本文關鍵詞：東北地區(qū)蜱傳病原多樣性調查以及檢測方法的建立

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【摘要】：蜱是一種媒介生物,可以攜帶一些病原進行傳播。 本實驗采用聚合酶鏈式反應(PCR)通過對2009年以及2010年從黑龍江的綏芬河,密山,東寧,虎林,遜克,黑河等地以及內蒙古草原和遼寧朝陽地區(qū)采集的蜱蟲攜帶的多種病原體進行檢測,發(fā)現(xiàn)立克次體、伯氏疏螺旋體、Q熱立克次體和巴通體的存在,通過測序分型,伯氏疏螺旋體基因型為B.g,立克次體為斑點熱立克次體和斑點傷寒立克次體。 09年的黑龍江共96份樣本,全溝硬蜱中檢測出伯氏疏螺旋體4例陽性,陽性百分比為4.17%； Q熱立克次體18例陽性,陽性百分比的18.75%；立克次體34例陽性,陽性百分比為35.42%,其中斑點熱立克次體17例包括西伯利亞立克次體檢測到的8例陽性,斑疹傷寒立克次體也檢測到17例,全溝硬蜱和森林革蜱都有發(fā)現(xiàn),地區(qū)除了東寧外都發(fā)現(xiàn)其攜帶；2010年的黑龍江共全溝硬蜱81只,森林革蜱52只和20只血蜱。PCR檢測發(fā)現(xiàn)攜帶3例伯氏疏螺旋體,陽性百分比為1.96%；15例Q熱立克次體,陽性百分比為9.8%；23例立克次體,陽性百分比為15.03%,其中斑點熱立克次體19例,斑疹傷寒立克次體4例；1例巴通體陽性,百分比為0.65%；內蒙古60份亞東璃眼蜱,經(jīng)檢測,發(fā)現(xiàn)5例伯氏疏螺旋體,陽性百分比為8.33%；16例Q熱立克次體以及2例西伯利亞立克次體,陽性百分比分別為26.67%和3.33%；遼寧朝陽98個樣本,發(fā)現(xiàn)了2例伯氏疏螺旋體和9例Q熱立克次體,陽性百分比分別為2.04%,9.18%；伯氏疏螺旋體及立克次體類攜帶比較廣泛,10年的蜱種發(fā)現(xiàn)了巴通體,雖然只有一例,但是巴通體在我國發(fā)現(xiàn)感染的不多,更應該加強貿(mào)易往來間的安檢,以防從國外傳來新的病原物種。Q熱立克次體在東北地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)大規(guī)模的感染情況,因此要盡可能的排除假陽性的出現(xiàn),對陽性結果進行southern雜交驗證。Southern雜交結果表明蜱蟲攜帶大量Q熱立克次體,又一次拉響了警報。 建立的熒光定量PCR方法具有良好的靈敏性,較高的特異性,靈敏度為37拷貝/μL,特異性驗證的r值為0.997,因此具備實用性。 本實驗通過對病原多樣性的監(jiān)測調查以及方法的建立,為我國邊境地區(qū)公共衛(wèi)生安全做出貢獻,掌握病原的多樣性,可以為預防做準備,對于保護人類生命財產(chǎn)安全具備重要的意義。
【關鍵詞】：多樣性 southern雜交 熒光定量PCR
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R181.3;R446.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 1.1 東北及內蒙邊境地區(qū)環(huán)境的多樣性9-10
• 1.2 蜱以及攜帶病原體的多樣性及研究現(xiàn)狀及檢測方法10-12
• 1.3 病原體生態(tài)多樣性調查的意義以及必要性12-13
• 第二章 2009年黑龍江,遼寧朝陽以及內蒙古地區(qū)蜱傳病原體調查檢測13-23
• 2.1 試驗材料13-14
• 2.1.1 2009年各地區(qū)不同種類蜱蟲采集情況13-14
• 2.1.2 儀器和試劑14
• 2.2 試驗方法14-19
• 2.2.1 DNA,RNA的提取14-15
• 2.2.2 引物的合成15-17
• 2.2.3 各地區(qū)樣本的檢測反應17-18
• 2.2.4 伯氏疏螺旋體以及立克次體PCR產(chǎn)物純化18
• 2.2.5 連接已經(jīng)純化好的PCR產(chǎn)物和載體18
• 2.2.6 感受態(tài)細胞的制備以及質粒的重組18-19
• 2.2.7 PCR產(chǎn)物測序19
• 2.3 結果與分析19-22
• 2.3.1 黑龍江2009年采集的蜱蟲檢測結果19-21
• 2.3.2 內蒙古及遼寧朝陽地區(qū)蜱蟲樣本檢測結果21-22
• 2.4 討論22-23
• 第三章 2010年黑龍江蜱蟲樣本病原體調查檢測23-29
• 3.1 試驗材料23-24
• 3.1.1 2010年黑龍江各地區(qū)蜱蟲樣本的采集情況23
• 3.1.2 儀器和試劑23-24
• 3.2 試驗方法24-26
• 3.2.1 DNA,RNA的提取24
• 3.2.2 引物的合成24
• 3.2.3 樣本DNA以及RNA的PCR檢測24-25
• 3.2.4 伯氏疏螺旋體以及立克次體PCR產(chǎn)物純化25
• 3.2.5 連接純化好的PCR產(chǎn)物和T載體25
• 3.2.6 感受態(tài)細胞的制備以及質粒的重組25-26
• 3.2.7 PCR產(chǎn)物測序26
• 3.3 結果與分析26-27
• 3.4 討論27-29
• 第四章 Q熱立克次體SOUTHERN BLOT29-33
• 4.1 試驗材料29
• 4.2 試驗方法29-31
• 4.3 結果與分析31-32
• 4.4 討論32-33
• 第五章 裂谷熱病原熒光定量PCR方法的建立33-40
• 5.1 試驗材料33
• 5.2 試驗方法33-36
• 5.3 結果與分析36-38
• 5.3.1 引物、探針的濃度以及退火溫度的優(yōu)化36-37
• 5.3.2 最佳閾值37
• 5.3.3 靈敏度的檢測37-38
• 5.3.4 特異性檢驗38
• 5.4 討論38-40
• 第六章 結論40-41
• 參考文獻41-46
• 附錄46-47
• 致謝47
• 作者簡介47-49
• 附件49

