本文選題：非典型腸致病性大腸桿菌　切入點(diǎn)：黏附與脫落性大腸桿菌　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 典型和非典型腸致病性大腸桿菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)的很多特性都不相同,典型EPEC(typical EPEC,tEPEC)除了含有腸細(xì)胞脫落位點(diǎn)(locus of enterocyte effacement,LEE)毒力島外,還含有被稱為EPEC黏附因子(EPEC adherence factor,EAF)的質(zhì)粒,而非典型EPEC(atypical EPEC,aEPEC)僅含LEE毒力島,不含EAF質(zhì)粒。tEPEC是發(fā)展中國家嬰兒發(fā)生腹瀉的一個(gè)首要原因,而發(fā)達(dá)國家則比較少,似乎aEPEC是更重要的腹瀉因素。tEPEC唯一的宿主是人,aEPEC,人和動(dòng)物都可以成為宿主。aEPEC和tEPEC在遺傳特征,血清型與毒力的特性也各不相同。aEPEC和STEC(產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌)的遺傳關(guān)系更為密切,這些菌株似乎是一類新出現(xiàn)的病原體。 為了解我國不同來源中aEPEC攜帶情況,對(duì)aEPEC的致病性做進(jìn)一步的探索,本文開展了以下的研究:(1)建立快速檢測(cè)粘附與脫落性大腸桿菌的分子生物學(xué)方法;(2)對(duì)不同來源的aEPEC的感染流行情況進(jìn)行初步調(diào)查研究;(3)對(duì)aEPEC可能的相關(guān)毒力基因進(jìn)行檢測(cè);(4)利用凝膠脈沖場(chǎng)電泳(PFGE)對(duì)分離株進(jìn)行分析,追溯不同來源的aEPEC菌株間的相互關(guān)系。 一、黏附與脫落性大腸桿菌的PCR快速檢測(cè)方法的建立 利用PCR方法擴(kuò)增緊密素eaeA基因來檢測(cè)細(xì)菌的純培養(yǎng)物,10株黏附與脫落性大腸桿菌(AEEC)的PCR結(jié)果呈陽性,而其他大腸桿菌包括非致病性大腸桿菌、腸產(chǎn)毒素大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌和非大腸桿菌均未出現(xiàn)特異性的片段。對(duì)PCR擴(kuò)增的eaeA基因產(chǎn)物經(jīng)行序列測(cè)定,與參考株eaeA序列比對(duì)后一致。研究表明該P(yáng)CR體系能檢測(cè)出12pg的模板DNA。這表明PCR法對(duì)于AEEC的鑒定具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、速度快和易操作的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)本研究基于EHEC O157:H7 EDL933W株和EPEC株的eaeA、bfpA、stx1、stx2四個(gè)基因建立了多重PCR檢測(cè)方法,可以快速區(qū)分出EHEC、tEPEC和aEPEC,為EHEC和EPEC的感染和流行病學(xué)調(diào)查,提供了一種簡(jiǎn)便實(shí)用的技術(shù)手段。 二、非典型腸致病性大腸桿菌的流行病學(xué)調(diào)查 為了解我國人源和動(dòng)物源中aEPEC的攜帶情況,自2007年6月至2008年8月采集不同來源的樣本以增菌培養(yǎng)、選擇性培養(yǎng)和PCR方法進(jìn)行分離鑒定。統(tǒng)計(jì)分析表明,在808份醫(yī)院糞便樣品中,檢出AEEC陽性140份,陽性率為17.3%。住院部的感染率高于門診部的。健康人群體檢樣本2606份,檢出陽性樣品340份,陽性率為13.0%。在117份生豬屠宰場(chǎng)樣品中,47份aEPEC陽性,陽性率為40.2%。奶牛場(chǎng)樣品231份,檢出aEPEC陽性36份,陽性率15.6%。寵物醫(yī)院樣品42份,檢出陽性8份,陽性率為19.0%。家禽市場(chǎng)鴨、鵝樣品共464份,陽性23份,平均陽性率4.96%。超市樣品599份,陽性21份,陽性率3.5%。