本文關(guān)鍵詞：利什曼原蟲的流行病學(xué)調(diào)查及基因分型研究

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【摘要】：黑熱病又稱內(nèi)臟利什曼病,是由杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani)引起、經(jīng)白蛉叮咬傳播的慢性地方性傳染病。此病是一種嚴(yán)重危害人類生命和健康的人獸共患寄生蟲病,世界流行,主要分布在中國(guó)、印度北部和中東地區(qū),是世界衛(wèi)生組織的重要目標(biāo)疾病之一。 最近六年,黑熱病在西部六省(新疆、甘肅、內(nèi)蒙、陜西、山西和四川)呈散發(fā)態(tài)勢(shì),每年新發(fā)生的病例數(shù)大致在400例左右,其中新疆、甘肅和四川的發(fā)病患者數(shù)占全國(guó)新發(fā)患者的90%以上,且有向非流行區(qū)擴(kuò)散的趨勢(shì)。尤其是08年汶川地震后,大量無主犬四處流浪,成為新的傳染源。08年病人數(shù)為9例,09年上半年就出現(xiàn)6例病人。同年,喀什市伽師縣出現(xiàn)了荒漠源型黑熱病的暴發(fā)流行,給當(dāng)?shù)厝嗣竦纳眢w健康造成了極大危害。因此,掌握疫區(qū)無癥狀家犬的數(shù)量并及時(shí)了解該地區(qū)人群利什曼原蟲感染現(xiàn)狀具有重要意義。 在我國(guó),黑熱病分平原型、山丘型和荒漠源型三個(gè)不同的流行區(qū)。而且三個(gè)疫區(qū)的黑熱病在流行病學(xué)上存在著顯著差異,而病原體形態(tài)又難以區(qū)別,亟待在分子水平揭示我國(guó)利什曼原蟲種株間的差異,這對(duì)黑熱病的防治而言具有不言而喻的重要性。 本次實(shí)驗(yàn)我們選用的基因靶點(diǎn)為利什曼原蟲動(dòng)基體DNA(KinetoplastDNA,kDNA)和利什曼原蟲核糖體DNA(rDNA)ITS區(qū)段。 根據(jù)kDNA保守區(qū)合成引物RV1、RV2和K13A、K13B,對(duì)培養(yǎng)的不同地區(qū)的利什曼原蟲進(jìn)行PCR,成功擴(kuò)增出了利什曼原蟲保守片段。從而證明兩對(duì)引物同時(shí)應(yīng)用可以用于利什曼原蟲的蟲種鑒定。 本研究組赴新疆喀什采得病人、病人家屬和鄰居血樣75份,赴四川黑水縣采得家犬血樣106份。每份分別包括抗凝血和非抗凝血,經(jīng)血樣PCR和血清ELISA得出了新疆喀什地區(qū)易感人群利什曼原蟲感染率為69.33%;四川黑水縣目前的家犬黑熱病感染率為19.05%。說明新疆喀什和四川黑水縣仍然有較高的利什曼原蟲感染率。同時(shí),設(shè)計(jì)了黑熱病調(diào)查表對(duì)新疆喀什的采血對(duì)象進(jìn)行了問卷調(diào)查,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS進(jìn)行Logistic回歸分析顯示,戶外被叮咬和鄰居或家屬中有黑熱病患者是感染黑熱病的危險(xiǎn)因素,家庭成員或鄰居中有黑熱病患者為主要傳染因素,新疆喀什地區(qū)的黑熱病有較顯著的家庭聚集現(xiàn)象。 對(duì)我國(guó)三種疫區(qū)的四個(gè)地方的杜氏利什曼原蟲分離株即山東分離株、四川分離株、新疆分離株和伽師縣分離株的ITS-1進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并進(jìn)行測(cè)序工作,獲得了3個(gè)我國(guó)不同疫區(qū)的DNA序列,并進(jìn)行了比較分析,證明山東、四川、新疆和伽師縣分離株蟲體ITS-1序列之間存在不同程度的變異,其中伽師縣分離株蟲體的ITS-1突變最為頻繁,序列多態(tài)性現(xiàn)象最為顯著。研究中還構(gòu)建了利什曼原蟲系統(tǒng)進(jìn)化樹,顯示三個(gè)疫區(qū)利什曼原蟲分離株在同源程度上存在明顯差異�；哪蛛x株與平原分離株及山丘分離株距離較遠(yuǎn),平原分離株與山丘分離株之間的距離相對(duì)略近一些,荒漠分離株與山丘分離株的同源性略低于荒漠分離株與平原分離株的同源性,說明黑熱病的傳播可以是通過媒介白蛉從野生動(dòng)物宿主直接傳給人,這與病人直接進(jìn)入荒野感染有關(guān)。 總之,本研究首先選定杜氏利什曼原蟲動(dòng)基體DNA(KinetoplastDNA)為PCR擴(kuò)增的基因靶點(diǎn),證實(shí)引物RV1、RV2和K13A、K13B可以用于利什曼原蟲的蟲種鑒定;對(duì)黑熱病流行區(qū)四川黑水縣的家犬血液樣本和新疆喀什地區(qū)易感人群血液樣本進(jìn)行經(jīng)PCR,檢測(cè)其感染率,表明四川黑水縣和新疆喀什地區(qū)黑熱病感染現(xiàn)狀仍然嚴(yán)峻;其次,對(duì)喀什地區(qū)進(jìn)行了黑熱病發(fā)生的危險(xiǎn)因素分析,表明喀什市的黑熱病具有家族聚集現(xiàn)象;這有益于使我們及時(shí)了解黑熱病感染現(xiàn)狀,為黑熱病的防治提供流行病學(xué)方面的資料。通過對(duì)ITS1片段序列的分析,從基因水平進(jìn)一步說明了我國(guó)荒漠疫區(qū)、山丘疫區(qū)、平原疫區(qū)利什曼原蟲分離株之間存在的差異。從一定程度上解釋了三個(gè)疫區(qū)黑熱病在臨床癥狀、藥物治療、流行病學(xué)等方面存在的不同,進(jìn)一步揭示不同分離株之間的關(guān)系,從而在根本上為我國(guó)不同類型黑熱病的防治提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R531.6;R181.3

【參考文獻(xiàn)】

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