發(fā)布時(shí)間：2017-11-09 06:08

  本文關(guān)鍵詞：淡色庫(kù)蚊arrestin基因克隆及其在抗藥性中作用的初步研究

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【摘要】：淡色庫(kù)蚊（Culex pipiens pallens）是我國(guó)重要的家棲性傳病媒介，嚴(yán)重危害人類健康�；瘜W(xué)防制是控制蚊媒的有效手段。隨著殺蟲(chóng)劑的長(zhǎng)期大量使用，蚊媒對(duì)殺蟲(chóng)劑的抗性隨之發(fā)生發(fā)展。鑒定新的抗藥性基因并研究其如何參與抗藥性機(jī)制，已成為媒介抗藥性領(lǐng)域新的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)并證明，視蛋白基因(opsin)為蚊抗藥性相關(guān)基因。在進(jìn)一步研究其抗性機(jī)制中發(fā)現(xiàn)，arrestin可能也參與蚊對(duì)溴氰菊酯抗性，另有文獻(xiàn)報(bào)道，在致倦庫(kù)蚊抗氯菊酯品系和果蠅抗DDT品系中，其arrestin較敏感品系高表達(dá)。 在此基礎(chǔ)上，本課題通過(guò)PCR方法，從淡色庫(kù)蚊抗性品系中擴(kuò)增arrestin基因的ORF序列，并采用RACE法擴(kuò)增其5'和3'末端，對(duì)位拼接獲取全長(zhǎng)序列；通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析arrestin在淡色庫(kù)蚊敏感品系和抗性品系各發(fā)育階段中的表達(dá)；隨后，在蚊細(xì)胞水平先后通過(guò)轉(zhuǎn)染高表達(dá)和RNAi低表達(dá)的方法，用CCK8方法檢測(cè)arrestin對(duì)蚊細(xì)胞溴氰菊酯敏感性的影響，同時(shí)通過(guò)過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)蚊抗藥性基因CYP6A1和opsin的表達(dá)水平。 本研究獲得了淡色庫(kù)蚊arrestin基因的全長(zhǎng)cDNA序列，編碼384個(gè)氨基酸（GenBank ID: HQ833831,2011）。其推導(dǎo)的氨基酸序列與致倦庫(kù)蚊、岡比亞按蚊、黑腹果蠅的arrestin同源性分別為99％、92％、71％。熒光定量PCR結(jié)果顯示，arrestin基因在淡色庫(kù)蚊抗性和敏感品系的不同發(fā)育階段均有表達(dá)，其中在卵、蛹和成蟲(chóng)階段，抗性品系中較敏感品系高表達(dá)（p0.05）。蚊細(xì)胞高表達(dá)arrestin后，細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯的敏感性降低，CYP6A1和opsin的表達(dá)增高；蚊細(xì)胞低表達(dá)arrestin（siRNA介導(dǎo)的arrestin基因沉默）后，細(xì)胞對(duì)溴氰菊酯的敏感性增加，CYP6A1和opsin的表達(dá)降低。以上結(jié)果表明，arrestin為一新的蚊抗藥性基因，， arrestin可能通過(guò)與視蛋白一起作用，改變與擬除蟲(chóng)菊酯抗性相關(guān)的細(xì)胞色素P450的表達(dá)，參與蚊對(duì)溴氰菊酯的抗性。 本研究首次報(bào)告蚊arrestin為一新的抗藥性基因，并初步探討了arrestin參與抗藥性的機(jī)制。本研究結(jié)果為進(jìn)一步闡明抗藥性的分子機(jī)制，建立抗藥性的檢測(cè)方法和治理抗藥性提供了新的科學(xué)依據(jù)，具有重要的理論意義和潛在的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R184

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1160601