【摘要】：研究背景及目的 經(jīng)典免疫學(xué)理論認為新生兒免疫是以母源性抗體提供的被動免疫為主,主動免疫功能尚不成熟,這種狀態(tài)一直持續(xù)到出生后的2-3個月,即為窗口期,這一時期很難建立免疫應(yīng)答,因此大部分疫苗也就延遲接種[1, 2]。然而,有研究顯示這一時期也存在主動免疫,HIV、HSV等胞內(nèi)病原體感染引起的新生兒急性炎癥就是主動免疫存在的直接證據(jù)[3]。此外,嬰兒出生后就接種了乙肝疫苗,其應(yīng)答率和成人相近[4, 5],這就使得窗口期主動免疫是否成熟再次成為學(xué)術(shù)界爭議的焦點。動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一個有趣的現(xiàn)象為我們提供了線索:接種過疫苗的母體其子代疫苗應(yīng)答率也高,進一步研究表明母體的主動免疫通過初乳的單核細胞(PBMC)傳遞給子代[6, 7]。既然母源性PBMC在動物子代發(fā)揮了主動免疫功能,從而推測人類母源性PBMC也可能有類似作用。據(jù)此,我們提出嬰兒乙肝疫苗應(yīng)答的母嬰傳遞假說,探討經(jīng)乙肝疫苗免疫的母體,其主動免疫是否可以傳遞給子代,并試圖解釋新生兒主動免疫功能不成熟與乙肝疫苗高應(yīng)答率這一矛盾,本研究在國內(nèi)外尚屬首次。 研究方法 本研究通過動物實驗和人群研究兩方面,探討經(jīng)乙肝疫苗免疫的母體,其主動免疫是否可以傳遞給子代。 1.動物實驗部分:分別于2009年3月-2009年12月和2010年3月-2010年12月在陜西省西安市及甘肅省武威市進行兩批動物實驗。實驗開始前檢測母豬血清抗-HBs水平(ELISA方法,上�？迫A公司試劑盒)。懷孕母豬隨機分為實驗組與對照組;第一批實驗中每只母豬所產(chǎn)小豬均隨機分為免疫組與非免疫組,第二批實驗中所有小豬均為免疫組。實驗組母豬及免疫組小豬進行乙肝疫苗全程免疫(3次乙肝疫苗頸部皮下分兩點注射,20μg/次)。小豬免疫完成后設(shè)計10次采血時間點采集血清(免疫完成后1w~10w),定性(ELISA方法,上�？迫A公司試劑盒)及定量(電化學(xué)發(fā)光法,德國羅氏公司試劑盒)檢測抗-HBs水平。分析實驗組與對照組母豬所產(chǎn)小豬抗-HBs滴度及陽性率的差異。 2.人群研究部分: 2010年5月-2010年10月,在甘肅省武威市人民醫(yī)院、涼州區(qū)醫(yī)院、涼州區(qū)第三醫(yī)院及永昌鎮(zhèn)共收集母親及其嬰幼兒328對(母親既往無HBV感染史,嬰幼兒月齡為8~48月),其中三所醫(yī)院74對,永昌鎮(zhèn)254對,并進行流行病學(xué)調(diào)查及采集血液標本。進行血清HBsAg定性(ELISA方法,上�？迫A公司試劑盒)檢測,抗-HBs定性(ELISA方法,上�？迫A公司試劑盒)及定量(電化學(xué)發(fā)光法,德國羅氏公司試劑盒)檢測。采用回顧性隊列研究的方法(以母親抗-HBs滴度≥10 mIU/mL為暴露,并按嬰兒三針乙肝疫苗均及時接種來進行分層),分析抗-HBs陽性組與陰性組的母親所產(chǎn)嬰兒接受乙肝疫苗全程免疫后產(chǎn)生抗-HBs滴度的差異。 3.統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS 16.0軟件建數(shù)據(jù)庫進行雙人錄入。采用SPSS 16.0軟件和SAS 9.1軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,Excel軟件作圖。統(tǒng)計學(xué)方法主要應(yīng)用了t檢驗(或t’檢驗),χ2檢驗(或Fisher確切概率法),兩個重復(fù)測量因素的方差分析,秩和檢驗,雙變量相關(guān)分析等。 研究結(jié)果 1.動物實驗部分:納入研究的母豬為9只,生產(chǎn)小豬79只(存活53只,存活率67.1%)。①所有小豬血清(共400份)抗-HBs定性檢測結(jié)果顯示:免疫組小豬在大多數(shù)采血時間點抗-HBs為陽性,非免疫組小豬抗-HBs均為陰性;實驗組母豬所產(chǎn)小豬的抗體陽性率高于對照組,并且隨觀察時間延長,總實驗組與總對照組的免疫小豬抗體陽性率差異更加明顯。②小豬血清抗-HBs定量檢測結(jié)果顯示:單獨的每個采血時間點的小豬血清抗-HBs滴度的對數(shù)值進行比較,實驗組母豬(接種乙肝疫苗的母豬)所產(chǎn)小豬均顯著大于對照組(在免疫后4w、5w,P0.05;在免疫后1 w、2 w、3 w、6 w、7 w、8 w、9 w、10 w,P0.01);將所有采血點的定量檢測結(jié)果進行重復(fù)測量資料方差分析,發(fā)現(xiàn)實驗組母豬所產(chǎn)小豬經(jīng)乙肝疫苗免疫后產(chǎn)生抗-HBs滴度顯著大于對照組母豬所產(chǎn)小豬(P0.001);根據(jù)小豬血清抗-HBs滴度分級進行分析,仍然得到一致結(jié)果。 