本文選題：H5N1高致病性禽流感 + 隱性感染　； 參考：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院》2008年博士論文

【摘要】： [目的意義] 高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI)(H5N1)病毒在亞洲造成成千上萬的禽類死亡,并且疫情已經波及到中東地區(qū)、歐洲和非洲50多個國家。HPAI H5N1已經跨越種屬障礙,感染人類和其他哺乳動物。據(jù)WHO統(tǒng)計截至2008年4月3日全球共確診378名病例,238人死亡,病死率高達60%以上。幾起禽流感病毒可能人間傳播的報道更加深了人們對流感世界大流行的恐慌。 全球報道的HPAI(H5N1)病例主要癥狀表現(xiàn)為嚴重的肺炎,并快速發(fā)展為急性呼吸系統(tǒng)衰竭甚至死亡。除了臨床癥狀明顯的H5N1病例外,是否存在該病毒的隱性感染病例?在確診的H5N1病例中,的確有少部分病例表現(xiàn)為非典型的禽流感癥狀,呼吸道癥狀不明顯,最終通過實驗室診斷而確診。1997年香港H5N1禽流感(HongKong Flu)期間,對H5N1確診病例的密切接觸者和禽類工作者開展的血清流行病調查顯示有部分調查對象H5N1禽流感病毒抗體反應陽性。隨著H5N1病毒的不斷進化,目前流行的禽流感病毒(clade1,2)已經與1997年H5N1禽流感病毒(clade 0)分屬于不同的分支,基因序列和抗原性表現(xiàn)出較大的差異。由此,目前流行的HPAI(H5N1)可能存在隱性感染,也可能僅出現(xiàn)嚴重臨床表現(xiàn)的感染病例。依靠被動監(jiān)測和病例上報很難發(fā)現(xiàn)隱性感染病例,需要通過主動監(jiān)測和開展流行病學調查才能達到上述目的。 高致病性禽流感作為一種新發(fā)傳染病,其檢測技術尤其是血清學檢測方法還不完善。血凝抑制試驗(hemagglutination inhition,HI)及微量中和試驗(microneutralization,MN)是流感病毒血清學診斷的常用方法。然而在禽流感病毒血清學檢測時存在敏感度、可行性和大樣本量可操作性上的局限性,需要改進后為應對人間禽流感流行做好技術準備。 另外,在流感病毒的免疫防御機制中,針對流感病毒表面蛋白的中和抗體具有重要保護作用,然而由于血凝素(hemagglutinin,HA)和神經氨酸酶(neuraminidase,NA)經常發(fā)生變異,使流感病毒逃逸宿主的體液免疫。事實上,針對病毒的T淋巴細胞,在缺乏體液免疫時,可以為機體提供具有保護意義的反應。尤其是釋放IFN-γ的T細胞(IFN-γ~+T細胞)介導的免疫應答在清除流感病毒感染中有非常重要的作用。 本研究的核心目的是通過建立并應用更適合禽流感病毒檢測的血清學方法和細胞免疫學方法,探索是否存在HPAI H5N1人間隱性感染。 [內容方法] 本研究將實施較大規(guī)模的血清流行病學調查,調查對象涉及我國不同地域,不同禽類暴露水平的健康人群和出現(xiàn)流感樣癥狀的高危人群。應用改進的禽流感病毒血清學檢測技術(HI,MN)及聯(lián)合應用其他常見的血清學檢測方法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA和Western blot,WB)從機體體液免疫角度提供實驗室證據(jù)。另外,采用酶聯(lián)免疫斑點檢測試驗(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)嘗試從禽流感病毒特異性細胞免疫水平更深入地探討人群中禽流感病毒特異性免疫應答反應。 [研究結果] 本研究通過流式細胞分揀技術篩選到富含唾液酸α(2,3)半乳糖受體的馬紅血球代替該受體相對較少的雞血球用于HI試驗。通過免疫動物和健康人血清均證實馬血球HI比雞血球HI檢測禽流感血清抗體的敏感度提高,特異度良好,可以區(qū)分抗原性不同的禽流感病毒免疫后抗體水平差異。另外,醛化處理馬血球可以解決新鮮血球不易保存,不易獲得等可實用性難題。