【摘要】： 目的 將糞腸球菌法和芽孢法兩種模擬污染物實(shí)驗(yàn)室評價(jià)方法,運(yùn)用于管腔型器械清洗效果評價(jià),比較二者的一致性、重復(fù)性和穩(wěn)定性;建立體外生物膜生成模型,將細(xì)菌生物膜引入實(shí)驗(yàn)室清洗效果評價(jià),為制定我國管腔型器械清洗效果評價(jià)方法提供實(shí)驗(yàn)參考和數(shù)據(jù)支持。 方法 1.用糞腸球菌法和芽孢法,評價(jià)清洗液和水的清洗效果,通過比較除菌對數(shù)值(RF)、變異系數(shù)(CV)和95%可信區(qū)間(95%CI),分析兩種方法用于清洗效果評價(jià)時(shí)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。 2.根據(jù)肉眼觀察4種標(biāo)準(zhǔn)菌株培養(yǎng)24h后細(xì)胞板中膜狀物生成情況,選擇生物膜培養(yǎng)用菌;用普通光學(xué)顯微鏡(OM)、菌落計(jì)數(shù)法,確定成熟生物膜培養(yǎng)時(shí)間。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果建立培養(yǎng)模型:含銅綠假單胞菌的肉湯培養(yǎng)基于測試管(Teflon、PVC)內(nèi)以10mL/min流速每日持續(xù)流動(dòng)4h,連續(xù)培養(yǎng)6天后,形成成熟生物膜。 3.分別用兩種清洗方式(清洗液、水)和兩種清洗消毒方式(清洗液+OPA、水+OPA)處理附著有成熟生物膜的測試管(Teflon、PVC),利用普通光學(xué)顯微鏡(OM)、掃描電子顯微鏡(SEM)和菌落計(jì)數(shù)法,定性定量評價(jià)以上四種方法處理生物膜的效果。 4.用載體定量殺菌試驗(yàn)和肉湯培養(yǎng)法,對比分析0.55%鄰苯二甲醛作用于浮游細(xì)菌和生物膜細(xì)菌的區(qū)別。 結(jié)果 1.評價(jià)清洗液清洗效果,糞腸球菌法RF為4.07,芽孢法RF為4.83,二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);評價(jià)水清洗效果,糞腸球菌法和芽孢法RF分別為2.57、2.22,且差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。在評價(jià)清洗液清洗效果時(shí),糞腸球菌法CV為0.247,95%CI(3.64,4.49),芽孢法為CV 0.117,95%CI(4.58,5.07);評價(jià)水清洗效果時(shí),糞腸球菌法CV為0.334,95%CI(2.24,2.91),芽孢法CV為0.299,95%CI(1.94,2.47)。 2.培養(yǎng)6天后銅綠假單胞菌生物膜管壁粘附穩(wěn)定性好,細(xì)菌濃度達(dá)10~7cfu/cm~2,結(jié)晶紫染色OM觀察可見,生物膜厚度均勻,且不易被成片沖脫。 3.清洗效果評價(jià)中,“水洗”和“清洗液清洗”處理附著生物膜的Teflon測試管殘留菌落平均對數(shù)值分別為6.16和6.32,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);清洗消毒效果評價(jià)中,殘留菌落平均對數(shù)值分別為0.77和0.59,二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。SEM觀察可見“清洗液清洗”組殘細(xì)菌胞外基質(zhì)較少;“水+OPA”組殘留生物膜細(xì)菌多于“清洗液+OPA”組。SEM觀察結(jié)果和菌落計(jì)數(shù)結(jié)果不一致。PVC管生物膜處理結(jié)果與Teflon管類似。 4.附著浮游銅綠假單胞菌測試管,于0.55%OPA浸泡1min,細(xì)菌殺滅率達(dá)100%;附著銅綠假單胞菌生物膜測試管,于0.55%OPA浸泡7min,仍有53.8%(14/26)測試管上可回收活菌(10cfu/管～60cfu/管),另將活菌檢測呈陰性的測試管置入營養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)24h后,25%(3/12)試管肉湯呈渾濁狀。 結(jié)論 1.糞腸球菌法和芽孢法評價(jià)管腔清洗效果結(jié)果并不完全一致。芽孢法的穩(wěn)定性較糞腸球菌法好,且用于清洗效果評價(jià)同樣具有代表性,但染菌濃度需增加,測試管長度代表性還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。 2.培養(yǎng)6天的銅綠假單胞菌生物膜在測試管內(nèi)分布均勻,不易被成片沖脫,可用于清洗效果評價(jià)。 3.清洗液去除細(xì)菌胞外基質(zhì)效果優(yōu)于水;清洗消毒處理后,殘留的生物膜細(xì)菌多為無活性死菌;相比水洗處理,清洗液處理更有利于后續(xù)消毒程序進(jìn)一步去除細(xì)菌生物膜。 4.銅綠假單胞生物膜細(xì)菌比浮游菌對消毒劑(0.55%OPA)具有更強(qiáng)的耐受性。
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【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R187

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2355179