【摘要】：研究背景和目的 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)是臨床常見的條件致病菌,廣泛分布于自然界及健康人的皮膚、腸道和呼吸道,常感染免疫力低下患者,由它引起的院內(nèi)感染高達(dá)30%以上。由于該菌耐藥性強(qiáng),耐藥譜廣,對多種抗菌藥物表現(xiàn)出天然或獲得性耐藥性,故其所致感染可供選擇的有效抗菌藥物較少。碳青霉烯類抗生素由于其抗菌活性強(qiáng),抗菌譜廣,并且對大多數(shù)β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定,被認(rèn)為是治療PA感染最有效的藥物之一,其中亞胺培南(泰能)、美羅培南在臨床上被廣泛使用。然而由于廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用和不合理使用,使得PA的耐藥性愈來愈強(qiáng),出現(xiàn)了大量對亞胺培南和常用抗假單胞菌藥物都耐藥的多重耐藥菌株,給臨床治療帶來極大的困難。鑒于PA感染,尤其是耐亞胺培南PA感染治療困難的主要原因是其具有多重耐藥性,耐藥機(jī)制較為復(fù)雜,且隨地域和感染時(shí)期的不同而有差異；同時(shí),醫(yī)院感染日益增多,由多重耐藥菌株引起的醫(yī)院感染暴發(fā)流行時(shí)有發(fā)生,給病人、醫(yī)院和社會都帶來嚴(yán)重的損失。因此本實(shí)驗(yàn)對臨床分離的耐亞胺培南PA進(jìn)行耐藥表型、基因型和分子流行病學(xué)的研究,(1)采用微量肉湯稀釋法及聚合酶鏈反應(yīng)檢測耐亞胺培南PA的耐藥表型和常見耐藥基因型,從不同層面上發(fā)現(xiàn)廣州地區(qū)耐亞胺培南PA的多重耐藥情況和耐藥機(jī)制；(2)采用脈沖場凝膠電泳及多基因聚類分析對本地區(qū)耐亞胺培南PA進(jìn)行同源性分析,明確所感染的菌株是否同源,判斷是散在性感染還是暴發(fā)流行性感染,為預(yù)防和控制本地區(qū)醫(yī)院感染提供理論依據(jù)。方法 收集2008年1月至2009年1月從廣東省中醫(yī)院四家分院住院患者臨床標(biāo)本中分離到的384株非重復(fù)PA,其中72株為耐亞胺培南PA,所有菌株經(jīng)法國梅里埃VITEK2全自動細(xì)菌鑒定儀鑒定。(1)采用紙片擴(kuò)散法檢測384株P(guān)A對12種臨床常用抗菌藥物的藥敏情況；(2)采用微量肉湯稀釋法檢測72株耐亞胺培南PA對12種抗菌藥物的最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC);(3)采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測Ⅰ類整合子遺傳標(biāo)記intI1,外膜通道蛋白基因OprD2,A類p-內(nèi)酰胺酶基因GES、KPC,B類β-內(nèi)酰胺酶(即金屬β-內(nèi)酰胺酶)基因IMP-1、IMP-9、VIM-1、VIM-2、SIM、SPM、GIM、AIM、NDM、KHM,C類β-內(nèi)酰胺酶基因DHA、PDC,D類β-內(nèi)酰胺酶基因OXA-40、OXA-23；(4)對PCR檢測所獲得的耐藥基因結(jié)果進(jìn)行多基因聚類分析,并采用脈沖場凝膠電泳對72株耐亞胺培南PA進(jìn)行分子分型和菌株的同源性分析。結(jié)果 (1)384株P(guān)A對環(huán)丙沙星和替卡西林的耐藥率最高,均為39.9%；亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為18.8%和18.5%。 (2)藥敏檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)有72株P(guān)A對亞胺培南耐藥,且均為多重耐藥菌株,對12種抗菌藥物的耐藥率均大于50%,明顯高于所有PA對相應(yīng)抗菌藥物的耐藥率。72株耐亞胺培南PA不僅對抗菌藥物耐藥種類廣泛,而且耐藥水平高。除了美羅培南、頭孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦和頭孢哌酮/舒巴坦外,其余抗生素MIC值為耐藥折點(diǎn)四倍或四倍以上的菌株株數(shù)都超過50%。 (3)采用PCR在72株耐亞胺培南PA中成功檢測出Ⅰ類整合子遺傳標(biāo)記intI1;外膜通道蛋白基因OprD2;A類β-內(nèi)酰胺酶基因KPC；B類β-內(nèi)酰胺酶IMP-1、IMP-9、VIM-2、SIM、AIM、NDM;C類p-內(nèi)酰胺酶基因DHA、PDC。其檢出率分別為100.0%(72株)、86.1%(62株)、2.8%(2株)、9.7%(7株)、70.8%(51株)、13.9%(10株)、1.4%(1株)、2.8%(2株)、1.4%(1株)、18.1%(13株)、98.6%(71株)；GES、VIM-1、SPM、GIM、KHM、OXA-40、OXA-23等基因無陽性檢出。本實(shí)驗(yàn)?zāi)蛠啺放嗄螾A所攜帶耐藥基因的種類和數(shù)量有差異,但對抗生素的耐藥水平較一致。 (4)72株耐亞胺培南PA的脈沖場凝膠電泳圖譜可分成17基因型(A-Q),其中A型40株、B型6株、C型6株、D型5株、E型2株、F型2株,G型至Q型分別各有1株；經(jīng)過對A型至F型各型中的菌株來源進(jìn)行查證,發(fā)現(xiàn)各型中的菌株來源于不同醫(yī)院的不同時(shí)期,并未構(gòu)成暴發(fā)流行。18種基因?yàn)榉肿訕?biāo)記的聚類分析結(jié)果顯示72株耐亞胺培南PA可分三群,每群均存在克隆傳播,A群3-5-11-13-16-17-18-19-22-23-24-25-31-36-40-41-46-47-50-59-60-65-69-70-71-85號菌株為克隆傳播,2-6-7-8-9-10-12-14號菌株,1-15-33-37-38-43-45-53-55-57-62-64-78-81-83號菌株,42-44-51-58-61號菌株,29-30號菌株,28-32-34號菌株也都分別為克隆傳播；B群中48-54-66-82號菌株為克隆傳播；C群中27-V2號菌株為克隆傳播。多基因聚類分析法中同一群的菌株在脈沖場凝膠電泳被歸到不同的基因型。結(jié)論 本地區(qū)72株耐亞胺培南PA均具有多重耐藥性,且耐藥水平高,耐藥水平的高低不僅與耐藥基因的種類和數(shù)量有關(guān),而且與耐藥基因的表達(dá)情況有關(guān)。新型金屬β-內(nèi)酰胺酶SIM、AIM和NDM的出現(xiàn)說明介導(dǎo)細(xì)菌耐藥的機(jī)制日趨復(fù)雜。脈沖場凝膠電泳結(jié)果提示本地區(qū)雖未發(fā)生暴發(fā)流行,但仍存在流行優(yōu)勢克隆株。因此需積極配合醫(yī)院感染管理部門進(jìn)行耐藥性監(jiān)測,防止醫(yī)院感染和暴發(fā)流行。脈沖場凝膠電泳和多基因聚類分析兩種分子分型方法各有特點(diǎn),應(yīng)根據(jù)臨床需要選擇合適的方法。
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【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R181.3

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本文編號：2357328