本文關(guān)鍵詞：東北地區(qū)蜱傳病原多樣性調(diào)查以及檢測方法的建立

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【摘要】：蜱是一種媒介生物,可以攜帶一些病原進(jìn)行傳播。 本實(shí)驗(yàn)采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)通過對(duì)2009年以及2010年從黑龍江的綏芬河,密山,東寧,虎林,遜克,黑河等地以及內(nèi)蒙古草原和遼寧朝陽地區(qū)采集的蜱蟲攜帶的多種病原體進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)立克次體、伯氏疏螺旋體、Q熱立克次體和巴通體的存在,通過測序分型,伯氏疏螺旋體基因型為B.g,立克次體為斑點(diǎn)熱立克次體和斑點(diǎn)傷寒立克次體。 09年的黑龍江共96份樣本,全溝硬蜱中檢測出伯氏疏螺旋體4例陽性,陽性百分比為4.17%； Q熱立克次體18例陽性,陽性百分比的18.75%；立克次體34例陽性,陽性百分比為35.42%,其中斑點(diǎn)熱立克次體17例包括西伯利亞立克次體檢測到的8例陽性,斑疹傷寒立克次體也檢測到17例,全溝硬蜱和森林革蜱都有發(fā)現(xiàn),地區(qū)除了東寧外都發(fā)現(xiàn)其攜帶；2010年的黑龍江共全溝硬蜱81只,森林革蜱52只和20只血蜱。PCR檢測發(fā)現(xiàn)攜帶3例伯氏疏螺旋體,陽性百分比為1.96%；15例Q熱立克次體,陽性百分比為9.8%；23例立克次體,陽性百分比為15.03%,其中斑點(diǎn)熱立克次體19例,斑疹傷寒立克次體4例；1例巴通體陽性,百分比為0.65%；內(nèi)蒙古60份亞東璃眼蜱,經(jīng)檢測,發(fā)現(xiàn)5例伯氏疏螺旋體,陽性百分比為8.33%；16例Q熱立克次體以及2例西伯利亞立克次體,陽性百分比分別為26.67%和3.33%；遼寧朝陽98個(gè)樣本,發(fā)現(xiàn)了2例伯氏疏螺旋體和9例Q熱立克次體,陽性百分比分別為2.04%,9.18%；伯氏疏螺旋體及立克次體類攜帶比較廣泛,10年的蜱種發(fā)現(xiàn)了巴通體,雖然只有一例,但是巴通體在我國發(fā)現(xiàn)感染的不多,更應(yīng)該加強(qiáng)貿(mào)易往來間的安檢,以防從國外傳來新的病原物種。Q熱立克次體在東北地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)大規(guī)模的感染情況,因此要盡可能的排除假陽性的出現(xiàn),對(duì)陽性結(jié)果進(jìn)行southern雜交驗(yàn)證。Southern雜交結(jié)果表明蜱蟲攜帶大量Q熱立克次體,又一次拉響了警報(bào)。 建立的熒光定量PCR方法具有良好的靈敏性,較高的特異性,靈敏度為37拷貝/μL,特異性驗(yàn)證的r值為0.997,因此具備實(shí)用性。 本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)病原多樣性的監(jiān)測調(diào)查以及方法的建立,為我國邊境地區(qū)公共衛(wèi)生安全做出貢獻(xiàn),掌握病原的多樣性,可以為預(yù)防做準(zhǔn)備,對(duì)于保護(hù)人類生命財(cái)產(chǎn)安全具備重要的意義。
【關(guān)鍵詞】：多樣性 southern雜交 熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R181.3;R446.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 1.1 東北及內(nèi)蒙邊境地區(qū)環(huán)境的多樣性9-10
• 1.2 蜱以及攜帶病原體的多樣性及研究現(xiàn)狀及檢測方法10-12
• 1.3 病原體生態(tài)多樣性調(diào)查的意義以及必要性12-13
• 第二章 2009年黑龍江,遼寧朝陽以及內(nèi)蒙古地區(qū)蜱傳病原體調(diào)查檢測13-23
• 2.1 試驗(yàn)材料13-14
• 2.1.1 2009年各地區(qū)不同種類蜱蟲采集情況13-14
• 2.1.2 儀器和試劑14
• 2.2 試驗(yàn)方法14-19
• 2.2.1 DNA,RNA的提取14-15
• 2.2.2 引物的合成15-17
• 2.2.3 各地區(qū)樣本的檢測反應(yīng)17-18
• 2.2.4 伯氏疏螺旋體以及立克次體PCR產(chǎn)物純化18
• 2.2.5 連接已經(jīng)純化好的PCR產(chǎn)物和載體18
• 2.2.6 感受態(tài)細(xì)胞的制備以及質(zhì)粒的重組18-19
• 2.2.7 PCR產(chǎn)物測序19
• 2.3 結(jié)果與分析19-22
• 2.3.1 黑龍江2009年采集的蜱蟲檢測結(jié)果19-21
• 2.3.2 內(nèi)蒙古及遼寧朝陽地區(qū)蜱蟲樣本檢測結(jié)果21-22
• 2.4 討論22-23
• 第三章 2010年黑龍江蜱蟲樣本病原體調(diào)查檢測23-29
• 3.1 試驗(yàn)材料23-24
• 3.1.1 2010年黑龍江各地區(qū)蜱蟲樣本的采集情況23
• 3.1.2 儀器和試劑23-24
• 3.2 試驗(yàn)方法24-26
• 3.2.1 DNA,RNA的提取24
• 3.2.2 引物的合成24
• 3.2.3 樣本DNA以及RNA的PCR檢測24-25
• 3.2.4 伯氏疏螺旋體以及立克次體PCR產(chǎn)物純化25
• 3.2.5 連接純化好的PCR產(chǎn)物和T載體25
• 3.2.6 感受態(tài)細(xì)胞的制備以及質(zhì)粒的重組25-26
• 3.2.7 PCR產(chǎn)物測序26
• 3.3 結(jié)果與分析26-27
• 3.4 討論27-29
• 第四章 Q熱立克次體SOUTHERN BLOT29-33
• 4.1 試驗(yàn)材料29
• 4.2 試驗(yàn)方法29-31
• 4.3 結(jié)果與分析31-32
• 4.4 討論32-33
• 第五章 裂谷熱病原熒光定量PCR方法的建立33-40
• 5.1 試驗(yàn)材料33
• 5.2 試驗(yàn)方法33-36
• 5.3 結(jié)果與分析36-38
• 5.3.1 引物、探針的濃度以及退火溫度的優(yōu)化36-37
• 5.3.2 最佳閾值37
• 5.3.3 靈敏度的檢測37-38
• 5.3.4 特異性檢驗(yàn)38
• 5.4 討論38-40
• 第六章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄46-47
• 致謝47
• 作者簡介47-49
• 附件49

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