本文關(guān)鍵詞：利什曼原蟲的流行病學調(diào)查及基因分型研究

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【摘要】：黑熱病又稱內(nèi)臟利什曼病,是由杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani)引起、經(jīng)白蛉叮咬傳播的慢性地方性傳染病。此病是一種嚴重危害人類生命和健康的人獸共患寄生蟲病,世界流行,主要分布在中國、印度北部和中東地區(qū),是世界衛(wèi)生組織的重要目標疾病之一。 最近六年,黑熱病在西部六省(新疆、甘肅、內(nèi)蒙、陜西、山西和四川)呈散發(fā)態(tài)勢,每年新發(fā)生的病例數(shù)大致在400例左右,其中新疆、甘肅和四川的發(fā)病患者數(shù)占全國新發(fā)患者的90%以上,且有向非流行區(qū)擴散的趨勢。尤其是08年汶川地震后,大量無主犬四處流浪,成為新的傳染源。08年病人數(shù)為9例,09年上半年就出現(xiàn)6例病人。同年,喀什市伽師縣出現(xiàn)了荒漠源型黑熱病的暴發(fā)流行,給當?shù)厝嗣竦纳眢w健康造成了極大危害。因此,掌握疫區(qū)無癥狀家犬的數(shù)量并及時了解該地區(qū)人群利什曼原蟲感染現(xiàn)狀具有重要意義。 在我國,黑熱病分平原型、山丘型和荒漠源型三個不同的流行區(qū)。而且三個疫區(qū)的黑熱病在流行病學上存在著顯著差異,而病原體形態(tài)又難以區(qū)別,亟待在分子水平揭示我國利什曼原蟲種株間的差異,這對黑熱病的防治而言具有不言而喻的重要性。 本次實驗我們選用的基因靶點為利什曼原蟲動基體DNA(KinetoplastDNA,kDNA)和利什曼原蟲核糖體DNA(rDNA)ITS區(qū)段。 根據(jù)kDNA保守區(qū)合成引物RV1、RV2和K13A、K13B,對培養(yǎng)的不同地區(qū)的利什曼原蟲進行PCR,成功擴增出了利什曼原蟲保守片段。從而證明兩對引物同時應用可以用于利什曼原蟲的蟲種鑒定。 本研究組赴新疆喀什采得病人、病人家屬和鄰居血樣75份,赴四川黑水縣采得家犬血樣106份。每份分別包括抗凝血和非抗凝血,經(jīng)血樣PCR和血清ELISA得出了新疆喀什地區(qū)易感人群利什曼原蟲感染率為69.33%;四川黑水縣目前的家犬黑熱病感染率為19.05%。說明新疆喀什和四川黑水縣仍然有較高的利什曼原蟲感染率。同時,設(shè)計了黑熱病調(diào)查表對新疆喀什的采血對象進行了問卷調(diào)查,經(jīng)統(tǒng)計學軟件SPSS進行Logistic回歸分析顯示,戶外被叮咬和鄰居或家屬中有黑熱病患者是感染黑熱病的危險因素,家庭成員或鄰居中有黑熱病患者為主要傳染因素,新疆喀什地區(qū)的黑熱病有較顯著的家庭聚集現(xiàn)象。 對我國三種疫區(qū)的四個地方的杜氏利什曼原蟲分離株即山東分離株、四川分離株、新疆分離株和伽師縣分離株的ITS-1進行PCR擴增,并進行測序工作,獲得了3個我國不同疫區(qū)的DNA序列,并進行了比較分析,證明山東、四川、新疆和伽師縣分離株蟲體ITS-1序列之間存在不同程度的變異,其中伽師縣分離株蟲體的ITS-1突變最為頻繁,序列多態(tài)性現(xiàn)象最為顯著。研究中還構(gòu)建了利什曼原蟲系統(tǒng)進化樹,顯示三個疫區(qū)利什曼原蟲分離株在同源程度上存在明顯差異�；哪蛛x株與平原分離株及山丘分離株距離較遠,平原分離株與山丘分離株之間的距離相對略近一些,荒漠分離株與山丘分離株的同源性略低于荒漠分離株與平原分離株的同源性,說明黑熱病的傳播可以是通過媒介白蛉從野生動物宿主直接傳給人,這與病人直接進入荒野感染有關(guān)。 總之,本研究首先選定杜氏利什曼原蟲動基體DNA(KinetoplastDNA)為PCR擴增的基因靶點,證實引物RV1、RV2和K13A、K13B可以用于利什曼原蟲的蟲種鑒定;對黑熱病流行區(qū)四川黑水縣的家犬血液樣本和新疆喀什地區(qū)易感人群血液樣本進行經(jīng)PCR,檢測其感染率,表明四川黑水縣和新疆喀什地區(qū)黑熱病感染現(xiàn)狀仍然嚴峻;其次,對喀什地區(qū)進行了黑熱病發(fā)生的危險因素分析,表明喀什市的黑熱病具有家族聚集現(xiàn)象;這有益于使我們及時了解黑熱病感染現(xiàn)狀,為黑熱病的防治提供流行病學方面的資料。通過對ITS1片段序列的分析,從基因水平進一步說明了我國荒漠疫區(qū)、山丘疫區(qū)、平原疫區(qū)利什曼原蟲分離株之間存在的差異。從一定程度上解釋了三個疫區(qū)黑熱病在臨床癥狀、藥物治療、流行病學等方面存在的不同,進一步揭示不同分離株之間的關(guān)系,從而在根本上為我國不同類型黑熱病的防治提供了科學依據(jù)。
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R531.6;R181.3

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 侯巖巖;崔新春;康金鳳;茹孜古麗;左新平;張松;麥麗開;;新疆不同地區(qū)杜氏利什曼原蟲抗原制備及應用研究[J];地方病通報;2006年02期

2 于玲;于莉;米娜瓦;何麗娟;王露;;2005～2006年新疆喀什地區(qū)黑熱病抗體檢測結(jié)果分析[J];地方病通報;2008年03期

3 竇海平;張松;高春代;朱常忠;凱賽爾;伍衛(wèi)平;;新疆喀什市伯什克然木鄉(xiāng)黑熱病流行病學調(diào)查[J];地方病通報;2008年05期

4 凱賽爾;朱常忠;伍衛(wèi)平;竇海平;高春代;童蘇祥;;新疆喀什地區(qū)黑熱病預防與控制的思考[J];地方病通報;2008年05期

5 左新平;買買提江;阿里木;張松;開賽爾;;2003年新疆疏附及烏什兩縣黑熱病調(diào)查報告[J];地方病通報;2009年01期

6 孟波林;伊斯拉音·烏斯曼;高春代;竇海平;凱賽爾;伍衛(wèi)平;;2004～2006年新疆喀什地區(qū)黑熱病流行現(xiàn)況調(diào)查[J];地方病通報;2009年01期

7 顧燈安;金長發(fā);張儀;;利什曼病及其媒介白蛉控制的現(xiàn)狀和展望[J];國際醫(yī)學寄生蟲病雜志;2006年05期

8 粟軍;張崇唯;楊新春;;黑熱病9例并文獻復習[J];華西醫(yī)學;2008年02期

9 姚正林;周俊;蘇惠勇;鐘國梁;趙賓;;黑熱病2例報告[J];吉林醫(yī)學;2009年22期

10 張富南;肖寧;陳漪瀾;;四川省2004～2008年黑熱病流行動態(tài)與防治措施分析[J];中國熱帶醫(yī)學;2009年09期

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本文編號：1234031