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六安地區(qū)手足口病的病原學鑒定與流行特點
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本站編輯：admin 日期： 2010-08-31 21:58 點擊：次
【中文摘要】:
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【中文摘要】目的:采用病毒分離和RT-PCR法對臨床診斷為手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)標本進行系列檢測,以對該地區(qū)手足口病的病原進行鑒定;對經(jīng)微量中和試驗確證的EV71分離株VP1區(qū)進行核苷酸序列測定,并將測定結(jié)果與國內(nèi)外EV71毒株進行同源性分析,繪制出進化樹,為手足口病防治提供科學依據(jù),為EV71毒株基因庫及分子流行病學提供可靠資料。方法:(1)采集臨床診斷為HFMD患兒咽拭子和皰疹液標本共22份,采用病毒分離和RT-PCR兩種方法進行檢測。將待檢標本按常規(guī)要求處理后接種RD細胞和HEp-2細胞,觀察到特征性細胞病變后,收獲病毒,采用微量中和試驗和RT-PCR對分離物進行鑒定。在進行病毒分離的同時,將標本離心后,收集沉淀物進行RT-PCR。以每份標本核酸抽提物作為模板,分別用腸道病毒通用引物和EV71特異性引物進行RT-PCR擴增檢測。采用統(tǒng)計學方法對兩種標本和兩種檢測方法陽性率進行比較。(2)將經(jīng)微量中和試驗和RT-PCR擴增并測序為EV71陽性的4株分離株VP1基因進行全基因測序,所得序列與網(wǎng)上公布的我國深圳、武漢、臺灣、阜陽的EV71流行株,以及美國、韓國、新加坡、馬來西亞等國家的EV71病毒株共計15株標準基因序列的VP1蛋白基因核苷酸序列進行比對分析,構建種系進化樹,并對該基因特征與分型進行分析。(3)對病毒分離和RT-PCR檢測陽性患兒的年齡、性別和發(fā)病季節(jié)等一般情況,以及發(fā)熱、皮疹、發(fā)熱和皮疹的先后關系,有無神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥等臨床表現(xiàn)進行了較詳細的調(diào)查和分析。結(jié)果:(1)從22份咽拭子和皰疹液標本中分離出可疑腸道病毒6株,陽性率為27.3%,經(jīng)微量中和試驗和RT-PCR檢測,以及VP1全基因測序證實分離株均為EV71病毒。VP1蛋白基因全長891bp,編碼一個含297個氨基酸的蛋白,其中4株分別命名為1-4-Luan-CHN-08、14-1-Luan-CHN-08、6-6-Luan-CHN-08和19-1-Luan-CHN- 08,VP1區(qū)全基因序列與檢索到的15株EV71基因相關序列進行比對,構建種系進化樹。結(jié)果顯示:4株分離株與EV71病毒A基因型代表株BrCr的VP1區(qū)核苷酸序列同源性為89%~96%,較為接近,差異率小于12%;與EV71病毒B、C基因型代表株比較,同源性在74%~82%,差異率在18%~26%。表明六安地區(qū)這次手足口病主要病毒流行株屬于A基因型,與中國大陸其他地區(qū)流行的EV71病毒株不屬于同一基因型,至今國內(nèi)未見報道。(2)本次22份標本中,咽拭子和皰疹液分別為14份和8份,其中RT-PCR檢測為EV71陽性的10份,陽性率為62.5%(10/16);22份標本全部進行了病毒分離,EV71陽性的6份,占27.3%(6/22),兩種檢測方法的陽性率有明顯差別(χ2=6.35,P<0.05),RT-PCR檢測陽性率遠高于病毒分離陽性率。(3)經(jīng)檢測確證為EV71感染所致HFMD患兒8名,占57.1%(8/14),男女性別比為5:3;從年齡來看,RT-PCR檢測陽性的病例除兩例年齡大于4歲(分別為5歲和7歲)外,其余均為4歲以下,占75%(6/8)。HFMD發(fā)病主要集中出現(xiàn)在5月上旬。8例EV71感染者中,手足口臀膝皮膚黏膜表面都有不同程度的皮疹或皰疹,其中1例有輕度的腦炎癥狀,6例還伴有發(fā)熱癥狀,且發(fā)現(xiàn)這6例熱患兒中有3例表現(xiàn)為先出疹后發(fā)熱,1例發(fā)熱和出疹同時出現(xiàn),2例先發(fā)熱后出疹。結(jié)論:(1)本研究顯示EV71是2008年六安地區(qū)HFMD流行的主要病原體,分離株屬于A基因型,與中國大陸其他地區(qū)流行的EV71病毒株不屬于同一基因型。而A型EV71已多年未在全球流行,必須引起高度關注。(2)咽拭子標本在用RT-PCR和病毒分離進行檢測EV71時均具有較高的檢出率,推薦咽拭子應作為臨床標本采集時的首選標本。(3)EV71不僅可致手足口病,同時也可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,本研究確證為EV71感染8例患兒中,手足口臀膝皮膚黏膜表面都有不同程度的皮疹或皰疹,其中1例有輕度的腦炎癥狀,6例還伴有發(fā)熱癥狀,且發(fā)現(xiàn)這6例熱患兒中有3例表現(xiàn)為先出疹后發(fā)熱,1例發(fā)熱和出疹同時出現(xiàn),2例先發(fā)熱后出疹。
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