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;全國無形體及立克次體實驗室檢測技術第2期培訓班成功舉辦[J];疾病監(jiān)測;2011年06期

2 任曉波;楊蓉;鐘蓉;;蜱蟲的預防與控制措施[J];醫(yī)學信息(上旬刊);2011年08期

3 ;《微生物與感染》稿約[J];微生物與感染;2011年02期

4 王曉歡;黃豐;張智芳;;《中國人獸共患病學報》2007-2010年載文分析[J];中國人獸共患病學報;2011年07期

5 杜瑞寶;吳聚峰;;感染性疾病綜合治療的經(jīng)驗報告[J];臨床誤診誤治;2010年S2期

6 王金寶;韓洪艷;;四環(huán)素類抗生素藥物的生產(chǎn)分析[J];醫(yī)學信息(上旬刊);2011年07期

7 張敏;;醫(yī)學微生物學教學模式改革措施與效果分析[J];中國病原生物學雜志;2011年06期

8 劉莉莉;呂煥菊;王成庫;劉春梅;;抗菌藥物的合理應用探討[J];中國實用醫(yī)藥;2011年20期

9 付虎;;淺談醫(yī)學昆蟲與病媒昆蟲[J];旅行醫(yī)學科學;2011年02期

10 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王士明;;斑疹傷寒立克次體在無生命培養(yǎng)基內生長特點[A];全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2006年

2 周金林;沈杰;;蜱的功能分子研究及其應用前景[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術研討會論文集[C];2004年

3 張麗娟;張景山;付秀萍;孿明春;;我國廣東連平縣媒介蜱中檢出R.africa、R.honei近緣菌[A];全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2006年

4 姜明;劉云;范瑞青;陶忷蓉;姜國良;;皺紋盤鮑(Haliotis Discus hanna Ino)腸上皮組織中立克次體的超微形態(tài)與細胞病理學研究[A];中國動物學會全國顯微與亞顯微形態(tài)科學（細胞及分子顯微技術科學）分會第十一次學術研討會論文摘要集[C];2002年

