì)不同組間臨床癥狀比較發(fā)現(xiàn),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),HPeV1和HPeV3感染并不能加重腹瀉患兒的臨床癥狀。 結(jié)論: HPeV在蘭州地區(qū)腹瀉住院患兒和無(wú)癥狀兒童糞便標(biāo)本中的檢出率均較高,且有多種基因型在流行。研究結(jié)果提示,HPeV1和HPeV3可能并不是5歲以下兒童胃腸炎的致病原。因此,推測(cè)HPeV1和HPeV3可能是胃腸道(gastrointestinal,GI)中的機(jī)會(huì)性致病原,當(dāng)機(jī)體感染其他病毒時(shí)才被激活而致病。
【圖文】：

得一份 HPeV 陽(yáng)性標(biāo)本 Real-time RT-PCR 為 marker；第 1 泳道 Real-time RT-PCR 擴(kuò)增產(chǎn)鑒定和基因測(cè)序：：取 1.5mlEP 管，加入 1ul pGEM連接酶 1ul，，3ul 純化 DNA，混勻，：取 33ul DH5α 感受態(tài)細(xì)胞加入連鐘，將 EP 管放入 42℃水浴熱激 90 秒4 分鐘，每管加入 60ulLB 培養(yǎng)液體基布于已涂布 IPTG（8ul）和 X-gal（4脂平板上，將平板置于室溫至液體和提取及鑒定：從藍(lán)白斑篩選平板l氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃劇Plasmid Mini Kit 試劑盒提取質(zhì)粒,方

質(zhì)粒的酶切鑒定電泳圖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R181.3

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王永怡;陳文;王姝;張?jiān)戚x;李軍;;對(duì)諾如病毒感染性腹瀉的新認(rèn)識(shí)[J];傳染病信息;2010年01期

2 曹惠霖;丘福禧;任廣宏;;人胎腎和人胎肺細(xì)胞對(duì)腸道病毒的易感性[J];微生物學(xué)報(bào);1973年01期

3 鄧恬寧;盧鐘山;潘良文;張舒亞;呂蓉;高琴;胡永強(qiáng);;GⅠ型札幌病毒的檢測(cè)方法研究[J];檢驗(yàn)檢疫科學(xué);2008年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 程衛(wèi)霞;博卡病毒流行病學(xué)、致病性及基因進(jìn)化研究[D];蘭州大學(xué);2011年

2 斯木吉德;石灰氮對(duì)堆肥化過(guò)程中牛源致病性大腸桿菌抑制及對(duì)堆肥化效果影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 龔智翔;上海地區(qū)兒童病毒性腹瀉分子流行病學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 張緒富;抗諾如病毒藥物篩選的相關(guān)基礎(chǔ)及其有效方藥的文獻(xiàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 余瑩;人雙艾柯病毒間接ELISA和熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[D];上海交通大學(xué);2012年

2 程衛(wèi)霞;蘭州地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的流行病學(xué)研究[D];蘭州大學(xué);2008年

3 趙揚(yáng);2008-2009年蘭州地區(qū)兒童急性呼吸道感染病毒病原學(xué)研究[D];蘭州大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2530780