比較甲醛、戊二醛醛化血球與新鮮馬血球HI試驗后認為,戊二醛醛化血球顯示出更穩(wěn)定的實驗結果,可以替代新鮮馬血球用于HI,加入甘油后使用期限延長。本研究建立的結合感染細胞的快速MN試驗與傳統(tǒng)觀察細胞病變(cytopathogenic effect,CPE)的MN相比較,中和抗體檢測結果一致性良好,但縮短了檢測時間,可以一次測定大量血清樣品,并完成商品化所需前期數(shù)據(jù)。 本課題的核心結果是高致病性禽流感病毒(H5N1)的血清流行病學調查,本次調查共涉及四類調查對象:1)H5N1禽流感疫情暴發(fā)地長期居住的一般健康人群(新疆,遼寧);2)H5N1禽流感感染高危人群(新疆,山東);3)流感季節(jié)流感樣癥狀病人(安徽,北京);4)無禽流感疫情暴發(fā)地長期居住的一般健康人群(山西)。其中禽流感疫情暴發(fā)地暴發(fā)時間距調查時間分別為1年(新疆)和3年(遼寧),暴發(fā)類型均為禽間人間病例同時存在。山東地區(qū)的H5N1禽流感感染高危人群來自幾家大型的禽類相關加工廠工作人員。流感季節(jié)流感樣癥狀病人分別為集中(安徽)和散發(fā)(北京)病例。全部調查對象共計1825人。調查對象基本人口學特征分布較均一。 通過采用新建立的和聯(lián)合其他多種血清學檢測方法,采用不同的H5N1病毒株檢測以及通過回訪調查,結果顯示新疆禽流感疫情暴發(fā)地長期居住的一般健康人群中可能存在隱性感染病例。ELISPOT細胞免疫檢測發(fā)現(xiàn),禽流感病毒HA肽段(包括H5,H7,H9亞型)在人群中均有一定比例的IFN-γ~+T細胞應答陽性反應,然而人流感病毒與禽流感病毒在T細胞免疫水平的交叉現(xiàn)象給禽流感特異性T細胞免疫反應的分析帶來困難,但是有可能存在H5亞型禽流感特異性T細胞免疫反應,需要進一步通過單個肽段的ELISPOT試驗驗證。然而已鑒定出有H7和H9亞型禽流感病毒特異性識別的肽庫,而且其中部分調查對象的相應血凝素血清抗體也為陽性。 另外,季節(jié)性流感病毒T細胞免疫應答隨著年齡升高而降低,其中保守肽庫(NP,M,NS,PO)誘導T細胞反應隨著年齡升高而逐漸降低,而兩個變異較快的肽庫(HA,NA)在三組人群中(20-44歲,45-59歲,大于等于60歲)誘導的T細胞水平呈現(xiàn)“∧”和“∨”型的折線變化。流感抗體水平(包括禽流感H5,H7,H9亞型和人流感H3亞型)與IFN-γ~+T細胞陽性應答反應(ELISPOT檢測結果)間無相關性。 [研究結論] 改進的禽流感病毒血清學檢測方法具有實用價值,通過進一步優(yōu)化條件,以期形成商品后可以在基層疾病預防控制部門中推廣。 根據(jù)本研究現(xiàn)有結果,認為存在高致病性禽流感(H5N1)隱性感染者,但是感染人數(shù)很低。高致病性禽流感(H5N1)隱性感染的存在關系到正確評估該病死亡率,采取適宜的監(jiān)測方案發(fā)現(xiàn)隱性感染者和制定相應預防控制措施應對流感大流行。研究這一方向不僅對我國而且對世界禽流感防控工作都有重大意義,亟需進一步加強流行病學調查和監(jiān)測,預防和控制流感世界大流行。 本課題為禽流感病毒細胞免疫研究提供了寶貴的經驗,需要更多的研究探討禽流感病毒(H5N1)特異性T細胞免疫應答,及其年齡相關的抗體反應與細胞免疫應答反應,為開發(fā)流感疫苗提供有益的數(shù)據(jù)支持。 圍繞明確的研究目的,本課題的研究角度覆蓋禽流感病毒體液和細胞兩大免疫反應,對禽流感血清抗體檢測有所技術突破,對研究禽流感病毒感染有重要的科學意義以及為制定流感大流行防控措施提供了基礎理論數(shù)據(jù)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R181.3

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 王冀邯;王槐棟;胡亞;黃紅蘭;聶李亞;李凡;;重組胸腺素α1對流感疫苗的增效作用[J];中國生物制品學雜志;2012年11期

，

本文編號：1770633