本文關鍵詞：ATP生物熒光法對消毒效果快速評價方法研究

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【摘要】：1.目的研究ATP(三磷酸腺苷)生物熒光法和菌落計數(shù)法檢測不同濃度的6種病原微生物方法之間的相關性；觀察ATP生物熒光檢測技術檢測細菌的穩(wěn)定性和重復性,以及不同消毒劑對其影響；ATP生物熒光檢測技術在現(xiàn)場清潔和消毒效果評價的應用情況,為制定以ATP生物熒光檢測技術為代表的消毒效果快速評估技術提供實驗和數(shù)據(jù)支持。2.方法2.1通過ATP生物熒光檢測系統(tǒng)與其配套的試劑盒對細菌懸液進行定量檢測6種代表性微生物大腸桿菌(腸道感染菌),金黃色葡萄球菌(化膿性菌),銅綠假單胞菌(院內感染菌),白色念珠菌(致病性真菌),龜分枝桿菌膿腫亞種(結核分枝桿菌)、枯草桿菌黑色變種芽孢(芽孢),與菌落計數(shù)法平行比較,通過統(tǒng)計圖描述兩種方法的線性關系。2.2選用ATP生物熒光檢測法連續(xù)三天重復測定同一份經(jīng)過菌落計數(shù)的(1×101cfu/ml-1×106cfu/ml)標準大腸桿菌(ATCC8099);重復三天測定同一份經(jīng)過菌落計數(shù)的(1×105cfu/ml)標準大腸桿菌(ATCC8099)的ATP含量值,通過重復測量的單因素方差分析法對相關性進行球形檢驗,并采用Geehouse-Geisser和Huynh-Feldt校正檢驗,檢驗ATP法的穩(wěn)定性。2.3通過消毒中和劑選擇實驗和細菌懸液定量殺滅實驗,篩選出符合本次實驗用的三種消毒劑(0.05%次氯酸鈉、0.55%鄰苯二甲醛、70%乙醇)的中和劑和消毒劑效果。2.4選取大腸桿菌(ATCC8099)和ATP標準品在三種消毒劑不同時間作用后,通過ATP法檢測驗證消毒劑對其影響程度。2.5使用檢測靈敏度為1×10-15mole ATP的檢測儀器和專用采樣棒比對菌落計數(shù)法評價醫(yī)院Ⅲ類區(qū)域普通住院病區(qū)經(jīng)過不同清潔方式作用后環(huán)境物體表面清潔度；使用ATP檢測靈敏度是1×10-18mole ATP臺式檢測儀比對菌落計數(shù)法評價醫(yī)院Ⅲ類區(qū)域普通住院病區(qū)后環(huán)境物體表面消毒效果,非參數(shù)Mann-Whitney檢驗對結果進行統(tǒng)計分析。2.6使用ATP檢測靈敏度是1×10-18mole ATP臺式檢測儀比對菌落計數(shù)法評價5處經(jīng)過高水平消毒劑作用的場所外環(huán)境消毒效果,都以消毒前后下降率90%為合格標準,通過配對卡方檢驗進行結果分析。3.結果3.1ATP法與菌落計數(shù)法在六種菌懸液方法比對結果菌落計數(shù)為1.0×101-1.0×106 cfu/ml的銅綠假單胞菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌在不同細菌濃度值與ATP檢測值相比,對數(shù)值之間分別存在線性關系,大腸桿菌回歸方程為回歸方程為(Y=0.831X+0.3239,R2=0.9261)；金黃色葡萄球菌回歸方程為(Y=0.9983 X-0.0633,R2=0.9913)；銅綠假單胞菌回歸方程為(回歸方程為Y=0.8736X-0.0741,R2=0.9778)；在細菌懸液菌落計數(shù)為1.0×101-1.0×105 cfu/ml范圍內白色念珠菌菌懸液菌值與ATP對數(shù)值之間呈線性關系(Y=1.4867X-2.707,R2=0.926)；在細菌懸液菌落計數(shù)為1.0×102-1.0×107 cfu/ml范圍內龜分枝桿菌菌懸液菌值與ATP值之間呈線性關系(Y=0.9639X+2.0683,R2=0.979)；在芽孢懸液菌落計數(shù)為1.0×102-1.0×105 cfu/ml范圍內芽孢懸液值與ATP對數(shù)值之間呈線性關系(Y=1.9897X-0.9677,R2=0.9211)。3.2ATP方法檢測大腸桿菌穩(wěn)定性實驗結果三天內重復測量同一份不同濃度大腸桿菌ATP值,線圖變化顯示結果值趨于一致,ATP法穩(wěn)定性比較高；同一份濃度為1×105cfu/m1的大腸桿菌標本進行10次ATP測定結果通過單因素重復測量資料的方差分析：球形檢驗結果P=0.896(0.05),Geehouse-Geisser校正后F=0.111P=0.895(0.05),Huynh-Feldt校正后F=0.111P=0.896(0.05)。3.3實驗用的消毒劑中和劑選擇實驗結果懸液定量殺菌試驗顯示經(jīng)過0.05%次氯酸鈉、0.55%的鄰苯二甲醛、70%的乙醇消毒液作用1分鐘,5分鐘,10分鐘后隨著消毒劑作用時間的延長,大腸桿菌殘留的菌懸液值與ATP值作統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),菌落計數(shù)值與ATP對數(shù)值之間呈線性關系,經(jīng)過中和劑可及時阻斷消毒劑繼續(xù)作用,不影響檢測試劑的作用。