5 李豫川;李金鳳;吳小紅;曹軍田;嚴格;王翠娥;;Q熱立克次體感染小鼠組織的超微結構觀察[A];第十三屆全國電子顯微學會議論文集[C];2004年

6 徐哲;趙敏;秦恩強;李文剛;聶為民;陳威巍;涂波;黃磊;李伯安;沈宏輝;崔寧;袁春;;河南信陽地區(qū)“發(fā)熱伴血小板減少綜合征”病例的流行病學和臨床特征分析[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學會肝病、感染病學學術年會論文匯編[C];2011年

7 張素美;;以言語障礙為主要癥狀的蜱傳森林腦炎1例[A];中華醫(yī)學會第五次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學術會議論文匯編[C];2011年

8 張彥平;李林紅;郝宗宇;;不可輕視的人獸共患病防治[A];河南省預防醫(yī)學會人獸共患病專業(yè)委員會首屆學術研討會論文匯編[C];2003年

9 杜有功;;大環(huán)內酯類抗生素臨床應用的新進展[A];浙江省藥劑學術會議論文集[C];2006年

10 何國聲;趙其平;曹杰;朱順海;朱鳴;孫國君;金軍民;葉俊華;;警犬蜱綜合防治技術研究[A];第十一次全國養(yǎng)犬學術研討會論文集[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 朱永紅　肖國強;蜱蟲之害[N];浙江日報;2010年

2 南方日報記者 趙洪杰　南都 陳楓 通訊員 易學鋒;省衛(wèi)生廳:廣東未出現(xiàn)蜱傳病例[N];南方日報;2010年

3 駐京記者 王樂;秋冬季蜱傳疾病將減少[N];文匯報;2010年

4 記者 陸葉清;蜱傳疾病可防治 診療方案制訂中[N];上海科技報;2010年

5 記者 王璐;蜱傳疾病可以治療勿須恐慌[N];大眾衛(wèi)生報;2010年

6 記者 趙潔;衛(wèi)生部:蜱傳疾病常見可防控[N];農(nóng)民日報;2010年

7 記者 張淑會;我省無蜱傳疾病類病例報告[N];河北日報;2010年

8 記者 周婷玉　單純剛 秦亞洲;衛(wèi)生部:蜱傳疾病病原體尚未確定[N];新華每日電訊;2010年

9 本報記者 鄭靈巧;“毒蟲”事件警示：蜱傳疾病不可忽視[N];健康報;2010年

10 本報記者 陳錚;蜱傳無形體病需積極進行藥物治療[N];中國醫(yī)藥報;2010年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 紀征瀚;古代“痧”及治法考[D];中國中醫(yī)科學院;2008年

2 孫長儉;氯仿—甲醇提取貝氏柯克斯體殘存組分Q熱疫苗的研制及其免疫保護性和安全性初步評價[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2007年

3 臧寧;野油菜黃單胞菌野油菜致病變種mip-like基因的鑒定及功能分析[D];浙江大學;2005年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊志紅;東北地區(qū)蜱傳病原多樣性調查以及檢測方法的建立[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2012年

2 吳志偉;河南省立克次體流行病學調查[D];山東大學;2005年

3 林英姿;斑點熱群立克次體海南株的分離和鑒定[D];江西醫(yī)學院;2001年

4 高寧;普氏立克次體120kDa表面蛋白基因的克隆與表達及重組蛋白抗原性的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

5 唐琨;黑龍江林區(qū)蜱和鼠中三種病原的攜帶狀況研究[D];中南大學;2012年

6 邊堯;嗜群血蜱Hc-23基因的克隆與原核表達研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2009年

7 周少碧;恙蟲病合并急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征12例臨床分析[D];廣西醫(yī)科大學;2007年

8 李金鳳;Q熱立克次體感染小鼠的實驗病理學研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

9 於劍;附紅細胞體的16S rDNA分類學研究及重慶市雞附紅細胞體的分子流行病學調查[D];西南大學;2008年

10 劉光遠;附尾扇頭蜱生物學特性和唾液腺分泌蛋白分析及IgG結合蛋白的識別[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2004年

，

本文編號：1093820