從以上結(jié)果可以看出,該類細(xì)菌具有明顯的季節(jié)性特征,夏秋季節(jié)的檢出率明顯高于冬春季節(jié),aEPEC在不同群體的流行呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化,在鴨中未檢測(cè)到陽性樣本,這可能和宿主特異性有關(guān);豬群的感染率高于人群,加強(qiáng)對(duì)豬源aEPEC的控制,有助于預(yù)防和控制人腹瀉的發(fā)生和傳播;健康人群中aEPEC攜帶率也比較高,與國外相關(guān)報(bào)道基本一致,可能部分aEPEC菌株為非致病菌或?yàn)闂l件致病菌;寵物中攜帶率亦較高,對(duì)于嬰幼兒應(yīng)避免頻繁接觸寵物;超市樣本中,生豬肉和牛肉以及蝦中檢測(cè)到陽性,可能為交叉污染或本身帶菌,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)生熟食品的加工和存儲(chǔ)管理,避免交叉污染。 三、非典型腸致病大腸桿菌可能的毒力因子檢測(cè)分析 通過對(duì)186株不同來源的aEPEC分離株的相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè),以找出毒力基因和致病性之間的聯(lián)系,為進(jìn)一步研究非典型EPEC奠定基礎(chǔ)。本研究共檢測(cè)了與致瀉大腸桿菌相關(guān)的基因escV、astA、ipaH、fyuA、estA、estB、elt,檢出率分別為:93.0%、4.3%、0%、30.0%、10.8%、0.5%、0.5%。這些菌株共鑒定出28個(gè)血清型:O11、O115、O118、O123、O132、O139、O156、O188、O38、O40、O49、O62、O63、O65、O74、O78、O80、O156、O91、O107、O88、O24、O111、O4、O145、O103、O117、O9,但大部分菌株無法鑒定,這與國外的報(bào)道也相一致;對(duì)其進(jìn)行種系發(fā)生型分類,A型占38.7%、B1型占53.8%、B2型占3.2%、D型占4.3%,發(fā)現(xiàn)我國的aEPEC分離株主要分布于A型和B1型;基因檢測(cè)顯示常見的毒力基因的攜帶率都較低,這可能和aEPEC特殊的致病機(jī)理相關(guān)。這些結(jié)果為研究aEPEC的毒力特性和致病機(jī)理積累了有用的資料。 四、不同源非典型腸致病性大腸桿菌分離株P(guān)FGE分子亞分型研究 47株不同源的非典型EPEC分離株P(guān)FGE圖譜可分為3個(gè)遺傳譜系,且我國非典型EPEC分離株中有2株分離株屬于遺傳譜系Ⅰ,15株屬于遺傳譜系Ⅱ,30株屬于遺傳譜系Ⅲ;分別占4.3%、31.9%、63.8%,主要屬于遺傳譜系Ⅱ和Ⅲ。不同源分離株在譜系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中呈交叉分布。分析表明,健康人群分離株在Ⅰ、Ⅱ譜系中占優(yōu)勢(shì);禽源在遺傳譜系Ⅲ中占優(yōu)勢(shì);而腹瀉病人主要集中在遺傳譜系Ⅱ和Ⅲ;其他分離株在各譜系中均有分布,由此推測(cè)豬群和健康人群是aEPEC的主要攜帶者。根據(jù)PFGE進(jìn)化樹圖分析,以人源EDL933 O157:H7標(biāo)準(zhǔn)株為參照,分離株C187與其親緣關(guān)系最為接近,而同一克隆亞群內(nèi)的其他分離株包含了健康人群、腹瀉人群、豬群、健康人群、禽源都有分布,從以上結(jié)果可以推斷:部分可能導(dǎo)致腹瀉的aEPEC確實(shí)與EHEC有著較高的同源性。 分子亞分型研究分析表明,PFGE可作為研究非典型腸致病性大腸桿菌來源和傳播途徑的有力工具,且PFGE分辨力高,是世界公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)。我國aEPEC不同分離株呈高度交叉分布,人源aEPEC與動(dòng)物源aEPEC密切相關(guān),可能存在著相同的傳染源,而且豬源和禽源可能是人非典型腸致病性大腸桿菌的主要傳播途徑之一。
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【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R378;R181.3

【引證文獻(xiàn)】

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1 謝潤(rùn)欣;城市污水中病原性大腸埃希氏菌三種毒力基因的定量PCR檢測(cè)方法[D];西安建筑科技大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1643750