3.4實驗用的消毒劑對ATP標準品的影響實驗結果ATP檢測試劑的標準品做對照檢測值對數(shù)值為5.95；0.05%次氯酸鈉的消毒液作用1分鐘,5分鐘,10分鐘,30分鐘對數(shù)值分別為5.72、5.32、5.26、5.24、5.18；含0.55%的鄰苯二甲醛的消毒液作用作用1分鐘,5分鐘,10分鐘,30分鐘對數(shù)值分為5.65、5.61、5.53、5.57、5.48；含70%的乙醇的消毒液作用1分鐘,5分鐘,10分鐘,30分鐘對數(shù)值分別為5.71、5.77、5.60、5.64、5.61,隨著標準品與消毒劑作用時間的延長,對數(shù)值略有下降。3.5不同檢測靈敏度ATP檢測儀與菌落計數(shù)法評價醫(yī)療機構物體表面清潔度和消毒效果比對結果不同評價方法評價兩種清潔方式顯示經(jīng)過普通棉布加自來水清潔后結果檢出率要高于含0.3%復合季銨鹽成份的一次性消毒濕巾清潔方式,表明評價一致性較高。40份使用ATP手持機檢測經(jīng)過普通棉布加自來水清潔方式的結果Md值與IQR值為215RLU/100cm2和372RLU/100cm2,40份使用ATP手持機檢測經(jīng)過含0.3%復合季銨鹽成份的一次性消毒濕巾為清潔方式的Md值與IQR值分別為27RLU/100cm2和76RLU/100cm2;40份使用菌落計數(shù)法檢測經(jīng)過普通棉布加自來水清潔方式的結果Md值與IQR值38cfu/cm2、117cfu/cm2,40份使用菌落計數(shù)法檢測經(jīng)過含0.3%復合季銨鹽成份的一次性消毒濕巾為清潔方式的Md值與IQR值分別為14 cfu/cm2、71cfu/cm2。20份經(jīng)過含氯消毒劑作用前后的ATP下降值的Md值與IQR值分別為170.5(2amole/cm2)和233.75(2amole/cm2),菌落計數(shù)下降值的的Md值與IQR值分別為140cfu/cm2、102 cfu/cm2,P=0.137(0.05).3.6 ATP高靈敏度檢測儀在評價現(xiàn)場外環(huán)境消毒效果的結果5處不同場所各15份樣本消毒前和消毒后,菌落計數(shù)法和ATP法合格率通過配對卡方檢驗顯示P0.05(P=0.070)。4.結論在一定濃度范圍內菌落計數(shù)法與ATP法很高的相關性；ATP法檢測細菌的含量穩(wěn)定性較高；使用中和劑作為采樣液不影響ATP檢測效果；消毒劑ATP試劑標準品的無影響；ATP檢測技術雖然作為一種快速檢測方法,但是對于不同的檢測目的(清潔效果、消毒效果)需要正確選擇不同靈敏度的檢測儀器才能達到預期效果。
【關鍵詞】：三磷酸腺苷 消毒劑 效果 影響因素
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R187
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-14
• 第一部分 前言14-16
• 第二部分 研究內容16-40
• 一 菌落計數(shù)法與ATP生物熒光法檢測細菌方法比較16-28
• 1.1 材料和方法16-17
• 1.2 結果17-25
• 1.3 討論25-27
• 1.4 小結27-28
• 二 消毒劑使用對ATP生物熒光檢測法影響研究28-32
• 2.1 材料和方法28
• 2.2 結果28-30
• 2.3 討論30-31
• 2.4 小結31-32
• 三 ATP生物熒光技術現(xiàn)場評價清潔消毒效果研究32-40
• 3.1 材料和方法32-34
• 3.2 結果34-37
• 3.3 討論37-39
• 3.4 小結39-40
• 第三部分 本研究優(yōu)點與局限性40-41
• 第四部分 結論41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄46-48
• 綜述48-57
• 參考文獻53-57
• 作者簡歷及在學期間所取得的科研成果57

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1 景曉敏;;儀器法與菌落計數(shù)法檢測儲糧微生物敏感性的比較[J];中國現(xiàn)代藥物應用;2013年18期

2 黃海燕,王世立,韓金祥,張忠玲,陳衛(wèi)寧,杜景云;氧氟沙星噴霧劑體外殺菌實驗方法的改進[J];華西藥學雜志;2003年02期

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1 陸燁;ATP生物熒光法對消毒效果快速評價方法研究[D];浙江大學;2016年

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本文編號：1102795