本文關(guān)鍵詞：北京地區(qū)人博卡病毒流行率調(diào)查及表位研究

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【摘要】：新發(fā)病毒性傳染病嚴(yán)重危害人類的健康,影響社會、經(jīng)濟穩(wěn)定,甚至威脅國家安全,引起全球高度關(guān)注。人博卡病毒(Human bocavirus, HBoV)是2005年被發(fā)現(xiàn)的一種新病毒,可能與呼吸道感染有關(guān)。目前,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了4種HBoV(HBoV1-4),但其致病性均尚未闡明�，F(xiàn)有關(guān)于HBoV的流行情況研究大多集中于HBoV1和HBoV2,關(guān)于HBoV3和HBoV4的報道很少,且4種HBoV在人群中的流行水平尚不清楚。此外,由于HBoV之間具有較高的氨基酸同源性,它們之間的血清學(xué)交叉反應(yīng)尚不清楚,給HBoV的免疫學(xué)檢測方法研究和評價帶來困難。為此,本研究對北京地區(qū)急性呼吸道感染兒童中4種HBoV的流行率和健康人群中HBoV1、2、3的血清抗體流行率進行了研究,并對HBoV的主要抗原VP2蛋白的表位進行了篩選。主要結(jié)果如下： 一、北京地區(qū)人博卡病毒分子流行率調(diào)查 在2008年3月至2010年7月間收集在北京兒童醫(yī)院住院的患急性下呼吸道感染的患兒鼻咽洗液標(biāo)本1238份,進行HBoV通用PCR檢測。結(jié)果顯示：HBoV總檢出率為11.4%,其中HBoV1檢出率為10.6%,HBoV2為0.4%,HBoV3為0.4%。無HBoV4檢出。HBoV感染主要集中于5歲以下兒童,占HBoV陽性病例數(shù)的93.6%。與以往報道類似,與其它呼吸道病毒的共檢出率可達85.1%。HBoV檢出沒有明顯的季節(jié)差異。此外,2006年3月-2007年11月從北京兒童醫(yī)院門診收集患急性胃腸炎的366份兒童腹瀉糞便標(biāo)本,進行HBoV PCR檢測。結(jié)果顯示：HBoV總檢出率為12%,陽性病例年齡分布為2個月至24個月(中位數(shù)為9個月)。其中HBoV1檢出率為2.5%,HBoV2為9.0%,HBoV3為0.5%,無HBoV4檢出。HBoV與其它病毒共檢出率為79.5%。進化樹分析和重組分析結(jié)果顯示,HBoV3可能來源于HBoV1和HBoV2的基因重組,重組位點位于NS1基因的上游和VP1/2讀碼框中；HBoV3也可能源于HBoV1和HBo4的基因重組。本研究首次在呼吸道樣本中檢出HBoV3,為評估HBoV3的流行傳播特征和致病性提供了基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。 二、北京地區(qū)健康人群中人博卡病毒的血清流行率調(diào)查 利用桿狀病毒系統(tǒng)表達了HBoV1、2、3的病毒樣顆粒,采用CsCl密度梯度離心純化后,經(jīng)電子顯微鏡和Western blot方法進行了鑒定。利用HBoV1、2、3的病毒樣顆粒,建立了HBoV1、2、3 IgG抗體ELISA檢測方法。在此基礎(chǔ)上對642份北京地區(qū)健康人群的不同年齡組血清樣本中HBoV1、2、3 IgG抗體的流行情況進行了檢測,結(jié)果顯示：人群中普遍感染HBoV1,在0.5-5歲的兒童,HBoV1抗體的陽性率大于HBoV2和HBoV3。HBoV的陽性率隨年齡的增加而增高,20歲以后的成人HBoV1、2、3抗體陽性率均達到100%。雖然HBoV1、2、3抗體滴度隨年齡的增加而增高,但HBoV2和HBoV3抗體滴度與HBoVl相比一直處于較低水平。這些結(jié)果提示不同型的HBoV流行水平存在差異,HBoVl是主要的HBoV的流行型。此外,建立了HBoV1 IgM抗體ELISA檢測方法,具有良好的靈敏度、特異度及診斷符合率,可以用于HBoV1早期感染的血清學(xué)檢測。 三、人博卡病毒VP2表位的篩選 制備HBoV1、2、3的VP2蛋白的鼠抗血清,和HBoV1、2、3的病毒樣顆粒分別進行Western blot和ELISA檢測,結(jié)果表明HBoV1、2、3之間存在血清學(xué)交叉反應(yīng)。為了鑒定用于HBoV1、2、3血清學(xué)檢測的特異性抗原,利用噬菌體載體構(gòu)建了人博卡病毒VP2噬菌體肽庫。分別用抗HBoV1、2、3的VP2蛋白的鼠抗血清和HBoV感染陽性的人血清對噬菌體肽庫進行了生物淘洗,并使用ELISA方法篩選陽性肽,通過對陽性肽的基因測序及分析,初步獲得了2個可能含有HBoV1、2、3的共有表位和1個HBoV3的特異性表位的區(qū)域。 綜上所述,本研究首次發(fā)現(xiàn)了HBoV3核酸在急性呼吸道感染樣本中的存在；通過血清流行病學(xué)調(diào)查,揭示了不同HBoV亞型的流行水平的差異,建立了HBoV早期感染的血清學(xué)診斷方法；首次評價了HBoV1、2、3之間的血清學(xué)交叉反應(yīng)關(guān)系,并篩選出可能含有HBoV1、2、3的共有表位和HBoV3的特異性表位的區(qū)域,。本研究為深入揭示HBoV的流行特征和與致病性的關(guān)系以及研發(fā)免疫學(xué)檢測技術(shù)提供了必要的研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人博卡病毒 基因重組 病毒樣顆粒 血清學(xué)調(diào)查 表位
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R181.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-16
• 第一部分 北京地區(qū)人博卡病毒分子流行率調(diào)查16-35
• 材料16
• 方法16-20
• 結(jié)果20-33
• 討論33-34
• 小結(jié)34-35
• 第二部分 北京地區(qū)健康人群中人博卡病毒的血清抗體流行率調(diào)查35-71
• 材料35-38
• 方法38-51
• 結(jié)果51-69
• 討論69-70
• 小結(jié)70-71
• 第三部分 人博卡病毒VP2基因噬菌體肽庫的構(gòu)建及篩選71-94
• 材料71-72
• 方法72-83
• 結(jié)果83-92
• 討論92-93
• 小結(jié)93-94
• 結(jié)論94-95
• 參考文獻95-102
• 在學(xué)期間發(fā)表論文102-103
• 縮略詞表103-104
• 致謝104

【引證文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李曉樂;南京地區(qū)五歲以下兒童病毒性腹瀉的分子流行病學(xué)研究[D];南京大學(xué);2012年

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本文編號：1042893