2.人群研究部分:共調(diào)查研究對象328對母親及其嬰幼兒(男嬰191名,女嬰137名),母親平均年齡為30±5歲,嬰幼兒平均月齡為27±10月。排除HBsAg+母親及生產(chǎn)后有乙肝疫苗接種的母親后,列入統(tǒng)計分析的研究對象為285對,其中,分層后嬰兒三針乙肝疫苗均及時接種的研究對象為158對。①母親與嬰幼兒血清抗-HBs水平檢測結(jié)果:共有56.8%(162/285)的母親和33.0%(94/285)的嬰幼兒抗-HBs滴度10 mIU/mL;43.2%(123/285)的母親和67.0%(191/285)的嬰幼兒抗-HBs滴度≥10 mIU/mL。②對嬰幼兒乙肝疫苗免疫接種史的調(diào)查顯示:第一針、第二針和第三針乙肝疫苗的及時接種率分別為96.8%(276/285),84.2%(240/285)和60.0%(171//285);3針中有≥1針延遲接種即判定為乙肝疫苗延遲接種,共127名嬰幼兒,占44.6%。③回顧性隊列研究結(jié)果顯示:分層前(285對)分析結(jié)果顯示:母親抗-HBs陽性組(抗-HBs滴度≥10 mIU/mL)與母親抗-HBs陰性組(抗-HBs滴度10 mIU/mL)的嬰幼兒抗-HBs滴度無顯著性差異。分層后研究隊列(158對)分析結(jié)果顯示:母親抗-HBs陽性組的嬰幼兒抗-HBs滴度顯著高于母親抗-HBs陰性組(P0.05);兩組嬰幼兒的抗-HBs滴度分級也有顯著性差異(P0.05)。④母乳喂養(yǎng)的調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn),94.0%的新生兒出生7天內(nèi)有母乳喂養(yǎng)(其中88.8%的嬰兒在出生3天內(nèi)即開始),并且有82.1%的新生兒母乳喂養(yǎng)量占總奶量的2/3以上。分析出生7天內(nèi)有母乳喂養(yǎng)與嬰幼兒抗-HBs滴度水平的關(guān)系,結(jié)果顯示:分層前研究隊列(285對)中,有初乳喂養(yǎng)組和無初乳喂養(yǎng)組嬰幼兒抗-HBs滴度水平無顯著性差異。在分層后研究隊列(158對)中:有初乳喂養(yǎng)的嬰兒的乙肝疫苗應(yīng)答率(69.5%)顯著高于無初乳喂養(yǎng)的嬰兒(28.6%),P0.05;兩組嬰兒抗-HBs滴度分級也有顯著性差異(P0.05)。⑤將母親生產(chǎn)前有乙肝疫苗接種史的研究對象選出,從定性和定量兩方面,分析在這部分人群中,母親抗-HBs與嬰幼兒抗-HBs的關(guān)系。結(jié)果顯示母親抗-HBs陽性組與陰性組的嬰幼兒抗-HBs滴度及滴度的分級數(shù)據(jù)均無顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論 1.國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)在哺乳動物的母代與子代之間存在著乙肝疫苗應(yīng)答的母嬰傳遞現(xiàn)象:接種過乙肝疫苗的母豬所產(chǎn)小豬經(jīng)過乙肝疫苗免疫程序后,其血清抗-HBs滴度顯著大于對照組母豬所產(chǎn)小豬。 2.通過回顧性隊列研究,從人群角度探討本課題提出的嬰兒乙肝疫苗應(yīng)答的母嬰傳遞假說:母親抗-HBs陽性組的嬰幼兒抗-HBs滴度顯著高于母親抗-HBs陰性組的嬰幼兒;有初乳喂養(yǎng)的嬰兒的乙肝疫苗應(yīng)答率顯著大于無初乳喂養(yǎng)的嬰兒。但是,對母親生產(chǎn)前有乙肝疫苗接種史的研究對象進行分析時,由于許多母親對生產(chǎn)前乙肝疫苗接種史記憶不清,導(dǎo)致樣本量偏少,還未能排除乙肝疫苗應(yīng)答的遺傳易感性對實驗結(jié)果的影響。 3.本研究的結(jié)果初步補充了新生兒乙肝疫苗免疫的理論:經(jīng)乙肝疫苗免疫的母體,其主動免疫可以傳遞給子代,從而促進子代對乙肝疫苗的免疫應(yīng)答。如果能夠?qū)⒃旋g婦女的乙肝疫苗接種及乙肝標志物的檢測加以重視,則可將新生兒乙肝疫苗免疫時間提前到懷孕母親這個層次上,進而為降低嬰兒乙肝疫苗無/弱應(yīng)答率以及制定更有效的免疫計劃奠定了理論基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R186

【引證文獻】

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1 王培生;何華;王君;陳保林;;乙型病毒性肝炎預(yù)防控制的研究進展[J];職業(yè)與健康;2014年14期

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本文編號：2419196